专利名称：组织工程食用肉及其生产方法
技术领域：
本发明涉及生产和获得食用肉产品。更具体地，本发明是关于组织工禾呈食用肉(tissue engineered meat for consumption )。
技术背景肉产品如牛肉、猪肉、羊肉、家禽或鱼，是食品消费中受欢迎的产品。 目前，肉产品都是取自动物，这种生产方法非常低效，因为农业生产中全 部粮食的很大一部分被用于饲养动物，而不是被人类食用。例如，在美国， 家畜祠料约占全部的小麦、玉米以及其它粮食生产的70%。此外，为了生 产一磅牛肉，动物饮用和种植家畜饲料需要数千磅的水。同时，据统计， 全世界超过八亿人营养不良，并且每天有五万人被饿死。目前的肉类生产方法还会危害环境。热带雨林正在以培育一磅牛肉大 约需要消耗500平方英尺热带雨林的速度减少。同样地，用于捕捞海洋生 物的现代化技术非常有效，以致于海洋和湖泊都被过度捕捞。曾经很普通 的物种现在已经频临灭绝或者已经灭绝。为解决这些问题，目前科研工作的重点是集中在提高繁殖或培育家畜 的效率上。例如，使用生长激素来加快家畜生长，这样可以消耗较少的粮 食和水。生长激素通常被注入家畜，但也已开发出了新的生长激素引入方 法，其采用基因工程技术如转基因动物或克隆动物。然而，目前的肉类生 产方法仍需要水、粮食以及土地来饲养家畜。目前的肉类生产方法的另一个问题是食品污染问题。平均起来，每年 因为摄入的某些东西而导致美国人均生病一次并且有9000人死亡。为了控 制食品污染，政府目前的策略是在加工过程中检验肉。然而，美国农业部 和美国食品药物管理局很少调控产生此类病原体的农场，因为它们缺少调 控农场的权力。然而，除了埃布氏菌(￡. co/W/56 ://7)之外，其它危险 细菌被合法地认为是生肉中"固有的"。然而，"固有细菌"中的其中两种—— 弧形杆菌和沙门氏菌——占由食用肉和家禽导致的所有疾病的80%和所有 死亡的75%。例如据报道，在家禽业的沙门氏菌检验中，大约25%的肉用仔鸡和45% 的庭院鸡只呈阳性。疾病控制中心估计，所有鸡只的70-90%感染了弧形杆 菌。弧形杆菌感染导致抽筋、血痢疾以及发烧。在美国，每年弧形杆菌感 染造成大约800人死亡。弧形杆菌的感染还可能导致格林-巴利综合症，这 种疾病需要特护治疗几个星期。随着更多的抗生素抗药性菌林的产生，由 这些细菌引起的严重疾病和死亡的发生频率将更加增多。这使许多科学家 开始对继续使用抗生素作为家畜伺料添加剂产生疑问。因此，需要提供一种比现有生产方法更有效、更安全、更健康的食用 肉产品生产方法。发明内容本发明是关于组织工程食用肉产品以及用于生产这种肉产品的方法。 在一种具体实施方式
中，本发明的肉产品包括体外(exvivo)培育的肌肉 细胞。这些肌肉细胞可以4皮培育和附着到一个支撑结构上，而且肌细胞可 以源自任何的非人类细胞。在一种优选的具体实施方式
中，本发明的肉产 品充分地远离任何有害孩i生物或寄生物污染。本发明的另 一种具体实施方 式涉及一种包括肌肉细胞和其它细胞如脂肪细胞和/或软骨细胞的肉产品， 这些其它细胞与肌肉细胞一起在体外培育。在又一种具体实施方式
中，本
发明的肉产品包括曾经;波暴露于电流或振荡电流(electric or oscillating current)的月几肉细月包。
具体实施方式
通常，肉产品取自动物的肌肉。屠夫相应地切割牛肉、家禽、羊肉、 鱼或猪肉以便作为牛排、鸡胸脯、羊肉片、鱼柳、猪排等出售。肉产品还 包括肉产品的派生物，如可以加工成肉丸、汉堡肉饼、鱼丸、香肠、意大 利腊肠(salami)、大红肠(bologna)、火腿等。肉产品还可以包括肌肉组 织或者被风干或干缩的肉，如牛肉干。本发明的一种具体实施方式
