专利名称：用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药中提取有效成份的方法，具体的是用真空酶解技术提取虎 杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法。
背景技术：
中药虎杖是蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.)的干燥根及 根茎，为我国传统中药。分布于陕西南部、甘肃南部、华东、华中、华南、四川、贵州，我省产永 善、威信、昭通、峨山、西畴、屏边、金平等。国内外学者对虎杖的化学成分做了许多研究，近 年来，仍有不少对虎杖中化学成分的研究报道。概括起来，虎杖的成份复杂，含量较高的成 分有蒽醌类化合物、芪类化合物等成分。其中蒽醌类蒽醌成分主要以大黄素为主，芪类化合 物主要以白藜芦醇、白藜芦醇甙为主，白藜芦醇甙，又名虎杖甙。目前有关虎杖中白黎芦醇的研究大多集中在其药理的研究，对其产品的制备与开 发仍处于起始状态。现有生产白藜芦醇的工艺通常是药材粉碎一发醇一醇提一浓缩一有机 溶液萃取一回收溶剂一浓缩一醇溶一柱层析一脱色一结晶与重结晶。现有技术主要存在以 下问题
(1)现有工艺多停留在液液萃取、硅胶柱层析等传统的分离方法，技术相对陈旧、生产 周期长，过程繁琐，产品得率和质量不高，存在溶剂残留、目标产物回收率低、有机溶剂消耗 大，非环境友好等问题；
(2)虎杖中含有丰富的大黄素和白藜芦醇甙，大黄素和白藜芦醇甙具有重要的生理活 性，但大部分工艺未对其进行提取，而是将大黄素等高附加值成分作为废料处理，造成对资 源的极大浪费。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种用真空酶解技术提取虎杖中的 大黄素、虎杖甙及白藜芦醇。按本发明的方法可从虎杖原料中提取大黄素、虎杖甙及白藜芦 醇，且工艺简便，产品得率高，产品质量好。本发明所采用的技术方案为具体工艺如下
(1)将虎杖药材粉碎至粒径小于5毫米，
(2)用酶和清水配制酶溶液，
(3)药材放入容器，加入药材2-4倍量(w/v)酶溶液，搅拌均勻，
(4)酶解
容器内抽真空，当真空度抽至0. 5-0. 8Mpa,关闭真空阀，维持真空1_5秒，立刻打开放 空破坏真空，反复操作3-5次，50°C保温至少2小时；
(5)提取白藜芦醇粗品
酶解后的药材用浓度70%的乙醇3-5倍量(w/v)，70°C保温提取至少2次、过滤后合并 提取液，真空度0. OSMpa减压回收乙醇，得浓缩液，调节浓缩液PH值=9-10，静置沉淀至少7小时，将沉淀物用滤布过滤，滤饼为白藜芦醇粗品滤布下为过滤液；
(6)制白藜芦醇精品
将步骤(5)得到的白藜芦醇粗品用浓度为50%的乙醇至少3倍量(w/v)溶解，经大孔 树脂吸附洗脱后，洗脱液经浓缩至1倍体积时，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤， 滤布上的沉淀物用3倍量(w/v)的乙酸乙酯加热回流溶解，溶液经滤布过滤，将溶液常压 回收乙酸乙酯至1倍量时，静置沉淀不少于8小时，将沉淀物用滤布过滤，干燥1-2小时后 即为白藜芦醇精品；
(7)提取大黄素粗品
将步骤(5)得到的过滤液调PH值=2-3，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤得 大黄素粗品及过滤液；
(8)制大黄素精品
将步骤(7)得到的大黄素粗品用PH=9-10的碱水溶解，经大孔树脂吸附洗脱，将洗脱液 调PH值=2-3时，静置沉淀8小时将沉淀用滤布过滤，将沉淀干燥，用3倍(w/v)乙酸乙酯 加热回流溶解，经滤布过滤后将溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时以上将沉 淀用滤布过滤，干燥2小时后得大黄素精品；
(9)提取虎杖甙粗品
将步骤(7)最后得到的过滤液经大孔树脂吸附洗脱，洗脱液经浓缩后静置沉淀至少8 小时，沉淀物用滤布过滤，干燥至少2小时后得虎杖甙粗品；
(10)制虎杖甙精品
