专利名称：一种插核后珍珠囊辅助成型方法
技术领域：
本发明涉及珍珠培育技术领域，具体来说是指一种珍珠插核后珍珠囊辅助成型方法。
背景技术：
淡水珍珠的培育一般为无核珍珠，采用的方法为在河蚌的外套膜位置插入细胞小片，该方法生产出来的珍珠称为无核珍珠。无核珍珠养殖周期长，生产珍珠直径较小，经济效益也较低。
目前，现有的淡水有核珍珠培育借鉴了海水珍珠培育方法，采用的方法是将珍珠核直接送入河蚌外套膜内育珠的方法。由于插核部位伤口难以较好的愈合，而形成的珍珠多为尾巴珠、乌珠等劣珠，极少成为优质珠从而无法进行大面积推广作业。
发明内容
本发明提供了一种可大大提高定向培育大颗粒正圆有核珍珠的成珠率与成珠质量的插核后珍珠囊辅助成型方法。
一种插核后珍珠囊辅助成型方法，包括以下步骤(1)切取珠蚌的前段外套膜组织；(2)在20-25℃温度，PH值为6.9-8.3下，用蛋白酶酶解切取的外套膜组织，进行离散，得到细胞组织；(3)采用高速离心设备对步骤(2)中得到的细胞组织进行分离，制得细胞液；(4)对所得细胞液进行中和处理；(5)将中和后的细胞液浸泡于保护液中备用；(6)取适量步骤(5)得到的细胞液，滴于进行插核手术后的珠蚌术后伤口，细胞液与外套膜、珠核融合生长，形成珍珠囊。
所述的珠蚌选用体格健壮的3龄优质杂交三角帆蚌。
步骤(2)中蛋白酶选用胰酶，酶解时间为20-40分钟。
所述的保护液由葡萄糖、单唾液四己酸糖神经节苷脂、诺氟沙星组成，以每升溶液计，葡萄糖含量为40-60g，单唾液四己酸糖神经节苷脂含量为10-15g，诺氟沙星含量为0.8-1.2g。
步骤(5)中的浸泡时间为20-25分钟。
步骤(6)中细胞液的用量为0.1-0.2ml。
本发明在对体外培养的三角帆蚌外套膜外表皮细胞研究的基础上，获得了具有一定的增殖能力且能分泌珍珠质的外套膜外表皮细胞液，并将该细胞液，与细胞小片以及人工核形成珍珠囊，改变了传统淡水河蚌外套膜小片插核育珠法，成功地将细胞工程方法运用于珍珠培育。与常规育珠法相比，细胞囊形成时间可缩短10天，珠质明显提高，大大降低了畸形珠和无珍珠层的素珠的形成率。
整个工艺中，对制备外套膜外表皮细胞液过程的环境条件进行了严格的控制，使外套膜组织酶解较为完全，并能保持酶解细胞的活性，同时，采用高速离心机对其进行离心，将杂质与有效成分尽量分离，大大提高了定向培育大颗粒正圆有核珍珠的成珠率与成珠质量。
具体实施例方式
实施例1(1)切取体格健壮的3龄优质杂交三角帆蚌的前端外套膜组织；(2)在温度为20度，PH值为6.9条件下，用胰酶酶解外套膜组织40分钟，进行离散，得到细胞组织；(3)采用高速离心设备对步骤(2)中得到的细胞组织进行分离，制得细胞液；(4)对所得细胞液进行中和处理；(5)称取葡萄糖40g、单唾液四己酸糖神经节苷脂10g、诺氟沙星0.8g制备1L保护液，将中和后的细胞液浸泡于所得保护液中20分钟备用；(6)取0.1ml步骤(5)得到的细胞液，滴于插核手术后的珠蚌术后伤口，细胞液与细胞小片、珠核融合生长，形成珍珠囊。
实施例2
珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的原料成分以及细胞液的用量分别如下温度21度PH7.1葡萄糖60g单唾液四己酸糖神经节苷脂15g诺氟沙星1.2g酶解时间38分钟浸泡时间22分钟细胞液的用量0.1ml。
实施例3珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的组成成分配比以及细胞液的用量分别如下温度22度PH7.2葡萄糖40g单唾液四己酸糖神经节苷脂15g诺氟沙星1.2g酶解时间35分钟浸泡时间22分钟细胞液的用量0.15ml。
实施例4珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的组成成分配比以及细胞液的用量分别如下温度22度PH7.3葡萄糖60g单唾液四己酸糖神经节苷脂10g诺氟沙星0.8g
酶解时间32分钟浸泡时间23分钟细胞液的用量0.18ml。
实施例5珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的组成成分配比以及细胞液的用量分别如下温度23度PH7.5葡萄糖50g单唾液四己酸糖神经节苷脂13g诺氟沙星1.0g酶解时间30分钟浸泡时间23分钟细胞液的用量0.12ml。