包括一种生产可食用的肉产品的方法。该 方法可以包括在体外(in vitro)培养肌肉干细胞，并在体外(ex vivo )将 这些细胞分化成具体的肌肉细胞类型，如骨骼肌肉细胞或平滑肌肉细胞。肌 肉细胞可以来源于任何被人类食用的非人类动物，如哺乳动物(例如牛、 水牛、猪、羊、鹿等)、鸟类(例如鸡、鸭、驼鸟、火鸡、雉鸡等)、鱼 类(例如旗鱼、鲑鱼、金枪鱼、海妒、鳟鱼、鲶鱼等)、无脊推动物(例 如龙奸、螃蟹、坏、蛤、牡蛎、贻贝、海胆等)、爬行动物(例如蛇、聘 鱼、海龟等)以及两栖动物(例如青蛙)。优选地，肌肉细胞来源于可以 生出肌肉细胞、脂肪细胞、骨细胞以及软骨细胞的多能胚胎间充质干细胞 (pluri-potent embryonic mesenchymal stem cells)。月几肉细月包还可以来源于 全能胚胎干细胞(loti-potent embryonic stem cells ),如来自这些动物的胚 球(blastocyte stage)、受精卵、胎盘或脐带的细胞。肌肉细胞可以在培养基中被培育成附着在一个支撑结构上的肌肉组 织，如二维或三维的脚手架(scaffold)或支撑结构。肌肉细胞可以在二维支 撑結构上如皮氏培养皿中形成多层培育的细胞，这些多层细胞可以被剥下 并加工食用。二维支撑结构的其它例子可以包括多孔隔膜，多孔隔膜允许
养分从隔膜一侧的培养基扩散到附着细胞的另 一侧。在这类培养条件中， 将细胞暴露于隔膜两侧的培养基可以获得更多的细胞层，也就是，细胞既 接受从隔膜的一侧扩散来的养分，也接受覆盖着隔膜上培育的细胞的培养 基中的养分。肌肉细胞还可以被培育在三维的支撑结构上或者绕着三维的支撑结 构培育或者培育在三维的支撑结构内部。根据需要，这类支撑结构可以设 计成不同的大小、外形和形态，如果需要，可以使被培育的肌肉细胞形成 与不同类型的肌肉组织相应的外形和形态，如牛排、(牛、羊等的)腰部 嫩肉、胫、鸡胸脯、鸡腿、羊肉片、鱼柳、龙蚱仁等。支撑結构可以由天 然的或者合成的生物材料制成，优选选用无毒的材料，以便即使它们被吃 下的时候也不会带来危害。例如，天然生物材料可以包括胶原蛋白、纤连蛋白(fibronectin)、昆布氨酸(laminin)或其它的细胞外基质。例如，合成 生物材料可以包括羟基磷灰石、藻酸盐、聚乙二醇酸(polyglycolicacid)、 聚交酯酸(polylactic acid)或它们的共聚物。本发明的支撑结构可以被设计 成固体或半固体支撑。为了获得最佳的细胞和组织培育，优选地，本发明的支撑结构具有较 高的孔隙率，以便为细胞附着提供最大的表面区域。在一种三维的支撑结 构中，可以将其模铸成包括一个分枝脉管网络(branched vascular network )， 以便向肉产品内部的细胞递送养分以及将这些细胞的新陈代谢产物排出。 在这种具体实施方式
中，采用上述无毒的天然或合成生物材料制成的分枝 脉管网络是可以食用的。此外，该支撑结构还可能包括粘附的肽(adhesion p印lides)、细胞附着分子或者与该支撑结构以共价或非共价联结的其它生 长因子。肽的例子包括如Ai'g-Gly-Asp或Arg-Glu-Asp-Val的氨基酸序列。请 参阅Niklason， L等人在移植免疫学5(4):303-306 (1997)中发表的J&f^4', 趟逸欢/^逾欢工摆迷#,.此处将该文献的全文作为参考。
另一方面，这些肌肉细胞的培养条件可以包括静态的、搅动的或动态 流动的培养条件。为了大幅度地提高产量，优选的方法是采用生物反应器， 其可以生产大量的细胞，并可以较好地控制养分、气体、新陈代谢产物以 及调节分子的流动。此外，生物反应器可以提供物理的和机械的信号，如压缩，以便于刺激细胞而产生特定的生物分子。见Vacanti, J等人在Lancet 354S叩pl. 1，pSI32-34(1999)中发表的逸欢工趕..手术'fi^^移控W W沒^";^^道。此处将该文献的全文作为参考。