将步骤(9)得到的虎杖甙粗品干燥，用3倍乙酸乙酯加热回流溶解为溶液，滤布过滤， 溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥3小时后得虎杖精品。所述的步骤(2)中所述的酶溶液浓度为浓度为0. 01%-2%的，其中的酶为果胶酶、 淀粉酶、纤维素酶、大豆甙酶或复合纤维素酶之一种。所述步骤(6)、(8)、(9)和(10)中的干燥为50 真空干燥。本发明的关键是在一次工艺流程中从虎杖中同时提取出大黄素、虎杖甙及白藜芦 醇三种成份，使虎杖原料利用最大化。虎杖的成份复杂，从虎杖中分离并提纯大黄素、虎杖 甙及白藜芦醇三种成份具有较大的难度，本发明针对虎杖的特性专门配制适合的酶液对虎 杖进行酶解，采用较适合的真空度抽出药材组织中的空气，通过3-5次释放真空后利用大 气压将生物复合酶压入药材组织，提高生物复合酶对虎杖组织结构的破坏，以大幅度地提 高有效成分的收率。通过生物酶品种的选择，酶解时间的控制用一步法从虎杖中可同时提 取出大黄素、虎杖甙及白藜芦醇三个有效成分。酶解后经乙醇低温提取、溶剂回收、调节PH 值、沉淀过滤，过滤液经大孔树脂吸附分离后再经纯化后可得大黄素、虎杖甙及白藜芦醇。 降低生产成本，提高原料利用率，获得高含量白黎芦醇、虎杖甙、大黄素，增加产品附加值。 利用该工艺可提高30%的收率；缩短提取时间，缩短工艺路线，降低60%的生产成本；提高 60%原料利用率；增加产品附加值200%。本发明充分利用资源，可同时提取出大黄素、虎杖 甙及白藜芦醇三个有效成分，使虎杖中的大黄素等高附加值成分得到有效利用。本发明实 现了虎杖资源利用最大化，还具有技术先进、生产周期短，过程简单，产品得率高，产品质量 好，溶剂残留低，目标产物回收率高、有机溶剂消耗小的特点。
具体实施例方式( 1)将合格的虎杖药材IOOg粉碎。(2)用清水300ml与选择的酶配制成酶溶液。(3)药材放入2000ml圆底烧瓶中，加入酶溶液，搅拌均勻。(4)酶解
烧瓶内抽真空至要求，关闭真空阀，保持真空1-5秒，立刻打开放空破坏真空，反复操 作3-5次，50°C保温2-3小时。(5)提取白藜芦醇粗品
酶解后的药材加入浓度70%的乙醇，乙醇量为酶解后的药材(w/v) 3-5倍量，70°C保温 提取，过滤后合并提取液，真空度0. SMpa减压回收乙醇，得浓缩液，调节浓缩液调PH值，静 置沉淀，将沉淀物用滤布过滤，滤布上为白藜芦醇粗品，滤布下为过滤液。(6)制白藜芦醇精品
将步骤(5)得到的白藜芦醇粗品用浓度为50%的乙醇溶解，乙醇为白藜芦醇粗品的(w/ v)3倍量，经大孔树脂吸附洗脱后，洗脱液经浓缩至1倍体积，静置沉淀，将沉淀物用滤布过 滤，滤布上的沉淀物后用(w/v) 3倍量的乙酸乙酯加热回流溶解，溶液经滤布过滤，去除机 械杂质，将过滤后的溶液常压回收乙酸乙酯至1倍量，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤 布过滤，50 真空干燥至少2小时后为白藜芦醇精品，HPLC检测含量。(7)提取大黄素粗品
将步骤(5)得到的过滤液调PH值=2-3，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤，得 大黄素粗品及过滤液。(8)制大黄素精品
将步骤(7)得到的大黄素粗品用PH=9-10的碱水溶解，经大孔树脂吸附洗脱，将洗脱液 调PH值=2-3时，静置沉淀8小时将沉淀用滤布过滤，将沉淀干燥，用(w/v)3倍量乙酸乙酯 加热回流溶解，经滤布过滤去除机械杂质，将溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀至少8小时 将沉淀用滤布过滤，干燥，得大黄素精品，HPLC检测含量。(9)提取虎杖甙粗品
将步骤(7)最后得到的过滤液经大孔树脂吸附洗脱，洗脱液经浓缩后静置沉淀至少8 小时，沉淀物用滤布过滤，干燥后得虎杖甙粗品。(10)制虎杖甙精品
将步骤(9)得到的虎杖甙粗品干燥，用(w/v) 3倍乙酸乙酯加热回流溶解为溶液，滤布 过滤，溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀至少8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥得虎杖甙精 品，HPLC检测含量。
