一种罗非鱼耐寒性能的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种罗非鱼耐寒性能的测定方法，属于罗非鱼耐寒品种选育技术领 域。
【背景技术】
[0002] 罗非鱼原产于非洲，属暖水性鱼类，具有生长快，适应性强，肉质鲜嫩的特点，是我 国主导养殖淡水品种，对我国出口创汇具有重要意义。但罗非鱼耐寒能力较差，其致死温度 为7~12°C。近年来，由于环境的不断恶化，极端天气增多，低水温持续时间较长，罗非鱼在 越冬期间被冻死的事件时有发生，给罗非鱼养殖业造成了巨大的经济损失，严重阻碍了罗 非鱼产业持续健康的发展。因此，加快培育耐寒型罗非鱼品种至关重要。其中，选育耐寒良 种，利用罗非鱼自身的遗传因素来抵御低温胁迫是最根本的途径。而耐寒型罗非鱼品种选 育的关键则是罗非鱼品种耐寒性能的测定。
[0003]目前，测定罗非鱼不同品种耐寒性能强弱的方法是应用低温胁迫试验，以罗非鱼 的低温半致死温度和死亡率为指标来评价其耐寒性能。但不同研究报道的低温胁迫试验没 有一个固定的降温和升温的模式，不同试验设计的暂养时间、起始温度、降温速度和最低温 度等参数不同，时间较长，获得罗非鱼耐寒能力的研究结果差异较大，试验可重复性差，得 到的罗非鱼耐寒性能指标进行耐寒能力的比较，准确性较差。因此，如何对不同品种罗非鱼 耐寒性能准确、快速的测定和评价，成为生产中亟待解决的技术问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种罗非鱼耐寒性能的测定方法。本 发明的测定方法简便易行，准确可靠，能够有效测定与评价罗非鱼的耐寒性能。
[0005] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种罗非鱼耐寒性能的测定方法，包 括如下步骤：
[0006] (1)罗非鱼的选择：
[0007] 选择年龄一致、体质量为5~100g的罗非鱼，先暂养5~10d，即得试验用罗非鱼；
[0008] (2)低温胁迫致死处理：
[0009] 将试验水域的起始水温设为20~25°C，以0. 1~0. 3°C/3h的降温速度，降温至 步骤（1)所有试验用罗非鱼死亡，并且控制最终水温为7~9°C;
[0010] (3)计算低温半致死温度：
[0011] 统计步骤（2)试验用罗非鱼死亡的温度和数量，计算得到存活率，其计算公式为： 存活率=(试验鱼总数-低温死亡数）/试验鱼总数X100 %，然后以温度为自变量X，存活 率为应变量Y，表达式为Y=AAl+BeTkx)，做温度与存活率的Logistic曲线，曲线拐点所 对应的温度即为低温半致死温度；
[0012] (4)回温处理：
[0013] 将步骤⑵降温后能将试验用罗非鱼致死的试验水域，以0. 2~0. 4°C/3h的升温 速度，回温至20~25°C，将回温后能够存活的罗非鱼再养殖5~lOd;
[0014] (5)计算低温死亡率：
[0015] 统计步骤（2)低温胁迫致死处理和步骤（4)回温处理过程中，试验罗非鱼死亡数 的总和，计算低温死亡率，其计算公式为：
[0016] 低温死亡率=(低温死亡数+回温后死亡数）/试验鱼总数X100% ;
[0017] (6)耐寒性能评价：
[0018] 根据步骤（3)所得低温半致死温度和存活率，以及步骤（5)所得低温死亡率，来评 价耐寒性能，即低温半致死温度越低，低温死亡率越低，存活率越高，则耐寒性能越强。
[0019] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0020] 进一步，步骤（1)所述罗非鱼选自国家级罗非鱼良种场，所述罗非鱼的品种或家 系已知。
[0021] 进一步，步骤（2)所述的低温胁迫降温模式采用室内人工垂直降温。
[0022] 进一步，步骤（3)所述的回温模式采用室内人工垂直升温。
[0023] 本发明的有益效果是：
[0024] (1)本发明确定了罗非鱼耐寒性能测定的相关技术参数，如试验用罗非鱼的规格 和暂养时间，试验水域的起始温度、垂直降温速度和最终温度，回温时的垂直升温速度和最 终温度等，为今后开展罗非鱼耐寒性能的研究奠定了基础。
[0025] (2)本发明实现了罗非鱼耐寒性能测定设施条件标准化，避免了实验鱼的应激反 应，而且实验时间较短。
[0026] (3)本发明的测定方法简便易行，准确可靠，能够有效测定与评价罗非鱼的耐寒性 能。
【附图说明】
[0027] 图1为本发明的实施例1的3个品种的罗非鱼低温胁迫存活率与水温的关系曲 线。
[0028] 附图中，各标号所代表的部件列表如下：
[0029]A、美国品系奥利亚罗非鱼，B、埃及品系尼罗罗非鱼，C、杂交尼奥罗非鱼。
【具体实施方式】
[0030] 以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发 明，并非用于限定本发明的范围。
[0031] 实施例1
[0032] (1)罗非鱼的选择：