在本发明的另 一种实施方式中，肉产品来源于体外培育的肌肉细胞， 其可以包括来源于任何非人类动物的脂肪细胞。较肥的肉通常口味比较 好，但其具有较高的脂肪含量，而对健康的威胁较大，如心脏病。因此， 肌肉细胞与脂肪细胞的比例可以在器皿中调节，以便生产出具有最佳口味 和健康效果的肉产品。这种调节可以通过控制最初种植(seeded)在培养 基内的肌肉细胞与脂肪细胞的比率来完成，和/或根据需要通过改变对肌肉 细胞或脂肪细胞起作用的生长因子或分化因子(differentiation factors)的 浓度和比率改变来完成。在本发明的另一种实施方式中，来源于软骨细胞的软骨可以首先形成 与支撑结构结合在一起的底支撑层或结构。然后，肌肉细胞和/或脂肪细胞， 可以被种植在软骨细胞层上。肌肉细胞与软骨细胞的相互作用可以进一步 提供组织形成所需的必要调节信号。具有肌肉细胞和软骨细胞的肉产品的 例子包括鸡胸脯或猪排骨。在本发明的一种优选实施方式中，可以采用无菌^L术来培养最终形成 肉产品的肌肉细胞，以使肉产品基本上不含有害的微生物，如细菌、真菌、 病毒、朊病毒、原生动物或它们的组合。有害的微生物可包括致病型微生 物，如沙门氏菌、弧形杆菌、埃布氏菌E.co/L0/56:l/7等。此外，在培养基 中培育的肌肉细胞可以基本上不含寄生虫，比如绦虫，其可以感染所有动物的肌肉，并在人类食用未充分煮熟的肉时而转移给人类。在当肉产品离 开生物生产线时进行包装时，也可以无菌技术。这样的质量保证可以采用 现有技术中已知的针对微生物或化学物的标准检验方法进行监控。"基本上 不含"是指微生物或寄生虫的浓度低于污染物临床意义水平，也就是，低于 即使一旦摄入将导致疾病或危害健康的水平。在本发明的另一个优选实施方式中，来源于体外培育的肌肉细胞的肉 产品可以被暴露于电流或者振荡电流。不同于来自动物身体上的肌肉組 织，体外或器皿培育的肌肉组织可能从来没有运动过(例如从来未被用于 移动腿)。因而，将器皿中的肌肉细胞、肌肉组织或肉产品暴露于电流或 振荡电流，可以模仿运动，使得体外培育的肉与动物身体上的肉在质地上 更加相似。电流或振荡电流还可以提高肌肉细胞体外生长速度。电流或振 荡电流可以被施加于肌肉干细胞或者从干细胞分化出的肌肉细胞。在本发明的另一种实施方式中，可以添加源于动物身体的肉产品所缺 少的其它养分如维生素等，以提高本发明肉产品的营养价值。这既可以通 过直接向培育基中增加养分来实现，也可以通过遗传基因工程技术实现。例如，可以在培养的肌肉细胞中转染用于合成特定维生素(如维生素D、 A 或者不同的维生素B复合物)的酶基因，以生成特定维生素。在本发明的另一种实施方式中，调节因子、生长因子或其它基因产品 也可以通过基因技术51入到肌肉细胞中。已知这些被称为肌原性调节因子 (myogenic regulatory factors,简称MRFs )的因子，可以刺激和调节生物 体内肌肉的生长，但通常情况下，生物体内或器皿中的肌肉细胞并不产生 这些因子。因此，通过在培养的肌肉细胞中表达肌原性调节因子，可以提 高器皿中肌肉细胞的产量。在本发明的另 一种实施方式中，来源于器皿中肌肉细胞的肉产品包括 不同的肉产品衍生物。例如，这些衍生物可以通过将器皿中培育的肌肉組混合适当的调味品，制成肉丸、鱼丸、汉堡肉饼等。 例如，该衍生物还可以通过将肌肉细胞切割成层并加上香料，制成牛肉干、 火腿、大红肠、意大利腊肠等。因此，本发明的肉产品可以用来加工形成 动物肉可制成的任何类型的食品。下列的实施例揭示了本领域的技术人员如何使用本发明在器皿中生 产肉产品。细胞生物学、细胞培养以及免疫组织化学技术在本文中没有明 确地描述，因为它们已经在科技文献中被充分地报道过了 。实施例l本实施例描述了如何分离多能间充质干细胞，以用于在器亚中生产肉 产品。