实施例6珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的组成成分配比以及细胞液的用量分别如下温度24度PH7.7葡萄糖45g单唾液四己酸糖神经节苷脂13g诺氟沙星1.1g酶解时间25分钟浸泡时间20分钟细胞液的用量0.14ml。
实施例7珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的原料成分以及细胞液的用量分别如下
温度24度PH7.9葡萄糖55g单唾液四己酸糖神经节苷脂12g诺氟沙星0.9g酶解时间22分钟浸泡时间20分钟细胞液的用量0.16ml。
实施例8珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的组成成分配比以及细胞液的用量分别如下温度25度PH8.3葡萄糖58g单唾液四己酸糖神经节苷脂11g诺氟沙星1.05g酶解时间28分钟浸泡时间21分钟细胞液的用量0.2ml。
实施例9珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的组成成分配比以及细胞液的用量分别如下温度20度PH7.0葡萄糖44g单唾液四己酸糖神经节苷脂14g诺氟沙星1.15g酶解时间30分钟浸泡时间22分钟细胞液的用量0.18ml。
实施例10珍珠囊辅助成型步骤同实施例1，环境参数、保护液的组成成分配比以及细胞液的用量分别如下温度28度PH8.0葡萄糖49g单唾液四己酸糖神经节苷脂11g诺氟沙星0.8g酶解时间38分钟浸泡时间23分钟细胞液的用量0.19ml。
权利要求
1.一种插核后珍珠囊辅助成型方法，其特征在于包括以下步骤(1)切取珠蚌的前段外套膜组织；(2)在20-25℃温度，PH值为6.9-8.3下，用蛋白酶酶解切取的外套膜组织，进行离散，得到细胞组织；(3)采用高速离心设备对步骤(2)中得到的细胞组织进行分离，制得细胞液；(4)对所得细胞液进行中和处理；(5)将中和后的细胞液浸泡于保护液中备用；(6)取适量步骤(5)得到的细胞液，滴于进行插核手术后的珠蚌术后伤口，细胞液与外套膜、珠核融合生长，形成珍珠囊。
2.如权利要求1所述的插核后珍珠囊辅助成型方法，其特征在于所述的珠蚌选用体格健壮的3龄优质杂交三角帆蚌。
3.如权利要求1所述的插核后珍珠囊辅助成型方法，其特征在于步骤(2)中蛋白酶选用胰酶。
4.如权利要求1所述的插核后珍珠囊辅助成型方法，其特征在于步骤(2)中酶解时间为20-40分钟。
5.如权利要求1所述的插核后珍珠囊辅助成型方法，其特征在于所述的保护液由葡萄糖、单唾液四己酸糖神经节苷脂、诺氟沙星组成，以每升溶液计，葡萄糖含量为40-60g，单唾液四己酸糖神经节苷脂含量为10-15g，诺氟沙星含量为0.8-1.2g。
6.如权利要求1所述的插核后珍珠囊辅助成型方法，其特征在于步骤(5)中的浸泡时间为20-25分钟。
7.如权利要求1所述的插核后珍珠囊辅助成型方法，其特征在于步骤(6)中细胞液的用量为0.1-0.2ml。
全文摘要
本发明公开了一种插核后珍珠囊辅助成型方法，包括以下步骤(1)切取珠蚌的前段外套膜组织；(2)在20－25℃温度，pH值为6.9－8.3下，用蛋白酶酶解外套膜组织，进行离散，得到细胞组织；(3)采用高速离心设备对步骤(2)中得到的细胞组织进行分离，制得细胞液；(4)对所得细胞液进行中和处理；(5)将中和后的细胞液浸泡于保护液中备用；(6)取适量步骤(5)得到的细胞液，滴于插核手术后的珠蚌术后伤口，细胞液与外套膜、珠核融合生长，形成珍珠囊。本发明成功地将细胞工程方法运用于珍珠培育，与常规育珠法相比，细胞囊形成时间可缩短10天，珠质明显提高，大大降低了畸形珠和无珍珠层的素珠的形成率。
文档编号C12N5/06GK101036450SQ20071006820
公开日2007年9月19日 申请日期2007年4月24日 优先权日2007年4月24日
发明者张高亮, 詹伟建, 邱咸, 王坚, 郑蒋江, 邵伟焕, 张康 申请人:詹伟建