[0033] 从国家级广西南宁罗非鱼良种场分别选择30日龄、体质量为5.5±0.40g的美国 品系奥利亚罗非鱼（以下简称"美国奥利亚"）、埃及品系尼罗罗非鱼（以下简称"埃及尼 罗"）以及二者杂交尼奥罗非鱼（以下简称"杂交尼奥"）各180尾，先在lmXlmXlm大缸 暂养7d后，采用单因子试验随机分为3个试验组，每个试验组180尾，每组设3个重复，每 个重复60尾，分别放入9个规格为50cmX60cmX80cm的制冷水族箱，经24h环境适应后， 即得试验用罗非鱼。
[0034] (2)低温胁迫致死处理：
[0035] 将制冷水族箱的起始水温设为20°C，采用室内人工垂直降温，以0.2°C/3h的降温 速度，降温至最终水温8°C，直到步骤（1)所有试验用罗非鱼死亡。
[0036] (3)计算低温半致死温度：
[0037] 统计步骤（2)试验用罗非鱼死亡的温度和数量，计算得到存活率，其计算公式为： 存活率=(试验鱼总数-低温死亡数）/试验鱼总数X100 %，然后以温度为自变量X，存 活率为应变量Y，表达式为Y=AAl+BeTkx)，做温度与存活率的Logistic曲线，曲线拐点 所对应的温度即为低温半致死温度；存活率一温度的散点图和拟合曲线绘制的绘制使用 Matlab7. 0. 1 ;
[0038] 美国奥利亚罗非鱼、埃及尼罗罗非鱼和杂交尼奥罗非鱼的模型参数和半致死温度 如表1所示，低温胁迫存活率与水温的关系模型曲线如图1所示。
[0039] 表1 3个罗非鱼品种的低温胁迫致死曲线参数和半致死温度
[0040]
[0041] (4)回温处理：
[0042] 采用室内人工垂直升温，将步骤（2)降温后能将试验用罗非鱼致死的试验水域， 以0. 4°C/3h的升温速度，回温至20°C，将回温后能够存活的罗非鱼再养殖7d。
[0043] (5)计算低温死亡率：
[0044] 统计步骤（2)低温胁迫致死处理和步骤（3)回温处理过程中，试验罗非鱼死亡数 的总和，计算低温死亡率，其计算公式为：
[0045] 低温死亡率=(低温死亡数+回温后死亡数）/试验鱼总数X100 %，
[0046] 美国奥利亚罗非鱼、埃及尼罗罗非鱼和杂交尼奥罗非鱼的低温死亡率如表2所 不。
[0047] 表2 3个罗非鱼品种的低温胁迫死亡率
[0048]
[0049] (6)耐寒性能评价：
[0050] 根据步骤（3)所得低温半致死温度和存活率，以及步骤（5)所得低温死亡率，来评 价耐寒性能，即低温半致死温度越低，低温死亡率越低，存活率越高，则耐寒性能越强。
[0051] 美国奥利亚罗非鱼、埃及尼罗罗非鱼和杂交尼奥罗非鱼的半数死亡温度分别为 7. 8°C、8. 8°C和8. 2°C，低温死亡率分别为53. 76%、58. 23%和56. 01%，耐寒性能强弱顺序 为美国奥利亚罗非鱼>杂交尼奥罗非鱼>埃及尼罗罗非鱼。
[0052] 对3个品种的半致死温度和死亡率进行相关分析，结果显示各品种的半致死温度 和死亡率相关性极显著。杂交尼奥罗非鱼的低温半致死温度与奥利亚罗非鱼的低温半致 死温度、尼罗罗非鱼的低温半致死温度和低温死亡率有显著的正相关性，而与奥利亚罗非 鱼的低温死亡率相关性不显著；杂交尼奥罗非鱼的低温死亡率跟母本低温半致死温度和低 温死亡率均呈极显著正相关，与父本低温半致死温度和低温死亡率均呈显著正相关，如表3 所示。由此可见，尼奥罗非鱼耐寒性能与亲本高度相关，其耐寒性能很大程度上取决于亲本 耐寒性能的强弱，为此可以通过对亲本的筛选来提高子代的耐寒性能，而母本与子代的相 关性较父本要高，罗非鱼耐寒能力可能还通过细胞质遗传，加强对母本的筛选可获得更快 的遗传进展。
[0053] 表3 3个罗非鱼品种耐寒性能相关分析
[0054]
[0055] 注：①LT50为低温半数死亡温度，MR为相关系数；
[0056] ②*表示差异显著（Ρ〈0· 05)，μ表示差异极显著（Ρ〈0· 01)。
[0057] 实施例2
[0058] (1)罗非鱼的选择：
[0059] 从国家级广西南宁罗非鱼良种场分别选择年龄一致、体质量为100±1. 60g的零 世代（P。）、一世代（PJ和二世代（P2)的美国奥利亚罗非鱼（以下简称"美国奥利亚"）各 45尾，先在lmXlmXlm大缸暂养5d后，采用单因子试验随机分为3个试验组，每个试验组 45尾，每组设3个重复，每个重复15尾，分别放入9个规格为50cmX60cmX80cm的制冷水 族箱，经24h环境适应后，即得试验用罗非鱼。
[0060] (2)低温胁迫致死处理：
[0061] 将制冷水族箱的起始水温设为22°C，采用室内人工垂直降温，以0.3°C/3h的降温 速度，降温至最终水温7°C，直至步骤（1)所有试验用罗非鱼死亡。
[0062] (3)计算低温半致死温度：
[0063] 统计步骤（2)试验用罗非鱼死亡的温度和数量，计算得到存活率，其计算公式为： 存活率=(试验鱼总数-低温死亡数）/试验鱼总数X100 %，然后以温度为自变量X，存 活率为应变量Y，表达式为Y=AAl+BeTkx)，做温度与存活率的Logistic曲线，曲线拐点 所对应的温