间充质干细胞可以产生出肌肉细胞、脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞。 间充质千细胞可以从任何非人类的动物胚胎的胚胎组织的切片中分离出 来。例如，在牛身上，富有多能肌肉干细胞的胚胎间叶组织优选地是在第30天至40天或者更早地从胚胎分离出来。分割或切片后，胚胎组织可以在 PH值为7.45的磷酸緩冲盐(簡称PBS)中切碎成尺寸大约为lmmx lmm的 小片。五到十片被切碎的组织在含0.25%胰岛素和0.1% EDTA的300pl PBS 中，于37"C下平緩"^货动孵育三十分钟。然后，该组织可以通过重力或者轻 微的离心分离而沉积在试管的底部。然后，抽走包含胰岛素/EDTA溶液的 上清液，并置换为含0.1免胶原酶的300nlPBS,再在37()C处理10到3()分钟。 根据需要，胶原酶消化可以被重复几次循环。取决于溶液的粘性(源自被 破坏的细胞释放的DNA),在两次循环之间，可以在胶原酶溶液中添加4()pl 含l mg/ml DNase (脱氧核糖核酸酶)的PBS。这种反应可以通过添加介质来停止，如DMEM或者Ham's F-12,或者 两者l:l的混合物(购自生命技术公司，罗克维尔，马里兰州)，并补充IO mM的Hepes、 2 mM的L-谷氨酰胺(Sigma - Aldrich ) 、 10-20%热灭活的牛 胎血清或牛血清(Hyclone实验室，洛根，犹它州)、100单位/ml的青霉素1
以及100吗/ml的链霉素("完全介质，，)。轻轻地上下吸移(pipetting)这些 组织，然后采用离心分离机在完全介质中洗涤这些细胞一次或两次，使细 胞可以完全被解离。然后细胞可以被安置到适当大小的、可以涂敷天然生 物材料(例如胶原质、纤连蛋白、昆布氨酸或其它的细胞外基质)或者合 成生物材料(例如羟基磷灰石、藻酸盐、聚乙二醇酸、聚交酯酸或它们的 共聚物)或者两者的皮氏培养皿中，在37^培育并用5%的(:02进行平衡。实施例2在间充质干细胞被分离后，为了获得成肌肉细胞(myoblasts)或肌肉 干细胞，它们可以在培养基中进行富集。最初，在如实施例l所述的解离 和洗涤之后，细胞可以分别承载在不同的皮氏培养皿中。采用60毫米的皮 氏培养皿，细胞可以首先在完全介质中被赙育二到四个小时。在这个过程中，上皮细胞将往往倾向于快速地附着到皮氏培养亚上，而成肌细胞仍保 留在上清液中。然后收集上清液，成肌细胞可以被承载在涂敷着天然或合 成生物材料的不同的皮氏培养皿上，如实施例l提到的那些生物材料。成 肌细胞可以通过补充具有生长因子如骨骼肌生长因子、前列腺素F2。(简称 PCiF2l,)以及胰岛素类生长因子I (简称1GF-1)的培养介质而被富集。进一步地，成肌细胞可以通过在完全介质中培养或者在较小介质中 (如比完全介质缺少胎儿牛血清)培养并补充肌肉特定的生长或分化因 子，如浓度范围为24 pg/ml到28 1%/1^1的？。？2"以及10-6 M到1(T5 M的胰岛 素，而被分化成特定的肌肉细胞。为了最接近地模仿动物体内的肌肉细胞， 其通常被神经细胞支配，培养介质中还可以补充适当的神经传递素，如乙 酰胆碱。实施例3或者，成肌细胞可以从全能胚胎干细胞中进行富集。全能细胞可以取 自器皿中采用体外受精技术的动物受精卵、脐带或胎盘中的干细胞、或者 取自从胚泡期细胞中分离出来的胚胎干细胞(ES)。例如，收集ES细胞， 用胰岛素温和地解离，并且用重组细胞白血病抑制因子(Chemicon,圣地 亚哥，力口州)以及饲养细胞如生长滞留胚胎纤维原细胞(growth arrested embryonic fibroblasts cell's )在器皿中培养。这些全能细胞可以用生长因子 处理，如PGF^或IGF-I，以便诱使这些细胞分化成不同的成肌细胞。实施例4釆用标准的免疫组织化学或原位(in-situ)杂交4支术，识别成肌细胞 或肌肉细胞。