一种菊芋组培繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组织培养领域，尤其涉及一种菊芋组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 菊芋（Helianthus tuberosus L.)，又称洋姜、鬼子姜、五星草等，是菊科 (Compositae)向日葵属的多年生草本植物，原产北美，经欧洲传入我国。菊芋块茎质地细 密、脆嫩、可食用或做酱菜，嫩叶是一种营养丰富的青饲料。由于其所具有的独特药用保健 功效和诸多的加工用途，被联合国粮农组织称为"21世纪人畜共用作物"，开发前景十分广 阔。菊芋性喜清凉干燥的气候，喜光照忌炎热，根系发达，有很强耐旱能力，并且在沙漠治理 和水土保持方面体现出良好的生态价值。
[0003] 菊芋的利用价值主要体现在产量高的块茎上。菊芋块茎肥大，淡黄褐色，肉白色。 单个的新鲜块茎重50~70g，含水量79.8%，碳水化合物16. 6%，蛋白质1 %，脂肪1%，粗 纤维0. 6%，灰分2. 8%，还含有一定量的硫胺素、核黄素、尼克酸和抗坏血酸，所含的微量 元素钙、磷、铁等为根茎类蔬菜之最。此外，菊芋还富含菊糖、葡萄糖和多聚戊糖以及维生素 C、维生素B1、维生素E、钾、镁和丙氨酸等。菊芋块茎含有丰富菊糖（inulin，又称菊粉），为 多聚果糖，不同于其它植物体内储藏的淀粉一一多聚葡萄糖。
[0004]近年来，菊芋以其极强的抗逆性，显著的保健效果，广泛的用途得到了越来越多人 的关注。菊芋相关的研宄也逐渐丰富，目前国内外相关研宄已涉及育种、栽培、生理生化、分 子生物学及综合利用等多个方面。一般情况下菊芋在大田中的繁殖方式为无性繁殖，块茎 长期生长于地下，容易受到多种病毒的侵害，会导致大量病毒病的积累，最终导致品种的劣 化和产量的逐年降低。因此建立和完善菊芋组培快繁技术是解决这一问题的重要途径。
【发明内容】
[0005] 鉴于此，有必要提供一种能够建立菊芋组培快繁的菊芋组培繁殖方法。
[0006] 一种菊芋组培繁殖方法，包括如下步骤：
[0007] 对外植体进行消毒处理；
[0008]将所述外植体接种至愈伤组织诱导培养基，在23°C-25°c下，暗培养至出现愈 伤组织，其中，所述愈伤组织诱导培养基为添加有0. 8mg/L-l. 6mg/L6-苄氨基腺嘌呤和 0? 2mg/L-0. 5mg/L萘乙酸的MS培养基；
[0009] 取所述愈伤组织，将其切成小块，转接至不定芽诱导培养基中，在23°C-25°c下， 光照培养至长出不定芽，其中，所述不定芽诱导培养基为添加有I. 〇mg/L-2.Omg/L6-节氨 基腺嘌呤和0.lmg/L-0. 3mg/L萘乙酸的MS培养基；
[0010] 将所述不定芽转移至继代培养基中，在23°c-25°c下，光照培养20-25天，形成继 代苗，其中，所述继代培养基为添加有I. 5mg/L-2.Omg/L6-苄氨基腺嘌呤的MS培养基；
[0011]将所述继代苗转入生根培养基中，在23°C-25°C下，光照培养15-20天，形成生根 的组培苗，其中，所述生根培养基为添加有0. 2mg/L-0. 6mg/L吲哚丁酸的1/2MS培养基；
[0012] 取出所述生根的组培苗，洗去所述组培苗的根部的生根培养基，栽入基质中，再移 栽至大田。
[0013] 在其中一个实施例中，所述外植体为菊芋的块茎、茎段或叶片。
[0014] 在其中一个实施例中，当所述外植体为块茎时，对所述外植体进行消毒处理的方 法如下：
[0015] 将所述块茎采用自来水冲洗，接着采用清洗液浸泡，再用自来水冲洗干净，去皮， 切去芽点部分，并用无菌水冲洗，切块后采用0. 1 %升汞灭菌7min-8min，再采用无菌水冲 洗干净。
[0016] 在其中一个实施例中，当所述外植体为茎段时，对所述外植体进行消毒处理的方 法如下：
[0017] 将所述茎段采用自来水洗净，接着采用无菌水冲洗，切段后采用0. 1 %升汞灭菌 5min-6min，接着采用无菌水冲洗干净。
[0018] 在其中一个实施例中，当所述外植体为叶片时，对所述外植体进行消毒处理的方 法如下：
[0019] 将所述叶片采用自来水洗净，接着采用无菌水冲洗，然后将所述叶片剪成条状，再 采用0. 1%升采灭菌4min-5min，接着采用无菌水冲洗干净。
[0020] 在其中一个实施例中，所述愈伤组织诱导培养基中还可添加0. lmg/L-0. 5mg/L的 2, 4-二氯苯氧乙酸。
[0021] 所述继代培养基中还可添加0.lmg/L-0. 3mg/L的萘乙酸。
