专利名称：用于检测口腔炎症指数的方法和试剂、试剂盒及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医疗检查领域，具体而言，本发明涉及检测口腔炎症指数的方法、该方法所涉及的试剂和试剂盒及其应用。
背景技术：
炎症是一种应对感染、损伤或各种有害状况的重要免疫反应。炎症过程对机体来说是很重要的，因为它服务于修复损伤、杀伤病原微生物和肿瘤的过程中。然而，持久的炎症是有害的，因为炎症细胞释放有毒分子和损害正常细胞和组织的酶。非解决性炎症是疾病的一种主要驱动力，它明显地推动着多种疾病的病变过程， 所述疾病包括动脉粥样硬化、糖尿病、肥胖、癌症、慢性阻塞性肺疾病、哮喘、炎症性肠道疾病、神经退行性疾病、多发性硬化症、或类风湿关节炎发病。检测炎症过程对医生来说是非常重要的，因为它的出现意味着重大疾病、伤害或有害状况的存在。往往带有严重炎症特征的疾病例子有心肌梗死、活动性结核、骨髓炎 (骨感染)、类风湿关节炎、cholecytistiM感染胆)、和肾盂肾炎(肾感染)和癌症扩散。患有明显炎症的病人往往会表现出众所周知的炎症迹象和症状，如发烧、乏力和食欲不振。然而，这些症状和体征既不敏感、也不特异地显示炎症的存在。有些疾病和身体状况会在更具体的、可诊断的病症出现之前，出现炎症反应。因此，检测炎症症状的出现，将有利于更及时地诊断和治疗这些疾病和不适。目前最有名和最广泛使用的血液炎症检测指标是红细胞沉降率或ESR。ESR由 Fahraeus发现，Wintrobe和^festergren进行了改善和推广，所形成的魏氏血沉率或WESR， 有感于炎症蛋白的总体升高，测量红细胞在60分钟内沉降的距离。医生们曾试图开发其他更容易或更快、或者更敏感或具体的炎症检测方法。这些检测包括C反应蛋白或CRP，白细胞计数，orosomucoid蛋白，红细胞或血红蛋白和纤维蛋白原(参照美国专利号5137832，美国专利号4843869，美国专利号5506145)。然而，对于口腔而言，口腔是与血液分隔开来的环境，血液中的炎症水平并不能反映在口腔炎症的状况。因此，目前的血液炎症检测方法不能用于为在口腔炎症的诊断。口腔是进入人体内的通道，许多事件在此发生。口腔接受食物，并将固体的食物颗粒变小，与唾液混合，启动消化过程。口腔粘膜以及唾液腺体分泌提供润滑液，帮助言语表达、吞咽和食物消化。因此，口腔特别容易发生感染、损伤或各种有害状况。此外，口腔内有一套特有的发生在口腔内的疾病和不适，包括龋齿、牙周疾病、口腔溃疡等。有些情况如不良嗅觉、口臭、甚至打鼾也可能与口腔健康有关。由不同原因所致的炎症反应可能同时出现在口中。不同事件之间可能相互影响，因为不同来源的炎症因子可能会在一个相对局部共享的环境中形成一个相互影响的水平。这应该有别于体内血液环境。因此，目前迫切需要检测口腔炎症水平的方法或辅助检测口腔炎症水平的方法及其相关产品。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供涉及这一领域的辅助检测方法及相关产品。为有助于理解本发明，下面定义了一些术语。本文定义的术语具有本发明相关领域的普通技术人员通常理解的含义。除非另外说明，本文所用的术语“ 口腔炎症指数”是指在口腔内所发生的炎症程度的量化指标。在此申请中，所述“口腔炎症指数”具体由口腔内可收集到的嗜中性白血球细胞的量的相对水平代表，其可以用于辅助判断所述哺乳动物口腔炎症的存在与否、严重程度和/或改善情况。除非另外说明，本文所用的术语“个性化的口腔炎症指数”由检测对象口腔内嗜中性白血球细胞数或其特异性成分(或产物)浓度的增长倍数表示，该指数的计算公式如下Ii = nt/nh其中的Ii为个性化的口腔炎症指数；nt为从检测对象中获取的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度；nh为该检测对象在无炎症的健康情况下所获取的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度。除非另外说明，本文所用的术语“比较性口腔炎症指数”由检测对象的嗜中性白血球细胞数或其特异性成分(或产物)浓度，相对于无炎症的健康参照者的增长倍数。该指数的计算公式如下Ic = nt/nr其中的I。为比较性口腔炎症指数；nt为从检测对象中获取的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度；！^为无炎症的健康参照者的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度。根据本发明的一个具体实施方式