简单地讲，在培养基中培育的成肌细胞或肌肉细胞被转移到 涂敷着适当的前面所述的细胞外基质的载玻片上。采用前面所述的条件， 这些细胞被培育成所需的数量并进行分化。在充分生长和分化阶段以后， 这些细胞可以混合4%的曱醛。若釆用细胞内抗体标记或者核香酸探针，该 细胞隔膜可以渗透1%的三硝基苯酚-40 (NP-40)或三硝基曱苯-X (Tritoii-X)。成肌细胞或肌肉细胞特异性标记的抗体，如可以从Sigma⑧ 获得的肌浆球蛋白、titin、阿尔法-辅肌动蛋白，可以通过采用标准的荧光 免疫组织化学技术用于识别这些细胞。可选择地，用于这些标记的单链的 RNA或DNA探针也可以被用在原位杂交中。此外，当肌肉细胞已经附着到后面所述的三维支撑结构上时，它们可 以被冷冻、分割以及采用抗体标记进行识别，如可以从51811^@获得的针对 肌浆球蛋白、titin、 12101、肌钓蛋白T、阿尔法-辅肌动蛋白的抗体。实施例5二维或三维脚手架或支撑可以由天然的生物材料(例如>9交原质、纤连 蛋白、昆布氨酸或其它的细胞外基质)或者合成的生物材料(例如羟基磷 灰石、藻酸盐、聚乙醇酸、聚交酯酸以及它们的共聚物)制造，或者由天 然生物材料与合成生物材料一起制造。优选地，三维脚手架被制造成具有 分支路径，以用于使养分和培养基到达该形成的肌肉组织内部。这些脚手
架的原料和构造方法的示例由以下美国专利揭示第5，686，091号，名称为"用于细胞移植的可生物降解的泡沫材料"；第5，863,984号，名称为"包括复合生物高聚物的生物稳定的多孔渗水材料"；第5，770,417号，名称为"用于 在动物体上生产脉管组织的包含附着细胞的三维纤维脚手架"；以及第5，916,265号，名称为"用作细胞种植脚手架和植入器的生物学细胞外基质的 生产方法"。这些专利在这里被全文引用以作参考。支撑结构优选地被制造成不同的大小、形态和格式以便使肌肉组织的 生长对应于不同类型的肉产品，比如牛排、(牛、羊等的)腰部嫩肉、胫、 鸡胸脯、鸡腿、羊肉片、鱼柳、龙奸仁等。实施例6脂肪细胞、软骨细胞和造骨细胞都能够从多能间充质干细胞或全能胚 胎干细胞中分化出来。这些干细胞可以如实施例1或3所述被分离。这些干 细胞可以在DMEM或Ham's F 12或上述两者1:1混合物中培养。培养介质可 以补充曱状腺激素、铁传递蛋白、胰岛素以及其它生长因子，如类胰岛素 生长因子(简称GF)、基本纤维原细胞生长因子以及培育激素。对于脂肪细胞，分化可以通过使用骨形态生成蛋白(简称BMP)处理 干细胞来实现，如BMP-4和BMP-2，已知它们用于诱发脂肪细胞系 (lineages)。见Ahrens爭人在DNA细胞生物学12:871-880 (1993)中发表的: 人类矛并成形素奢^U4'蛋^资一在薦邦河叶趟源C^/( 77/2细應^的 乂这/乡效-.显不^W河Y^f/入为V6'; Wang等人在生长因子9:57 (1W3)中发表的#兴成在C //^77/2和3"勿應*诸发乂 # 在这里引用这些文献的全文作参考。除了BMP之外，脂肪细胞的分化还可以采用过氧物酶体活性多育曲菌 素受体伽马的佶才元齐ij (agonist of peroxisome proliferator-activated receptor gamma,简称PPAR gamma)如BRL 49653 (rosiglitazone)来加强。见Sottile
