br>【具体实施方式】
[0043]本发明提供了一种生物样本库组织的冻存方法以及用于实现该方法的生物样本库组织冻存管。以下结合附图所示实施例对本发明作进一步的说明。
[0044]实施例一
[0045]—种生物样本库组织的冻存方法，包括如下步骤:
[0046](I)、将所需的生物组织从生物体内分离；
[0047](2)、将新鲜分离的生物组织处理为合适的大小，作为生物样本库组织置于承载片上，使该生物样本库组织粘附在承载片的表面；
[0048](3)、将粘附了生物样本库组织的承载片放置于生物样本库组织冻存管中；
[0049](4)、密封该生物样本库组织冻存管，并将其以合适的方向置于低温下进行冻存。
[0050]其中，在步骤(I)中，生物组织可以为各种人体组织或动物组织，包括手术切除的组织和实验动物组织。根据实验需要，这些生物组织可以是肿瘤组织及与其配对对照的正常组织，如肠癌组织和相应的肠上皮组织等。这些生物组织还可以是肌肉组织、脂肪组织、囊壁组织、器官组织等以及分别与之相配对的肿瘤组织或癌组织。实际上，只要具有细胞组成、有结构的、经冻存可以保存的生物组织均可以使用上述的冻存方法。
[0051]在步骤(2)中，承载片由质地柔软的材料制成，优选为有颜色的软木片，更优选为棕色的软木片。
[0052]软木片的组成成分可以优选为含软木脂45wt%、木质素27wt%、纤维素12wt%、丹宁酸6wt%、錯状物5wt%W及其他5wt% (如杂质成分等)。因为软木片的质地柔软，几乎不含水分，即使在低温下也不会被冻得很硬，方便被修剪为所需的形状，从而更好地适用于冷冻切片机的样品托，所以对软木片的形状没有特别的要求，可以根据需要加工为圆形、椭圆形、多边形(如梯形或矩形)等规则形状，也可以为不规则形状，只要保证软木片能够放入生物样本库组织冻存管中，并且在软木片被放入生物样本库组织冻存管后，软木片在其内不会发生大幅度的移位即可，这样即使冻存容器内的冻存液发生扰动也不会影响到被冻存的生物样本库组织的初始冻存位置，从而避免产生由于生物样本库组织粘贴在生物样本库组织冻存管的内壁上而造成的不易被识别或者不易被取出的问题。
[0053]软木片的边缘可以开设有缺口，以便镊子等夹取装置从缺口内伸入，从而方便对软木片进行夹取。
[0054]在步骤(3)中，低温是指-20°C以下，优选为_80°C至-20°C之间。
[0055]实施例二
[0056]如图1所示，本实施例提供了一种生物样本库组织冻存管1，其包括:管身2、管盖3和承载片4。
[0057]管身2呈中空圆柱状，与管盖3可拆卸地连接。当管身2与管盖3连接在一起时，二者形成密闭的空间，以防止在冻存时外界物质(如冻存液等)进入该空间内，从而避免空间被污染。
[0058]管身2与管盖3可以通过螺纹连接、搭扣连接等各种连接方式。若管身2与管盖3通过螺纹连接形成密封连接，则可以在管身2的外侧面设外螺纹，在管盖3的内侧面设内螺纹，管身2和管盖3通过外螺纹和内螺纹的吻合进行连接。
[0059]本实施例中的管身2的内底面直径为2.2cm,内底面到管身2的开口的距离为
2.2cm0
[0060]如图2所示，承载片4为具有一定厚度的圆柱体，其可分离地置于管身2内，用于承载分离后的生物样本库组织5。承载片4的边缘与管身2的内侧壁不应贴合太紧而应留有一定距离，一方面是便于用镊子等夹取装置取出承载片4，另一方面是为了避免承载片4在管身2内发生较大幅度的移动，从而避免承载片4上的生物样本库组织5发生移位，进而避免可能发生生物样本库组织5在移位过程中粘附到管身2内侧壁的情况。因此，承载片4的底面直径以比管身2的内底面直径小0.05 - 0.5mm为宜，优选为小0.1 - 0.3mm。本实施例中承载片4的厚度为0.1cm，承载片4的底面直径为2.1cm,比管身2的内底面直径小
