紫芝提取物对骨伤的治疗作用
【技术领域】
[0001]本发明公开了紫芝治疗骨折的技术手段，以及紫芝治疗骨折作用的最佳提取部位。
【背景技术】
[0002]根据我国第一部药物专著《神农本草经》记载:灵芝有紫、赤、青、黄、白、黑六种，是祖国中医药宝库中的珍品，素有〃仙草〃之誉，但现代文献及所见标本，多为多菌科植物紫芝或赤芝的全株。紫芝，也称“中国灵芝”，为多孔菌科真菌紫芝(Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang)的子实体，别名黑芝、玄芝、灵芝，味甘，性平。主要含麦角留醇、有机酸、氨基葡萄糖、多糖类、树脂、甘露醇、多糖醇、脂肪酸，又含生物碱、内酯、香豆精、水溶性蛋白质和多种酶类。紫芝的应用范围非常广泛，无论心、肺、肝、脾、肾脏虚弱，均可服用。紫芝所治病种涉及呼吸、循环、消化、神经、内分泌及免疫等各个系统；涵盖内、外、妇、儿、五官各科疾病。其根本原因，就在于紫芝扶正固本，增强免疫功能，提高机体抵抗力的巨大作用。它不同于一般药物对某种疾病而起治疗作用，亦不同于一般营养保健食品只对某一方面营养素的不足进行补充和强化，而是在整体上双向调节人体机能平衡，调动机体内部活力，调节人体新陈代谢机能，提高自身免疫能力，促使全部的内脏或器官机能正常化；《神农本草经》把紫芝列为上品，谓紫芝“主耳聋，利关节，保神益精，坚筋骨，好颜色，久服轻身不老延年。”谓赤芝“主胸中结，益心气，补中增智慧不忘，久食轻身不老，延年成仙。”近年来，对紫芝的各种研究更为广泛，药理作用包括治慢性支气管炎、支气管哮喘、白细胞减少症、冠心病、心律失常、神经衰弱、糖尿病、抗过敏等，本实验通过记载利关节和坚筋骨的药理作用来研究紫芝治疗骨伤的作用。
【发明内容】
[0003]本发明公开了紫芝治疗骨折作用的最佳提取部位。
1材料与仪器
1.1主要材料
紫芝，实验动物:健康级Wistar大鼠120只，雌雄各半，体重180g?220g。将大鼠保持在清洁级别，环境温度在20-22°C之间，并且相对湿度为60%的动物饲养室内适应生长5天。使其可以自由获得食物和水。
1.2主要试剂和药品
石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇；蒸馏水；氯化钠注射液；医用胶带；75%酒精；羧甲基纤维素钠；吐温-80 ;镊子；剪刀；解剖板；手术刀；止血钳；注射器；苦味酸；灌胃器；伤科接骨片；戊巴比妥纳；水合氣S全；庆大霉素；鹏伏；米血针；肝素纳米血管；
1.3仪器与设备
高速万能粉碎机；鼓风干燥箱；旋转蒸发器；数控超声波清洗器；数显恒温水浴锅；电子计数天平；网筛；索氏提取器；循环式真空泵；离心机；微量移液器；电冰箱；骨钳；X线摄片机
2实验内容与方法
2.1药物分组取干燥紫芝子实体5.9kg，经高速万能粉碎机粉碎，采用多种试剂，经石油醚(60-90°C )、乙酸乙酯、乙醇和水四层提取物的梯度顺序，依次对紫芝子实体进行了回流提取，各提取物均提取3次，每次提取8h以上，过滤，合并提取液，通过旋转蒸发仪和真空泵进行减压浓缩，得到各个试剂的粗提物浸膏，烘干成固体，最后得到各提取物粉末，部分呈油状固体，备用。取干燥紫芝子实体900g，将紫芝子实体进行粉碎，先后以残渣与水1:10比例煮20min，1:5比例煮lOmin水浴加热，过滤，得到水煎剂浸膏，得率为6%，烘干成固体粉碎得到粉末，备用。对各给药组分别分组为石油醚提取物组、乙酸乙酯提取物组、乙醇提取物组、水提取物组、水煎组、阳性药物组(伤科接骨片)、模型对照组、空白对照组共8组。
