专利名称：里氏木霉液体发酵生产纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶的方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物发酵技术领域，具体涉及一种液体里氏木霉同时生产 纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶的方法。
背景技术：
国内现在多是利用康氏木霉固体发酵生产纤维素酶，发酵产品中除含有需要 的酶成分外，还会含有发酵的原料废渣、发酵菌体和杂菌，会影响到产品在饲料 上的应用效果。而国内采用液体发酵的菌种或技术，主要是产生一种酶的产品， 除个别经过菌种改良与工艺改变可以同时发酵生产纤维素酶和木聚糖酶外，无相 关可以同时发酵生产纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶的报道与技术。但 是每一种植物的破壁分解，都需要这四种酶的联合作用，所以生产一种产品同时 含有此四种酶对于植物破壁释放有效原料十分必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种里氏木霉液体发酵生产纤维素酶、木聚糖酶、葡 聚糖酶和果胶酶的方法。
本发明选用菌种为里氏木霉，诱导物选用微晶纤维素与麸皮，其它培养制剂 为磷酸二氢钾、柠檬酸钠和硫酸铵，发酵制得纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和 果胶酶。
本发明具体工艺过程是
取种子罐培养基0.5-3%微晶纤维素，0.5_3%麸子，0.3-1%磷酸二氢钾， 0.1-0.8%柠檬酸钠，0.2-1%硫酸铵，余量为水，pH值在4.6-5.3之间。
二级罐培养基0.5-3%微晶纤维素，0.5-3%麸子，0.3-1%磷酸二氢钾， 0.1-0.8%柠檬酸钠，0.2-1%硫酸铵，余量为水，pH值在4.6-5.3之间。
发酵罐培养基2-5%微晶纤维素，1-4%麸子，0.3-1%磷酸二氢钾，0.1-0.8%柠檬酸钠，0.2-1%硫酸铵，余量为水，灭菌后pH值在4.6-5.3之间。
在无菌操作下，把斜面种子接入，在12rC下灭菌30分钟并冷却至3(TC的 种子罐中，在通风量为1:0.2，罐压0.05Mpa， 3(TC土rC的条件下培养30-48 小时；经移种管路转入到12rC灭菌30分钟并冷却到3(TC土rC二级罐中，在通 风量为1:0.2，罐压0.05Mpa，温度30。C士rC的条件下培养24小时左右；经移
种管路转入到12rc灭菌30分钟并冷却到3o°c 土rc发酵罐中，在通风量l :O. 5，
罐压0. 05Mpa，温度30'C士rC的条件下培养100-120小时，经放料管路放入絮 凝罐加入硅藻土助滤剂，在板框压滤机进行压滤，清液打入循环罐进入超滤膜浓 縮器进行超滤浓縮，把超滤浓縮好的半成品打入缓存罐再进行刮板真空浓縮即制 得纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶。
经实验发现里氏木霉可以同时生产出纤维素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶和果胶 酶四种酶，并且发酵酶活纤维素酶1600u/ml，葡聚糖酶1400u/ml，木聚糖酶 500 u/ml，果胶酶500 u/ml。各种酶在pH值3. 5-5，温度30-5(TC条件下可以 同时发挥效力分解植物细胞壁的纤维与半纤维成分。本发明应用在词料与中药提 取上，破坏植物细胞壁，使有效成分得以释放。本产品为纤维素酶、葡聚糖酶、 木聚糖酶、果胶酶的复合酶。
具体实施例方式
取种子罐培养基1%微晶纤维素，1%麸子，0.5%磷酸二氢钾，0.25%柠檬酸 钠，0.5%硫酸铵，水96.75%，灭菌后pH值在4.6-5.3之间。二级罐培养基1% 微晶纤维素，1%麸子，0. 5%磷酸二氢钾，0. 25%柠檬酸钠，0. 5%硫酸铵，水96. 75%， 灭菌后pH值在4.6-5.3之间。发酵罐培养基3%微晶纤维素，3%麸子，0. 5%磷 酸二氢钾，0.25%柠檬酸钠，0.5%硫酸铵，水92.75%，灭菌后pH值在4. 6-5. 3 之间。