，无炎症的健康参照者的嗜中性白血球细胞数目OO设定为10，000。为了解决上述技术问题，本发明的一个目的是提供一种用于检测口腔炎症指数和 /或释放口腔内嗜中性白血球细胞的溶液。本发明的另一个目的是提供用于检测口腔炎症指数和/或检测口腔内嗜中性白血球细胞数量的试剂盒。本发明又一个目的是上述溶液和试剂盒在制备检测口腔内嗜中性白血球细胞数量的产品中的用途。本发明再一个目的是提供检测哺乳动物口腔内口腔炎症指数的方法。本发明还一个目的是提供一种辅助检测哺乳动物口腔炎症治疗情况的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。一方面，本发明提供一种用于释放口腔内嗜中性白血球细胞的溶液，其特征在于， 所述溶液包括用于释放口腔内嗜中性白血球细胞的盐离子和酸离子；优选地，所述盐离子和酸离子由化合物提供，所述化合物选自氯化钾，氯化钠和磷酸钠的一种或多种；所述溶液可进一步包含用于提供细胞所需能量的化合物；优选地，提供所述细胞所需能量的化合物为D_葡萄糖。所述溶液可进一步包含用于调节该溶液的PH值和缓冲性能的化合物；优选地，所CN 102533933 A述化合物选自无水磷酸二氢钾，磷酸钠和无水磷酸氢二铵的一种或多种。此外，所述溶液还可进一步包含用于着色的化合物；优选地，所述化合物为酚红钠。进一步优选地，所述溶液中包含0. 01-10. 00克/L氯化钾，0. 01-10. 00克/L无水磷酸二氢钾，0. 01-10. 00克/L氯化钠，，0. 01-10. 00克/L无水二元磷酸钠，0. 01-10. 00克 /LD-葡萄糖和0. 01-0. 02克/L酚红钠；更优选地，所述溶液包括0. 4克/L氯化钾，0. 06克/L无水磷酸二氢钾，8. 0克/L 氯化钠，0. 04788克/L无水二元磷酸钠，1. 0克/L D-葡萄糖和0. 011克/L酚红钠。并且，所述溶液可以为水溶液、酒精溶液或葡萄糖溶液；优选地，所述酒精溶液中的酒精浓度为1-70% (V/V)；或优选地，所述葡萄糖溶液中的葡萄糖浓度为0. 1-15% (g/ml)。另一方面，本发明提供一种用于检测口腔内嗜中性白血球细胞数量的试剂盒，所述试剂盒包括上述用于释放口腔内嗜中性白血球细胞的溶液。在上述试剂盒中，还可以进一步包括用于特异性固定所述嗜中性白血球细胞的固定剂和/或用于对所述嗜中性白血球细胞进行特异性染色的染色剂；优选地，所述固定剂为甲醛，所述染色剂为吖啶橙。此外，所述试剂盒还可以进一步包括检测嗜中性白血球细胞的特异成分或产物所需的检测试剂；优先地，所述特异性成分为中性粒细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G，髓过氧化物酶，乳铁蛋白和明胶酶的一种或多种；其检测试剂包括检测该特异蛋白所需的抗体及其相应的检测试剂；其检测试剂为酶联反应所需的试剂。又一方面，本发明提供上述溶液或上述试剂盒在制备检测哺乳动物口腔内嗜中性白血球细胞数量的产品中的用途；优选地，所述哺乳动物是人。再一方面，本发明提供一种检测哺乳动物口腔炎症指数的方法，所述方法包括检测包含所述哺乳动物口腔内含物的样本中嗜中性白血球细胞的数量； 优选地，所述口腔炎症指数为个性化的口腔炎症指数或比较性口腔炎症指数；优选地，所述哺乳动物是人。其中，上述方法优选具体包括1)所述哺乳动物用适量溶液漱口，从而获得包含所述哺乳动物口腔内含物的溶液；2)使用固定剂固定经步骤1)获得的溶液中的嗜中性白血球细胞；3)使用染色剂将经步骤2、固定的嗜中性白血球细胞进行染色并计数；优选地，在步骤2、前，先离心所述包含哺乳动物口腔内含物的溶液；进一步优选地，所述离心速度为20-100g，时间为10-30分钟；更优选地，所述离心速度为20g，时间为 10分钟。