和S函en在FEBS Lett 475(3):201-204 (2000)中发表的与B/ L邦653 (VoA7'g"tozone ，錄^的矛并A形素蛋^ j-2刺淡河pf豚体勿應的腐嚴差药 "f〃/w^"Z(: J为VA。此处将该文献的全文作为参考。在某些情形下，通过采用长链脂肪酸(简称LCFA )或者 "iiaz"lidinedionc或者两者一起处理成肌细胞或月几肉卫星细胞，成肌细胞 甚至可以被诱导而转分化(trans-differentiate )成成脂细胞(脂肪细胞前体)。 Grimaldi等人，成應勿應^^^poWas" ^#为、化；^^^"凝^^/azo/W/"e^owej 邦^f发'效果，前列腺素Leukot Essent脂肪酸57(1):71-75 (1997); Teb()ul等人， 771/a加/Wwe^ow^和^^"邀^戲炎齊^勿應脊换4'类 嚴#取敏，J. Biol. Chcm. 27()(47):28183- 28187 (1995)。在这里引用这些文献的全文作参考因此，通过以某一比例种植和共同培养肌肉细胞及脂肪细胞，可以生 产出具有所需脂肪含量的肉产品。可选择地，干细胞允许最初被分化成成 肌细胞，稍后，LCFA或thiadoIidinediones以不同浓度和不同暴露时间被添 加，以便按照所需方式将成肌细胞转分化成脂肪细胞。此外，肌肉细胞和 脂肪细胞的生长可以通过控制生长浓度和分化因子进行调节。例如，若最 终肉产品中需要较少的脂肪细胞，可以向培养介质中添加较小的BMP因子 浓度，同时可以添加较高浓度的PGF加和/或胰岛素以促进肌肉细胞生长。实施例7软骨细胞还可以从动物膝盖或者胸廓分离得到。采用与实施例l类似 的技术，从膝盖或者胸廓分割的组织可以被切碎、被胶原酶消化以及被完 全介质洗涤。然后这些细胞被分别地承载，以便增加软骨细胞的纯度。已知软骨细胞会响应机械应力而进行分化。因此，优选地，这些细胞 可以接受剪切流压力的作用，如美国专利第5,928，945号所述，其名称为"向 软骨细胞或软骨干细胞施加剪切流压力以生产软骨"，在这里引用该专利 全之作为参考。
软骨细胞可以在三维脚手架中最初形成第一层支撑细胞。然后，成肌 细胞和/或脂肪细胞可以被种植到软骨细胞层上，并被培育成所需的尺寸。 这样，软骨细胞层可以向肌肉细胞提供额外的支持或生长因子。实施例8器皿中培育的肌肉细胞不同于动物体内成长的肌肉细胞，因为动物体 内的肌肉细胞在活动或者肢体运动的过程中被使用。由于动物体的肌肉被 使用，肌肉细胞，例如四肢中的肌肉细胞，依照四肢的运动被收缩和放松。 因此，为了更近似地模仿动物体上的肌肉细胞的生长，在器皿中培育的细 胞可以被暴露于电流或振荡电流，或者电流或振荡电流的脉冲，以便收缩 肌肉细胞。电子探针可以被浸入培养介质中，以便递送轻緩电流。可选择 地，支撑结构可以被涂敷导电材料。导电材料及其向支撑结构上的涂敷方 法的示例由美国专利第5,843,741号揭示，其名称为"在导电聚合体上改变支 撑依附细胞分化的方法"，在这里引用该专利的全文作为参考。前述的实施例描述了在体外生产肉产品的方法。这些实施例只是用于 举例说明，而不是对本发明的限制。可以理解，在这些实施例的基础上进 行的修改和结合，都没有偏离本发明的精神。
权利要求
1、一种可食用的非人类的肉产品，其包括体外培育的非人类的肌肉细胞。
2、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其进一步包括一支撑结构， 其中，所述的非人类的肌肉细胞附着在该支撑结构上。
3、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的肌 肉细胞是骨骼肌肉细胞。
4、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的肌 肉细胞来源于选自如下一组中的动物哺乳动物、禽类、鱼类、无脊推动 物、爬行动物以及两栖动物。
5、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的肉 产品基本上不含有害微生物污染物。
6、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的肌 肉细胞来源于多能细胞或全能细胞。