在无菌操作下，把土豆斜面培养的里氏木霉菌种接入到121'C下灭菌30分 钟并冷却至30'C的700立升种子罐中，在不断通入无菌空气，通风量为1:0.2， 罐压0.05Mpa， 30。C土rC的条件下培养30-48小时，经化验检测成熟这到标准
后，经灭菌后的移种管路转入在12rc灭菌30分钟并冷却到3crc士rc含4T培养基的二级罐中，在通风量1:0.2，罐压0.05Mpa，温度30°C± 1。C的条件下培 养24小时左右，经化验检测成熟这到标准后，经灭菌后的移种管路转入在121 。C灭菌30分钟并冷却到3crc土rc含IOT培养基的发酵罐中，在通风量l:O. 5， 罐压0.05Mpa，温度30。C土rC的条件下培养100-120小时，达到放罐标准后， 经灭菌后的放料管路放入灭菌后的絮凝罐加入硅藻土助滤剂，在经清洗处理过后 的板框压滤机进行压滤，浑液回流絮凝罐，清液打入循环罐进入超滤膜浓缩器进 行超滤浓縮，把超滤浓縮好的半成品打入缓存罐再进行刮板真空浓縮至要求的活 力即可制得纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶。
权利要求
1、一种里氏木霉液体发酵生产纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶的方法，其特征在于选用菌种为里氏木霉，诱导物选用微晶纤维素与麸皮，其它培养制剂为磷酸二氢钾、柠檬酸钠和硫酸铵，发酵制得纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶。
2、 如权利要求所述的里氏木霉液体发酵生产纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖 酶和果胶酶的方法，其特征在于取种子罐培养基0.5-3%微晶纤维素，0.5-3%麸子，0.3-1%磷酸二氢钾， 0.卜0.挑柠檬酸钠，0.2-1%硫酸铵，余量为水，pH值在4.6-5. 3之间；二级罐培养基0.5-3%微晶纤维素，0.5-3%麸子，0.3-1%磷酸二氢钾， 0. 1-0.8%柠檬酸钠，0.2-1%硫酸铵，余量为水，pH值在4.6-5.3之间；发酵罐培养基2-5%微晶纤维素，1-4%麸子，0.3-1%磷酸二氢钾，0.1-0.8% 柠檬酸钠，0.2-1%硫酸铵，余量为水，pH值在4.6-5.3之间；在无菌操作下，把斜面种子接入，在12rC下灭菌30分钟并冷却至3(TC的 种子罐中，在通风量为1:0.2，罐压0.05Mpa， 3CTC土rC的条件下培养30-48小时；经移种管路转入到i2rc灭菌3o分钟并冷却到3o。c土rc二级罐中，在通风量为1:0.2，罐压0.05Mpa，温度30°C土rC的条件下培养24小时左右；经移 种管路转入到121°〇灭菌30分钟并冷却到30'C士rC发酵罐中，在通风量1:0. 5， 罐压0.05Mpa，温度3(TC土rC的条件下培养100-120小时，经放料管路放入絮 凝罐加入硅藻土助滤剂，在板框压滤机进行压滤，清液打入循环罐进入超滤膜浓 缩器进行超滤浓缩，把超滤浓缩好的半成品打入缓存罐再进行刮板真空浓缩即制 得纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶。
全文摘要
本发明公开了一种里氏木霉液体发酵生产纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶的方法。本发明选用菌种为里氏木霉，诱导物选用微晶纤维素与麸皮和其它培养制剂磷酸二氢钾、柠檬酸钠和硫酸铵，发酵制得纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果胶酶。发酵酶活纤维素酶1600u/ml，葡聚糖酶1400u/ml，木聚糖酶500u/ml，果胶酶500u/ml。各种酶在pH值3.5-5，温度30-50℃条件下可以同时发挥效力分解植物细胞壁的纤维与半纤维成分。本发明应用在饲料与中药提取上，破坏植物细胞壁，使有效成分得以释放。
文档编号C12R1/885GK101407797SQ20081013739
公开日2009年4月15日 申请日期2008年10月23日 优先权日2008年10月23日
发明者任树文, 勇 何, 孟令文, 张丰杰, 李树俊, 梁东升, 王福兴, 薛立新 申请人:肇东市日成酶制剂有限公司