专利名称：静态恒磁场在延长原代细胞维持时间中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及静态恒磁场在延长原代细胞维持时间中的应用，属于细胞培养领域。
背景技术：
细胞体外培养是生物、医学等多领域常用的研究工具，其中二倍体细胞、尤其原代 细胞的培养在相关领域中占有重要位置。目前，多数原代细胞传代培养困难，甚至不能传代 (人胚肺体外可传代50 60代)，一般体外培养的原代细胞维持时间为10 20d，再久则 细胞衰老，失去应用价值。因此，人们急需一种能够延长细胞维持时间的方法。现有技术中，为了延长原代细胞存活时间，相关技术人员多采取降低培养温度、降 低培养液中的营养成分(降低营养成分的培养液称为维持液，比如含2%新生牛血清的MEM 培养基)等方法，未见有用静态恒磁场延长原代细胞维持时间的报道。
发明内容
针对上述现有技术，为解决体外培养的原代细胞维持时间短的缺陷，本发明提供 了一种解决方案，即利用磁场来延长原代细胞的维持时间，本发明的方法可使细胞维持时 间超过30d，且细胞长势旺盛，甚至沿立壁体生长。应用的方式为将细胞置于磁场中培养，磁场设置于贴近细胞的外壁上。具体为对于采用细胞培养板培养的细胞，则将磁场设置于细胞培养板的底部； 对于采用细胞培养瓶的细胞，则将磁场设置于细胞培养瓶的底部；对于采用转瓶培养的细 胞，则将磁场设置于转瓶外壁上(不妨碍转动)。所述磁场为静态恒磁场，磁力范围为500 3000高斯。所述原代细胞为来源于包括人类的所有动物的组织细胞，比如肝细胞、肾细胞、晶 体细胞、睾丸细胞等。注意本发明的方法不适用于肿瘤细胞，因为肿瘤细胞往往表现为生长方式的改变。本发明采用在细胞培养环境中添加磁场的方式延长体外原代细胞的维持时间，可 使细胞维持时间超过30d，且细胞长势旺盛，效果非常好。
图1为人胚肺细胞的培养图(200X)。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例1人胚肺细胞的培养1 原代人胚肺细胞的制备无菌条件下取胚胎肺组织，超净台中(局部百级)用 剪刀剪碎，加胰酶在37°C条件下消化20min，弃胰酶，加细胞培养液悬浮吹打，然后将悬浮液过100目纱网去掉组织块，将滤液调整细胞浓度为105/ml，接种于细胞培养瓶中，置 37°C、5%二氧化碳、95%空气环境中静止培养，3日后长成单层，为原代人胚肺细胞。2:人胚肺细胞的传代将已经长成单层的人胚肺细胞用平衡盐水洗3次，去掉未贴壁细胞和组织块，加 0.125%胰酶在室温条件下消化3min，弃胰酶，加细胞培养液吹打悬浮，然后以1 2比例分 瓶传代，置37°C、5% 二氧化碳、95%空气环境中静止培养，3日后长成单层，为次代人胚肺 细胞。3:人胚肺细胞的维持将已经长成单层的次代人胚肺细胞(4瓶)弃培养液，加含2%新生牛血清的MEM 加以维持，2瓶置入37°C、5%二氧化碳、95%空气的静态磁场(800高斯)的环境中静止培 养，同时2瓶置无磁环境作为对照组(余条件相同)，20d时观察细胞状况(中间未更换或添 加新的培养液)，发现所有细胞培养液已变为柠檬黄色，表明细胞处于酸性环境，对照组2 瓶细胞变得稀疏、胀大，出现遮光性颗粒，而磁场中2瓶细胞形态良好，继续维持培养至35d 时终止试验，观察培养液呈黄色(PH呈酸性)，显微镜下观察细胞呈纤维状，平铺排列呈致 密单层，未见明显遮光性颗粒，无脱落，见图1。表明静态磁场环境延长了细胞存活时间。
权利要求
静态恒磁场在延长原代细胞维持时间中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，应用方式为将细胞置于磁场中培养，磁 场设置于贴近细胞的外壁上。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于对于采用细胞培养板培养的细胞，则将磁 场设置于细胞培养板的底部；对于采用细胞培养瓶的细胞，则将磁场设置于细胞培养瓶的 底部；对于采用转瓶培养的细胞，则将磁场设置于转瓶外壁上。
4.根据权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于所述磁场为永久磁场，磁力强度 为500 3000高斯。
5.根据权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于所述原代细胞为贴壁二倍体细胞。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述原代细胞为人胚肺细胞。
全文摘要
本发明公开了静态恒磁场在延长原代细胞维持时间中的应用，应用的方式为将细胞置于磁场中培养，磁场设置于贴近细胞的外壁上。具体为对于采用细胞培养板培养的细胞，则将磁场设置于细胞培养板的底部；对于采用细胞培养瓶的细胞，则将磁场设置于细胞培养瓶的底部；对于采用转瓶培养的细胞，则将磁场设置于转瓶外壁上。所述磁场为静态恒磁场，磁力范围为500～3000高斯。所述原代细胞为来源于包括人类的所有动物的组织细胞，比如肝细胞、肾细胞、晶体细胞、睾丸细胞等。本发明采用在细胞培养环境中添加磁场的方式延长体外原代细胞的维持时间，可使细胞维持时间超过30d，且细胞长势旺盛，效果非常好。
文档编号C12N13/00GK101892219SQ201010226998
公开日2010年11月24日 申请日期2010年7月15日 优先权日2010年7月15日
发明者孟红, 张子毅 申请人:孟红;张子毅