7、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的肌 肉细胞被暴露于电流中处理过。
8、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其进一步包括体外培育的 非人类的脂肪细胞。
9、 如权利要求8所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的脂 肪细胞是从非人类的成肌细胞中转分化而得到的。
10、 如权利要求8所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的脂 肪细胞来源于多能或全能非人类的干细胞。
11、 如权利要求1所述的非人类的肉产品，其进一步包括体外培育的 非人类的软骨细胞。
12、 如权利要求10所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的 软骨细胞位于一支撑结构与所述的非人类的肌肉细胞之间。
13、 如权利要求10所述的非人类的肉产品，其中，所述的非人类的 软骨细胞被暴露于机械应力中处理过。
14、 一种生产可食用的非人类的肉产品的方法，其包括如下步骤 体外培养非人类的肌肉干细胞；将所述的非人类的肌肉干细胞种植到一支撑结构上；以及 培育所述的非人类的肌肉干细胞，以生产非人类的肉产品。
15、 如权利要求13所述的方法，其中，所述培育非人类的肌肉干细 胞的步骤包括将所述非人类的肌肉干细胞分化成不同类型的非人类的肌肉细胞。
16、 如权利要求14所述的方法，其进一步包括 将所述的非人类的肌肉细胞暴露于电流或振荡电流中进行处理。
17、 如权利要求13所述的方法，其进一步包括 添加养分，以便其被结合到所述非人类的肉产品中。
18、 如权利要求13所述的方法，其中，所述的非人类的肌肉细胞来 源于选自于如下一组的动物中哺乳动物、禽类、鱼类、无脊推动物、爬 4亍动物以及两栖动物。
19、 如权利要求13所述的方法，其中，所述的非人类的肉产品基本 上不含有害微生物污染物。
20、 一种生产可食用的非人类的肉产品的方法，其包括如下步骤 体外共同培养非人类的肌肉细胞和非人类的脂肪细胞； 将所述的非人类的肌肉细胞和所述的非人类的脂肪细胞种植到一支撑结构上；以及培育所述的非人类的肌肉细胞和所述的非人类的脂肪细胞，以生产非 人类的肉产品。
21、 一种生产可食用的非人类的肉产品的方法，其包括如下步骤 体外培养非人类的肌肉干细胞；将所述的非人类的肌肉干细胞种植到一支撑结构上； 采用脂肪酸处理所述的非人类的肌肉干细胞，以便将所述的非人类的 肌肉干细胞转分化成脂肪细胞；以及培育所述的脂肪细胞，以生产非人类的肉产品,
22、 一种生产可食用的非人类的肉产品的方法，其包括如下步骤 体外培养非人类的软骨细胞； 将所述的非人类的软骨细胞种植到一支撑结构上； 在所述支撑结构上或其周围，将非人类的肌肉细胞与所述的非人类的软骨细胞一起培养；以及培育所述的非人类的肌肉细胞，以生产非人类的肉产品。
23、 如权利要求20所述的方法，其中，所述的非人类的软骨细胞被 暴露于机械应力中处理过。
全文摘要
本发明公开了一种非人类的组织工程肉产品以及用于生产这种肉产品的方法。该肉产品包括可食用的体外培育的肌肉细胞。这些肌肉细胞可以被培育和附着到一个支撑结构上，其可以来源于任何的非人类细胞。该肉产品还可以包括其它细胞，如脂肪细胞和/或软骨细胞，它们与肌肉细胞一起体外培育。
文档编号A23B4/00GK101132803SQ200480044017
公开日2008年2月27日 申请日期2004年9月17日 优先权日2004年9月17日
发明者乔恩·维恩 申请人:乔恩·维恩