权利要求
1.用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法，其特征在于，具体工 艺如下(1)将虎杖药材粉碎至粒径小于5毫米，(2)用酶和清水配制酶溶液，(3)药材放入容器，加入药材2-4倍量酶溶液(w/v)，搅拌均勻，(4)酶解容器内抽真空，当真空度抽至0. 5-0. 8Mpa,关闭真空阀，维持真空1_5秒，立刻打开放 空破坏真空，反复操作3-5次，50°C保温至少2小时；(5)提取白藜芦醇粗品酶解后的药材用浓度70%的乙醇(w/v)3-5倍量，70°C保温提取至少2次，过滤后合并 提取液，真空度0. OSMpa减压回收乙醇，得浓缩液，调节浓缩液PH值=9-10，静置沉淀至少7 小时，将沉淀物用滤布过滤，滤饼为白藜芦醇粗品滤布下为过滤液；(6)制白藜芦醇精品将步骤(5)得到的白藜芦醇粗品用浓度为50%的乙醇至少3倍量(w/v)溶解，经大孔 树脂吸附洗脱后，洗脱液经浓缩至1倍体积时，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤， 滤布上的沉淀物用3倍量(w/v)的乙酸乙酯加热回流溶解，溶液经滤布过滤，将溶液常压 回收乙酸乙酯至1倍量时，静置沉淀不少于8小时，将沉淀物用滤布过滤，干燥1-2小时后 即为白藜芦醇精品；(7)提取大黄素粗品将步骤(5)得到的过滤液调PH值=2-3，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤得 大黄素粗品及过滤液；(8)制大黄素精品将步骤(7)得到的大黄素粗品用PH=9-10的碱水溶解，经大孔树脂吸附洗脱，将洗脱液 调PH值=2-3时，静置沉淀8小时将沉淀用滤布过滤，将沉淀干燥，用3倍量(w/v)乙酸乙 酯加热回流溶解，经滤布过滤后将溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时以上将 沉淀用滤布过滤，干燥2小时后得大黄素精品；(9)提取虎杖甙粗品将步骤(7)最后得到的过滤液经大孔树脂吸附洗脱，洗脱液经浓缩后静置沉淀至少8 小时，沉淀物用滤布过滤，干燥至少2小时后得虎杖甙粗品；(10)制虎杖甙精品将步骤(9)得到的虎杖甙粗品干燥，用3倍乙酸乙酯加热回流溶解为溶液，滤布过滤， 溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥3小时后得虎杖精品。
2.如权利要求1所述的用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方 法，其特征在于，步骤(2)中所述的酶溶液浓度为0.01%- 的，其中的酶为果胶酶、淀粉酶、 纤维素酶、大豆甙酶或复合纤维素酶之一种。
3.如权利要求1所述的用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方 法，其特征在于，步骤(6)、(8)、(9)和(10)中的干燥为50 真空干燥。
全文摘要
用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法，虎杖粉碎，放入酶溶液，抽真空，维持真空，破坏真空，保温；药材用乙醇提取，提取液制为浓缩液，调节pH值，沉淀，过滤，得白藜芦醇粗品和过滤液；将白藜芦醇粗品用乙醇溶解，经吸附洗脱，浓缩，沉淀，过滤，沉淀溶解，过滤，溶液回收乙酸乙酯，沉淀，过滤，干燥为白藜芦醇精品。过滤液调PH值，沉淀，过滤得大黄素粗品及过滤液；大黄素粗品用碱水溶解，吸附洗脱，调PH值，沉淀，过滤，干燥，加热回流溶解，过滤，回收乙酸乙酯，沉淀，干燥得大黄素精品。过滤液经吸附洗脱，浓缩，沉淀，过滤，干燥得虎杖甙粗品；虎杖甙粗品干燥，溶解，过滤，溶液回收乙酸乙酯，沉淀，沉淀物过滤，干燥得虎杖甙精品。本发明充分利用资源，可同时提取出大黄素、虎杖甙及白藜芦醇三个有效成分，使虎杖中的大黄素等高附加值成分得到有效利用。
文档编号C12P15/00GK102080108SQ20101058880
公开日2011年6月1日 申请日期2010年12月15日 优先权日2010年12月15日
发明者周晓燕, 马雪飞 申请人:云南弗蓝替生物工程有限公司