专利名称：裸鼠内皮祖细胞促血管新生模型的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物医学研究模型。作为一个在体模型研究并筛选促血管新生有关的药物及其作用机理。
背景技术：
目前已建立的筛选与血管生成相关的药物模型有两大类(1)体内模型常用的体内模型有绒毛膜尿囊，但是该模型的指标不仅没有标准化，而且无法从分子和细胞水平深入地说明药物的作用机理。
(2)体外模型血管内皮细胞是筛选与血管生成相关药物的主要细胞模型，该模型虽然可以从细胞和分子水平研究药物的作用机理，但由于其研究环境为体外，与临床实际用药情况相差甚远，无法真实地模拟实际情况。
虽然研究表明内皮祖细胞直接参与人体血管新生的过程，但目前没有一个内皮祖细胞的在体模型用于研究并筛选与血管新生有关的药物。
发明内容
本发明解决了现有技术所存在的上述缺陷，提供一种集体内模型和体外模型的优点于一体的周期短、成本较低、易于大样本重复，且可以从细胞和分子水平研究药物的作用机理的裸鼠内皮祖细胞促血管新生模型。
本发明的技术方案如下将内皮祖细胞与基质胶混合后注射到裸鼠皮下组织；通过常规方式对裸鼠给药，使药物在裸鼠体内影响基质胶中内皮祖细胞的分化；内皮祖细胞在基质胶中分化成为结构特点显著的血管内皮细胞，生长出网络状的血管结构；然后可取出基质胶，通过检测指标来观察药物对血管新生是否具有促进作用；通过比较对照组的情况，筛选出显著促进血管生长的药物。
本发明将内皮祖细胞植入裸鼠体内，建立内皮祖细胞的在体实验新模型来模拟药物发生作用的真实环境，将常规两大类模型有机结合在一起，充分发挥两大类模型的优点，筛选能显著促进血管新生的药物用于临床，并深入研究药物对血管新生成的作用机理。
具体实施例方式本发明的技术方案如下将内皮祖细胞与基质胶混合后注射到裸鼠皮下组织，1ml基质胶中含有102-106个内皮祖细胞，注射量是10μL-10mL；基质胶在4℃时是液态的，在裸鼠体温的条件下基质胶很快形成固体凝胶。由于基质胶提供了激发血管反应的更自然的微环境，可以诱导和(或)保持多种细胞的分化，通过常规方式对裸鼠给药，所给的药为所研究的药，没有特定的限制，使药物在裸鼠体内影响基质胶中内皮祖细胞的分化；内皮祖细胞在基质胶中分化成为结构特点显著的血管内皮细胞，生长出网络状的血管结构；通过常规裸鼠给药7-10天，然后可取出基质胶，通过检测以下任意一个或一个以上指标免疫组化染色检测VEGF、bFGF、VEGF受体的表达和微血管密度；用电子显微镜观察基质胶中内皮祖细胞分化成内皮细胞的特征性结构以及细胞免疫表型的检测；还可通过检测裸鼠血液中内皮祖细胞的数量、血清中VEGF和bFGF的含量以及用分离得到的含药血清培养鸡胚直接观察血管生长情况几方面指标来观察药物对血管新生是否具有促进作用；通过比较对照组的情况，筛选出显著促进血管生长的药物。以此模型开发出治疗缺血性疾病的新药，并可从分子和细胞水平研究该药物的作用机理。上述技术指标并不都是必不可少的，可自行选择组合。
权利要求
1.一种裸鼠内皮祖细胞促血管新生模型，其特征在于将内皮祖细胞与基质胶混合后注射到裸鼠皮下组织；通过常规方式对裸鼠给药，使药物在裸鼠体内影响基质胶中内皮祖细胞的分化；内皮祖细胞在基质胶中分化成为结构特点显著的血管内皮细胞，生长出网络状的血管结构；然后不仅可取出基质胶，通过检测相应的指标来观察药物对血管新生是否具有促进作用；通过比较对照组的情况，筛选出显著促进血管生长的药物。
2.根据权利要求1所述的裸鼠内皮祖细胞促血管新生模型，其特征在于所述的内皮祖细胞与基质胶的混合量为1ml基质胶中含有102-106个内皮祖细胞。
3.根据权利要求1所述的裸鼠内皮祖细胞促血管新生模型，其特征在于，所述的检测相应的指标是指以下任意指标中的一个或一个以上免疫组化染色检测VEGF、bFGF、VEGF受体的表达和微血管密度；用电子显微镜观察基质胶中内皮祖细胞分化成内皮细胞的特征性结构以及细胞免疫表型的检测；还可通过检测裸鼠血液中内皮祖细胞的数量、血清中VEGF和bFGF的含量以及用分离得到的含药血清培养鸡胚直接观察血管生长情况几方面指标来观察药物对血管新生是否具有促进作用；通过比较对照组的情况，筛选出显著促进血管生长的药物。
4.根据权利要求1所述的裸鼠内皮祖细胞促血管新生模型，其特征在于内皮祖细胞与基质胶混合后注射到裸鼠皮下组织的注射量是10μL-10mL。
全文摘要
本发明涉及一种裸鼠内皮祖细胞促血管新生模型，它是将内皮祖细胞与基质胶混合后注射到裸鼠皮下组织；通过常规方式对裸鼠给药，使药物在裸鼠体内影响基质胶中内皮祖细胞的分化；内皮祖细胞在基质胶中分化成为结构特点显著的血管内皮细胞，生长出网络状的血管结构；然后可取出基质胶，通过检测指标来观察药物对血管新生是否具有促进作用；通过比较对照组的情况，筛选出显著促进血管生长的药物。它集体内模型和体外模型的优点于一体，具有周期短、成本较低、易于大样本重复，且可以从细胞和分子水平研究药物的作用机理的优点。充分发挥两大类模型的优点，筛选能显著促进血管新生的药物用于临床，并深入研究药物对血管新生的作用机理。
文档编号C12N5/06GK1710067SQ20051001869
公开日2005年12月21日 申请日期2005年5月9日 优先权日2005年5月9日
发明者陈可冀, 高冬, 廖联明, 宋军, 林久茂, 郑良朴, 杜建 申请人:福建中医学院