0.1mm，也即承载片4的底面边缘与管身2的内侧壁之间的距离L1S 0.05mm。
[0061 ] 承载片4优选为软木片，其含有以下组分:软木脂45wt %、木质素27wt %、纤维素12wt%,丹宁酸6wt %、蜡状物5wt %以及其他5wt %。此时，该软木片的抗拉强度为770N/mm2，维氏硬度为240HV，布氏硬度为228HB，洛氏硬度为20.3HRC。然而，软木片的各组分的含量也不限于上述比例，软木脂的取值可以在45±5#%的范围内，木质素的取值可以在27±3wt %的范围内，纤维素的取值可以在12±3wt %的范围内，丹宁酸的取值可以在6±3被％的范围内，蜡状物的取值可以在5±1被％的范围内，其他(如杂质成分)的取值可以在5±1被％的范围内，需要保证软木脂、木质素、纤维素、丹宁酸、蜡状物和杂质成分的重量百分比之和为10wt%。
[0062]选择软木片作为承载片4来承载生物样本库组织5的原因如下:
[0063](I)、由于软木片略有吸水性，而新鲜分离的组织含有一定的水分，当新鲜分离的组织被置于软木片上时，新鲜分离的组织很容易以一定的形态粘附在软木片上，即使发生轻微的晃动也不会改变位置，从而有效避免了承载有组织的软木片在放入生物样本库组织冻存管时因发生晃动而导致的组织粘附到生物样本库组织冻存管的管壁上或沉入底部的情况的发生。
[0064](2)、在组织被冻存之前，操作者可以事先将组织以所需的形态、角度或方向粘附在软木片上，使组织直接以该种形态被冻存。此后，当需要使用该组织作冰冻切片时，直接快速将软木片取出，并将软木片的没有粘附有组织的一侧固定在冰冻切片机的样品托6 (如图3和图4所示)上，然后用预冷过的冷冻包埋液直接包埋仍然处于冻存状态的组织，即可制成冰冻组织样品。在制成的冰冻组织样品中，组织仍然能以被冻存时的原始状态存在，不需要每次经历先解冻，再调整组织的形态，然后包埋，接着继续冻存的反复冻融过程，在提高样品处理效率的同时也能够最大限度地降低反复冻融对组织造成的损害。
[0065](3)、由于软木片在低温下不容易与管身2冻结在一起，使用镊子等夹取装置可以很容易地取出软木片，并同时取出粘附在软木片上的生物组织。
[0066](4)、由于软木片在低温下也不会冻得很硬，被取出后很容易被修剪为所需的形状，以适应于各种尺寸的样品托。
[0067]本实施例中的承载片4的底面为圆形，然而，承载片4也可以根据实际需要制成其它形状，例如底面可以为椭圆、矩形、梯形等，甚至是其它不规则形状。
[0068]实施例三
[0069]实施例二中的生物样本库组织冻存管每管只能冻存一个生物样本库组织。一方面，当需要大量冻存生物样本库组织时，就需要等数量的生物样本库组织冻存管，可能提高冻存的成本；另一方面，因为每管只能冻存一个组织，在作冰冻切片时，需要不断地打开生物样本库组织冻存管以取出其中冻存的组织，费时费力，不利于提高冰冻切片效率。
[0070]为了解决上述问题，本实施例的生物样本库组织冻存管在结构上进行了改进，使得一个生物样本库组织冻存管能够同时冻存多个组织，这样，在制作冰冻切片时，只要关闭或打开生物样本库组织冻存管一次，便能取出多个组织，从而提高了冰冻切片的制片效率。
[0071]如图5所示，生物样本库组织冻存管的管身7的内侧壁上沿管身7的轴向可以设置至少一个用于支承承载片的支承部8。不同的支承部8设于内侧壁的不同水平高度处。相邻两个支承部8在沿管身的轴向上的间距可以相等也可以不等。生物样本库组织冻存管的其他结构同实施例二。
[0072]支承部8包括至少两个在管身7的内侧壁的同一水平高度处的圆周上呈均匀分布的支承台9。将支承台9设置为在管身7的内侧壁的同一水平高度处的圆周上呈均匀分布是为了将承载片的重力