并且，所述步骤1)中的溶液优选为上述用于从哺乳动物口腔内释放嗜中性白血球细胞的溶液；所述步骤2)中的固定剂优选为甲醛；进一步优选地，所述固定剂为2. 5% (g/ml) 的甲醛水溶液；所述步骤幻中的染色剂优选为吖啶橙；进一步优选地，所述染色剂为1. 6% (g/ml)的吖啶橙水溶液。此外，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞的数量和被检测哺乳动物在健康状态下口腔内的嗜中性白血球细胞的数量进行比较，计算所述哺乳动物的个性化的口腔炎症指数。可选地，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞的数量和健康状态下的哺乳动物参照者口腔内的嗜中性白血球细胞的数量进行比较，计算所述哺乳动物的比较性口腔炎症指数；优选地，所述健康状态下的哺乳动物参照者口腔内的嗜中性白血球细胞的数量为10000。本发明还提供另外一种检测哺乳动物口腔炎症指数的方法，所述方法包括检测包含所述哺乳动物口腔内含物的样本中嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量，所述特异成分如中性粒细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G，髓过氧化物酶，乳铁蛋白和明胶酶。这些特异蛋白可以采用本领域常规技术，使用相应的抗体，通过酶联反应来进行检测。；优选地，所述口腔炎症指数为个性化的口腔炎症指数或比较性口腔炎症指数；优选地，所述哺乳动物是人。此外，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量和被检测哺乳动物在健康状态下口腔内的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量进行比较，计算所述哺乳动物的个性化的口腔炎症指数。可选地，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量和健康状态下的哺乳动物参照者口腔内的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量进行比较，计算所述哺乳动物的比较性口腔炎症指数。还一方面，本发明提供一种辅助检测哺乳动物口腔炎症治疗情况的方法，所述方法包括在对哺乳动物口腔炎症进行治疗之前和之后，根据上述任一项方法分别检测哺乳动物口腔内的口腔炎症指数，然后比较治疗之前和之后的口腔炎症指数；优选地，所述口腔炎症指数为个性化的口腔炎症指数或比较性口腔炎症指数；优选地，所述哺乳动物是人。以下是本发明的详细描述首先，本发明通过下述研究披露了以前未知的发生并嵌入口腔黏膜组织中的炎症来源。清除该炎症来源，可以治愈病人的慢性牙周炎和经常性溃疡。这表明，嵌入黏膜组织的炎症是与炎症相关的口腔疾病的一种诱因。在这一研究的基础上，本发明建立了通过检测哺乳动物口腔内口腔炎症指数而辅助诊断口腔炎症的方法。所选择的参与这项研究的患者45岁，患有15年的牙周炎病，由三个不同的牙周炎专家诊断确认有此病。该患者每三个月就需要到牙周炎专科进行专业清理。该患者也经常遭受口腔溃疡的困扰(图1A)。采用一个Y形的特制清洗工具彻底清洁该患者的口腔，包括清洗粘膜和牙龈组织。该工具的设计专门优化了清洗能力、并可避免伤害任何有关组织(图1B)，被称之为除炎刷(具体参见中国发明专利申请CN201010109442. 1)。用除炎刷对口腔黏膜组织进行刷擦，然后用水冲洗。发白的残渣从口腔黏膜组织中释放出来，偶尔会有血迹的出现，但没有发生持续出血现象。