[0022] 在其中一个实施例中，所述取所述愈伤组织，将其切成小块，转接至不定芽诱导培 养基中，在23°C -25°C下，光照培养至长出不定芽的步骤中，光照时间为14h/d-16h/d，光照 强度为 6001ux-15001ux〇
[0023] 在其中一个实施例中，所述将所述不定芽转移至继代培养基中，在23°C -25°C 下，光照培养20-25天，形成继代苗的步骤中，光照时间为14h/d-16h/d，光照强度为 6001ux-15001ux〇
[0024] 在其中一个实施例中，将所述继代苗转入生根培养基中，在23 °C -25 °C下，光 照培养15-20天，形成生根的组培苗的步骤中，光照时间为14h/d-16h/d，光照强度为 6001ux-15001ux〇
[0025] 在其中一个实施例中，所述基质为质量比I:3 :1的泥炭土、土壤和有机肥的混合 物或质量比1 :1的草炭土和蛭石的混合物。
[0026] 上述菊芋组培繁殖方法，可以采用菊芋不同部位作为外植体进行组培繁育，所使 用的外植体容易取得，实验操作简单易行。且通过通用的MS培养基搭配不同生长激素得到 了适宜菊芋组织培养的专用培养基，能有效地进行菊芋的组织培养，使菊芋得到快速繁殖。
【附图说明】
[0027] 图1为一实施方式的菊芋组培繁殖方法的流程图；
[0028] 图2A-2C为菊芋块茎、叶片和茎段分别接种至愈伤组织诱导培养基的图片；
[0029]图3A-3C为菊芋块茎、叶片和茎段分别得到的愈伤组织的图片；
[0030] 图4A-4C为菊芋块茎、叶片和茎段分别得到的不定芽的图片；
[0031] 图5A-5C为菊芋块茎、叶片和茎段分别得到的继代苗的图片；
[0032] 图6A-6C为菊芋块茎、叶片和茎段分别生根培养所得的根系的图片；
[0033] 图7A-7C为菊芋块茎、叶片和茎段分别所得的完整植株的图片。
【具体实施方式】
[0034] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清晰，如下结合附图及实施例，对本发 明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用 于限定本发明。
[0035] 如图1所示，一实施方式的菊芋组培繁殖方法，包括如下步骤：
[0036] S10、对外植体进行消毒处理。
[0037] 在本实施方式中，外植体为菊芋的块茎、茎段或叶片。
[0038] 当外植体为块茎时，对外植体进行消毒处理的方法如下：
[0039] 将块茎采用自来水冲洗，接着采用清洗液浸泡，再用自来水冲洗干净，去皮，切去 芽点部分，并用无菌水冲洗，切块后采用〇. 1 %升汞灭菌7min-8min，再采用无菌水冲洗干 净。
[0040] 清洗液可以为洗洁精水或洗衣粉液等。
[0041] 当外植体为茎段时，对外植体进行消毒处理的方法如下：
[0042] 将茎段采用自来水洗净，接着采用无菌水冲洗，切段后采用0. 1 %升汞灭菌 5min-6min，接着采用无菌水冲洗干净。
[0043] 当外植体为叶片时，对外植体进行消毒处理的方法如下：
[0044] 将叶片采用自来水洗净，接着采用无菌水冲洗，然后将叶片剪成条状，再采用 0. 1%升采灭菌4min-5min，接着采用无菌水冲洗干净。
[0045] 在本实施方式中，可以将叶片剪成宽为Icm的条状。
[0046] S20、将外植体接种至愈伤组织诱导培养基，在23 °C -25°C下，暗培养至出现 愈伤组织，其中，愈伤组织诱导培养基为添加有〇.8mg/L-1.6mg/L 6-苄氨基腺嘌呤 (6-Benzylaminopurine，6-BA)和 0.2mg/L_0.5mg/L萘乙酸（NAA，I-Naphthaleneacetic acid)的MS培养基。
[0047] 在其他实施例中，愈伤组织诱导培养基中还添加有0.lmg/L-0. 5mg/L的2, 4-二氯 苯氧乙酸（2, 4-Dichlorophenoxyacetic Acid，2, 4-D) 〇
[0048] MS及1/2MS培养基的组分如表1所示：
[0049] 表 1
[0050]
[0052] S30、取愈伤组织，将其切成小块，转接至不定芽诱导培养基中，在23°C -25°C下， 光照培养至长出不定芽，其中，不定芽诱导培养基为添加有l.〇mg/L-2. Omg/L 6-节氨基腺 嘌呤和0. lmg/L-0. 3mg/L萘乙酸的MS培养基。
[0053] S30中，光照时间可以为14h/d_16h/d，光照强度可以为6001ux-15001ux。
[0054] S40、将不定芽转移至继代培养基中，在23°C-25°C下，光照培养20-25天，形成继