2.2大鼠分组及给药SPF级Wistar大鼠144只饲养于动物实验室内，将实验大鼠按性另IJ、体重随机分组，实验期间大鼠自由摄食基础饲料和饮水，并分笼饲养，每笼9只大鼠，雌雄各半，共16笼，分别对每只大鼠进行标记(1-9号)，共分为8组，每18只实验大鼠为一组，适应性生长7d。每天以灌胃的形式给予各组动物相应的受试药物，各实验组动物按体重给药，每天剂量为150-300mg/kg，每个剂量组按照2ml/100g体重灌胃给药，空白对照组和模型对照组给予等体积的生理盐水剂量为150-300mg/kg。每天一次,连续灌胃给药30天。
2.3大鼠造模选取石油醚提取物组、乙酸乙酯提取物组、乙醇提取物组、水提取物组、水煎组、阳性药物组、模型对照组7组大鼠进行造模。腹腔注射0.3%戊巴比妥钠溶液10ml/kg, 10%水合氯醛3ml/kg使大鼠全身麻醉,当大鼠完全被麻醉后，将大鼠放置在无菌手术台上固定。在无菌环境操作下，左前肢剪毛，并用医用酒精消毒，用手术刀切开皮肤，分离皮下组织，用骨钳对大鼠桡骨造成骨折，空白对照组不造成骨折，骨折造模手术完成后，用生理盐水清理伤口，并逐层关闭切口，最后手术缝合线缝合皮肤。即造模完毕，并观察其动态。术后连续3天内，对骨折大鼠注射4万单位的庆大霉素进行消炎杀菌，并对骨骼大鼠的伤口处用碘伏进行消毒，定期更换垫料，保证骨折大鼠的生存环境干净清洁，避免其伤口感染。
2.4 X射线透视将大鼠送至内蒙古民族大学附属医院影像科进行X射线透视，拍摄X射线片证明大鼠桡骨骨折模型建立成功。于造模后第一天即为灌胃第一天，144只大鼠连续给药10天。于灌胃第11天，以每组雌雄各半各3只为实验观察对象，共计48只，并将大鼠送至内蒙古民族大学附属医院影像科进行X射线透视，将拍摄完X光片的实验大鼠从内蒙古民族大学附属医院运回，将大鼠放置在无菌手术台上固定，对实验大鼠进行腹主动脉取血，取血清备用，后将死亡的大鼠的前肢取下，留下前肢的标本，并将前置标本用被生理盐水浸湿的医用纱布包裹好，并将每只大鼠进行解剖，取出肝、脾、胸腺、肾脏，并将处理好的血清、内脏、前肢标本放到-80°C的冰箱中保存。剩余96只大鼠，连续给药20天后，于灌胃第21天步骤同上，取出48只进行X射线透视，并分别从这48只大鼠中取出血清、内脏、前肢桡骨；同理，最后剩余48只大鼠，连续给药30天，于灌胃第31天后，全部进行X射线透视，并将处理好的血清、内脏、前肢标本放到-80 V的冰箱中保存。
2.5实验结果
2.5.1动物状态
在整个实验期过程中，有1只大鼠因生活状态不佳，肺部异常遭剔除，1只大鼠因体重明显减小，胃部异常遭剔除。其余受试动物无明显变化，伤口皮肤愈合良好，生长良好，饮食，活动，精神状态，皮毛肤色，动物体重未收到严重影响，体重变化正常，在连续灌胃给药过程中，没有动物死亡。
2.5.2影像学观察
【附图说明】
附图为影像学检查示意图。
注:从左到右依次为①石油醚提取物组、②乙酸乙酯提取物组、③乙醇提取物组、④水提取物组、⑤水煎组、⑥阳性药物组(伤科接骨片)、⑦模型对照组、⑧空白对照组。
2.5.3骨折效果分析
实验大鼠手术后经过X光片的确认，确定7组大鼠的桡骨骨折模型造模成功，X线射片可见除空白对照组以外，其余7组均可见桡骨中断，骨折线清晰可见，骨髓腔受到破坏，骨膜下及周围组织发生肿胀。骨折率为100%。<