随后，溃疡样点(ulcer-like spot)出现在附近的黏膜牙龈交界处(图1C)的黏膜组织上。令人惊奇的是，褐色分泌物从溃疡样点中释放出来(图2A)。该分泌物用Turk’ s 溶液进行染色，然后在荧光显微镜下进行了观察。很显然，该分泌物中含有大量的嗜中性白血球(neutrophil)(图2B)，这些细胞都含有典型的多形核特征(图2C)。该样本由吖啶橙 (Acridine orange)进行了染色，在荧光显微镜下被证实含有嗜中性白血球(图2D)。该褐色分泌物似乎含有一个具有结构单元的嗜中性白血球聚集群体，这些汇集一起的嗜中性白血球群体被称之为口炎斑(oral inflammatory plague)。在褐色分泌物中出现的嗜中性白血球是一种炎症症状；嗜中性白血球释放可以损伤牙齿和组织的分解酶。从一个溃疡样点中可释放出多于10个口炎斑，随后溃疡样点被治愈。然后口炎斑将不会再从患过溃疡样点的部位中释放出来。口炎斑存在于溃疡样点中的时侯，患者会在该部位有一种热度和不舒服的感觉。一旦口炎斑被释放出来，患者就立刻感到一种如释重负的感觉。这些都表明口炎斑是一种炎症反应。据推测，口炎斑嵌入在黏膜组织中(图3)。支持这一想法的事实是，需要花时间和力量将口炎斑从黏膜组织中释放出来。很多口炎斑可汇集在一起，由于黏膜组织的折叠，口炎斑被嵌入其中，形成一种“结”状构造，被称之为“口炎结”(oral inflammatory knotitis)。口炎结可导致可见的炎症症状，如上述所说的溃疡样点(图3)。在溃疡样点处可见的白色残渣或沉淀物可能是由嗜中性白血球所致的细胞死亡而造成的。通过除炎刷清洗的过程，发现这个病患者口腔中含有12个以上的溃疡样点。这些溃疡样点存在于黏膜牙龈交界处附近、舌头下边、腭扁桃体附近，并在脸颊内部；这些都是不能轻易被当前口腔清洁措施所清理的地方。有些溃疡样点比其它更难清除，可能是因为其所在部位、大小和复杂程度所致。从一个溃疡样点中释放出来的口炎斑的数目有所不同， 有的有10个左右，有的高达100个以上。有的口炎斑为褐色，有的口炎斑为黄色。口炎斑的体积也有所变化，有的在10微升左右，有的高达200微升以上。从这个病患者中释放的口炎斑总量估计在10毫升以上。口炎斑中嗜中性白血球的浓度估测在107ml左右。因此， 该病患者的口腔黏膜组织中含有至少108个嗜中性白血球。这可能是一个具有显著影响力的炎症反应，由此而导致口腔疾病。当12个溃疡样点中的3至5个被清除后，该病患者注意到他已经没有牙周炎疾病了。这表明清除溃疡样点是治疗牙周炎的有效措施。令人惊喜的是，随着溃疡样点的进一步清除，患者的口腔溃疡也较少发生。在溃疡样点清除结束后，该患者也不再遭受口腔溃疡的困扰了。这表明口腔炎症是导致口腔复发性溃疡的诱因。该病患者也注意到，在溃疡样点清除以后，他的口臭问题也得以消除。可以想象， 被困在溃疡样点里面的微生物是导致口臭的原因(图幻。有趣的是，他的感觉系统改善了， 他能闻到更多的气味。据推测，在口腔中的嗜中性白血球可能会破坏呼吸系统中的感觉细胞。因此，清除溃疡样点可治疗牙龈疾病，也有益于身体健康。这些研究表明，当前口腔卫生习惯的不足，导致了食品残留(图2B)，细胞碎片(白色沉淀物，如图1)和微生物(口臭问题)的积累，这些将诱发嗜中性白血球的聚集(图3)。 然而，嗜中性白血球将不能清除存在于隐藏区域的、已经硬化了的残留物、碎片和微生物沉淀物。该区域的嗜中性白血球聚集群体将导致口炎斑，释放炎症因子和破坏性物质。口腔黏膜组织折叠和更多口炎斑在该区域的形成，将导致口炎结(knotitis)，从而诱发出可见的炎症症状，如口腔溃疡或溃疡样点。随着口炎结的增长，炎症将进一步加重，从而导致口腔疾病，如牙周炎的出现。存在于隐藏区域的、已经硬化了的残留物、碎片和微生物沉淀物是诱发嗜中性白血球聚集、导致炎症反应的来源。因此，在口腔内的炎症水平可以由口腔内可收集的嗜中性白血球数目来代表。获得口腔内的嗜中性白血球指数可以有助于对口腔炎症水平进行判断。这些嗜中性白血球细胞的数目可以在进行特异性染色之后，在显微镜下进行计算；也可以通过计算这些嗜中性白血球细胞的特异性成分(或产物)的浓度所代表。根据本发明的具体实施方式
，提供了个性化的口腔炎症指数(Ii)的表达方式，为该个体由炎症所致的嗜中性白血球细胞数或其特异性成分(或产物)浓度的增长倍数。该炎症指数的计算公式如下Ii = nt/nh其中的Ii为个性化的口腔炎症指数；nt为从炎症检测对象中获取的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度；nh为该检测对象在无炎症的健康情况下所获取的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度。检测对象可为人类或其它哺乳类动物。此外，本发明还提供了比较性口腔炎症指数(I。)的表达方式，为炎症检测对象的嗜中性白血球细胞数或其特异性成分(或产物)浓度，相对于无炎症的健康参照者的增长倍数。该炎症指数的计算公式如下Ic = nt/nr其中的I。为比较性口腔炎症指数；nt为从炎症检测对象中获取的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度为无炎症的健康参照者的嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)浓度。检测对象可为人类或其它哺乳类动物。在其中的一个实施例中，检测对象为人类；无炎症的健康参照者的嗜中性白血球细胞数目OO为10，000。可以明确的是，口腔炎症指数是嗜中性白血球细胞数或其特异性成分(或产物) 浓度的增长倍数，这可以在某种程度上反映炎症的程度，帮助医生和病人进一步了解该口腔炎症问题。在检测口腔炎症指数时，嗜中性白血球细胞数目或其特异性成分(或产物)从口腔释放出的效率，受所用取样缓冲液和条件的影响。本发明公开了可以产生一致性和可重复性结果的取样缓冲液、程序和条件，将在具体实施方式
部分进行详细的阐述。经过深入研究，本发明人揭示了口腔炎症水平与口腔嗜中性白血球细胞数量密切相关，并且在这一发现的基础上，本发明提供了一种通过检测口腔内口腔炎症指数而辅助判断炎症程度的方法，并提供了该方法所涉及到的相关产品。首先，本发明提供了一种用于从哺乳动物口腔内释放嗜中性白血球细胞的新型溶液，采用该溶液作为口腔内含物中嗜中性白血球细胞的取样溶液，可以从口腔释放嗜中性白血球，而不伤害人体，并能固定保留嗜中性白血球的多形核特征，可以确保获得具有一致性和可重复性的结果；其次，基于上述溶液以及包括该溶液的试剂盒，本发明提供了检测口腔炎症指数的方法，通过测量口腔内嗜中性白血球细胞的数量，可间接检测和评价哺乳动物口腔炎症水平。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中图1为溃疡样点及其清除工具，其中IA 溃疡出现在腭扁桃体附近；IB —个专门设计的工具“除炎刷”，它可以用来清除嵌入在口腔中的炎症源；IC 一个溃疡样点出现在黏膜牙龈交界处附近；ID 溃疡样点清洗后痊愈。图2为口炎斑和嗜中性白血球，其中2A 用除炎刷清洗后，从一个溃疡样点释放来的褐色分泌物(箭头所示)；2B:褐色分泌物用Turk’ s溶液染色，该分泌物含有大量的嗜中性白血球，食物残渣似乎是相关的(箭头)；2C 分泌物中的细胞具有典型的多形核特征； 2D 样品用吖啶橙(Acridineorange)染色，在荧光显微镜下观察。图3为口腔内发生炎症提出的模型。
具体实施例方式下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。 所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。_仿丨丨1 個口耆Φ胎血3求_麗白彻丨丨此实施例中测试了接受溃疡样点清除治疗的患者(下称“一号病人”)和未接受相应治疗的普通患者(下称“二号病人”)在10个月前后的口腔内的嗜中性白血球细胞数目。所述一号病人45岁，患有15年牙周炎，伴随有偶尔的口臭和口腔溃疡；二号病人 30岁，患有口腔溃疡并且经常发生口臭。在2010年1月1日和2010年10月2日对一号病人和二号病人分别进行了口腔嗜中性白血球细胞数目的检测，具体检测步骤如下1、收集口腔中的嗜中性白血球细胞，用适量的取样缓冲液漱口，以释放口腔中的嗜中性白血球细胞。采用15毫升的取样缓冲液进行两次洗漱口腔，每次30秒，从口中释放嗜中性白血球细胞，将所得的漱口液样本混合为30毫升的样本。该取样缓冲液为0.4克/L 氯化钾，0. 06克/L无水磷酸二氢钾，8. 0克/L氯化钠，0. 04788克/L无水二元磷酸钠，1. 0 克/LD-葡萄糖和0. 011克/L酚红钠；2、用固定液将嗜中性白血球细胞固定。采用2. 5%的甲醛固定嗜中性白血球细胞， 然后在4摄氏度环境下储藏，直至使用。3、如果嗜中性白血球细胞浓度偏低，需要将其浓缩，以便于准确计算。在这一具体的实施例中，在20g的离心转速下，集中嗜中性白血球细胞。4、在进行特异性染色之后，检测和计算嗜中性白血球细胞数。在这一具体的实施例中，嗜中性白血球细胞由1.6%的吖啶橙(Aridine orange) (AO)染色，然后在荧光显微镜下进行观察和计数。嗜中性白血球细胞数也可以由该细胞所特有的成分(或产物)浓度所反映；在口腔取样时，可收集这一特有的成分(或产物)，然后进行定量分析，测定其浓度。所测定的嗜中性白血球细胞特有成分(或产物)可能是蛋白质、去氧核糖核酸、核糖酸或其它在其细胞所特有的成分(或产物)。这些特有成分(或产物)的检测和定量分析，可以由现有的可知的方法进行。在科技文献中，现有很多方法用来检测蛋白质、去氧核糖核酸、核糖酸和其它化合物。比如说，ELISA可以检测蛋白质；PCR可以检测去氧核糖核酸；特异性探针杂交可以检测RNA ；小分子化合物可以由高压液相色谱或气象色谱检测等等。检测结果见下表1。表1、一号病人和二号病人的嗜中性白血球细胞数和口腔炎症指数的比较
权利要求
1.一种释放口腔内嗜中性白血球细胞的溶液，其特征在于，所述溶液包括用于释放口腔内嗜中性白血球细胞的盐离子和酸离子；优选地，所述盐离子和酸离子由化合物提供，所述化合物选自氯化钾，氯化钠和磷酸钠的一种或多种。
2.如权利要求1所述的溶液，其特征在于，所述溶液可进一步包含用于提供细胞所需能量的化合物；优选地，提供所述细胞所需能量的化合物为D-葡萄糖。
3.如权利要求1或2所述的溶液，其特征在于，所述溶液可进一步包含用于调节该溶液的PH值和缓冲性能的化合物；优选地，所述化合物选自无水磷酸二氢钾，磷酸钠和无水磷酸氢二铵的一种或多种。
4.如权利要求1-3中任一项所述的溶液，其特征在于，所述溶液可进一步包含用于着色的化合物；优选地，所述化合物为酚红钠。
5.如权利要求1-4中任一项所述的溶液，其特征在于，所述溶液包含0.01-10. 00克/ L氯化钾，0.01-10. 00克/L无水磷酸二氢钾，0.01-10. 00克/L氯化钠，0. 01-10. 00克/L 无水二元磷酸钠，0. 01-10. 00克/L D-葡萄糖和0. 01-0. 02克/L酚红钠；优选地，所述溶液包括0. 4克/L氯化钾，0. 06克/L无水磷酸二氢钾，8. 0克/L氯化钠， 0. 04788克/L无水二元磷酸钠，1. 0克/L D-葡萄糖和0. 011克/L酚红钠。
6.如权利要求1-5中任一项所述的溶液，其特征在于，所述溶液为水溶液、酒精溶液或葡萄糖溶液；优选地，所述酒精溶液中的酒精浓度为1-70% ；优选地，所述葡萄糖溶液中的葡萄糖浓度为0. 1-15%。
7.一种用于检测口腔内嗜中性白血球细胞数量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1-6中任一项所述的溶液。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括用于特异性固定所述嗜中性白血球细胞的固定剂；和/或用于对所述嗜中性白血球细胞进行特异性染色的染色剂；优选地，所述固定剂为甲醛；优选地，所述染色剂为吖啶橙。
9.如权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括检测嗜中性白血球细胞的特异成分或产物所需的检测试剂；优先地，所述特异性成分为中性粒细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G，髓过氧化物酶，乳铁蛋白和明胶酶的一种或多种；其检测试剂包括检测该特异蛋白所需的抗体及其相应的检测试剂；其检测试剂为酶联反应所需的试剂。
10.如权利要求1-6中任一项所述的溶液或如权利要求7-9中任一项所述的试剂盒在制备用于检测口腔内嗜中性白血球细胞数量的产品中的应用。
11.一种检测哺乳动物口腔炎症指数的方法，其特征在于，所述方法包括检测包含所述哺乳动物口腔内含物的样本中嗜中性白血球细胞的数量；优选地，所述口腔炎症指数为个性化的口腔炎症指数或比较性口腔炎症指数；优选地，所述哺乳动物是人。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法包括1)所述哺乳动物用适量溶液漱口，从而获得包含所述哺乳动物口腔内含物的溶液；2)使用固定剂固定经步骤1)获得的溶液中的嗜中性白血球细胞；3)使用染色剂将经步骤幻固定的嗜中性白血球细胞进行染色并计数；优选地，在步骤幻前，先离心所述包含哺乳动物口腔内含物的溶液；进一步优选地，所述离心速度为20-100g，时间为10-30分钟；更优选地，所述离心速度为20g，时间为10分钟。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中的溶液为如权利要求1-6 中任一项所述的溶液；优选地，所述步骤2、中的固定剂为甲醛；进一步优选地，所述固定剂为2. 5%的甲醛；优选地，所述步骤幻中的染色剂为吖啶橙；进一步优选地，所述染色剂为1. 6%的吖啶橙。
14.如权利要求10-13中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞的数量和被检测哺乳动物在健康状态下口腔内的嗜中性白血球细胞的数量进行比较，计算所述哺乳动物的个性化的口腔炎症指数。
15.如权利要求10-14中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞的数量和健康状态下的哺乳动物参照者口腔内的嗜中性白血球细胞的数量进行比较，计算所述哺乳动物的比较性口腔炎症指数；优选地，所述健康状态下的哺乳动物参照者口腔内的嗜中性白血球细胞的数量为 10000。
16.一种检测哺乳动物口腔炎症指数的方法，其特征在于，所述方法包括检测包含所述哺乳动物口腔内含物的样本中嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量，所述特异性成分选自中性粒细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G，髓过氧化物酶，乳铁蛋白和明胶酶的一种或多种；优选地，所述口腔炎症指数为个性化的口腔炎症指数或比较性口腔炎症指数；优选地，所述哺乳动物是人。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量和被检测哺乳动物在健康状态下口腔内的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量进行比较，计算所述哺乳动物的个性化的口腔炎症指数。
18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括通过将所述样本中检测到的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量和健康状态下的哺乳动物参照者口腔内的嗜中性白血球细胞特异成分或产物的含量进行比较，计算所述哺乳动物的比较性口腔炎症指数。
19.一种检测哺乳动物口腔卫生改善情况的方法，其特征在于，所述方法包括在对哺乳动物口腔卫生进行改善之前和之后，根据权利要求10-18中任一项所述方法分别检测哺乳动物口腔炎症指数，然后比较改善之前和之后的口腔炎症指数；优选地，所述口腔炎症指数为个性化的口腔炎症指数或比较性口腔炎症指数；优选地，所述哺乳动物是人。
全文摘要
本发明提供了用于释放口腔内嗜中性白血球细胞的溶液，以及包含所述溶液的试剂盒。此外，本发明还提供了检测哺乳动物口腔炎症指数的方法。所述口腔炎症指数可以由从口腔中所获取的嗜中性白血球细胞数或嗜中性白血球细胞特有的成分或产物的浓度所表达。此外，本发明还公开了辅助检测哺乳动物口腔炎症治疗情况的方法。
文档编号C12Q1/06GK102533933SQ201010588508
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月15日 优先权日2010年12月15日
发明者潘申权 申请人:潘申权