特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞在制备药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体涉及特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞的用 途。更具体地，涉及特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞在制备药物中的用途、用于治疗 缺血性心、脑血管病的药物以及试剂盒。
【背景技术】
[0002] 缺血性心、脑血管病（脑梗塞）是严重威害人类健康的重大疾病，具有高发病率、 高致残率及高复发率、高死亡率等特点，给家庭和社会带来极大的精神痛苦及经济负担。传 统的治疗方法效果不理想，幸存者多留有严重后遗症。随着干细胞研究的快速发展，干细胞 替代治疗有望为急性心、脑梗死的治疗带来突破。其中，间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs)是一种成体干细胞，因其具有强大的增殖能力和多向分化潜能，并且免疫原性 低、来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，已成为用来治疗急性心、脑梗死的主要干细胞 种类，具有广泛的发展前景。
[0003] 通过血管内注射将间充质干细胞投送到组织损伤部位具有操作简单、不造成新的 损伤等优点，是干细胞移植治疗内脏损伤的理想途径。然而，研究发现，传统方法培养的间 充质干细胞血管内注射后会引起血管阻塞。由静脉注射后，超过80%的细胞阻塞在肺血管， 细胞很快死亡，使到达损伤心（或脑）组织的细胞极少；而动脉注射后会引起相应器官的多 发性微小梗死，造成新的损伤。从而影响间充质干细胞使用的效果和安全性。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种能够用于治疗缺血性心、脑血管病，并有效减少血管内注射肺阻塞的高迁徙 性间充质干细胞，以及包含该间充质干细胞的药物和试剂盒。
[0005] 需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：
[0006] 抗粘合蛋白β 1抗体是特异性粘合蛋白功能阻断抗体，能够阻断所有含有β 1链 的12种粘合蛋白与配体的结合，其中间充质干细胞表达7种粘合蛋白，分别为α 1β 1、 α2β 1、α3β 1、α4β 1、α5β 1、α6β 1、ανβ 1。发明人发现，在静脉注射间充质干细胞 之前，使用抗粘合蛋白β 1抗体孵育细胞，使间充质干细胞β 1粘合蛋白功能阻断后，能够 大幅减少静脉注射后的肺滞留，提高血液循环中间充质干细胞的水平。
[0007] 因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了特异粘合蛋白功能阻断的间充质干 细胞在制备药物中的用途，所述药物用于治疗缺血性心、脑血管病。发明人惊奇的发现，相 对于普通间充质干细胞即特异粘合蛋白功能未阻断的间充质干细胞，本发明所述的特异粘 合蛋白功能阻断的间充质干细胞，其黏附能力显著下降，静脉注射后的肺滞留细胞大幅减 少，到达损伤的心（或脑）组织的细胞数量明显增加，对机体的损伤减小。进而，利用特异 粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞制备的药物能够有效用于治疗缺血性心、脑血管病，并 且其静脉注射后的肺滞留显著减少，药物利用率高，治疗效果和用药安全性好。
[0008] 根据本发明的另一方面，本发明还提供了一种用于治疗缺血性心、脑血管病药物， 所述药物用于治疗缺血性心、脑血管病。根据本发明的具体实施列，所述药物包含特异粘合 蛋白功能阻断的间充质干细胞。发明人惊奇的发现，相对于普通间充质干细胞即特异粘合 蛋白功能未阻断的间充质干细胞，本发明的药物中包含的特异粘合蛋白功能阻断的间充质 干细胞，其黏附能力显著下降，静脉注射后的肺滞留细胞大幅减少，到达损伤的心（或脑） 组织的细胞数量明显增加，对机体的损伤减小，从而，本发明的用于治疗缺血性心、脑血管 病的药物的利用率高，治疗效果和用药安全性好。
[0009] 根据本发明的又一方面，本发明还提供了一种用于治疗缺血性心、脑血管病的试 剂盒。根据本发明的具体实施列，所述试剂盒包含特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞， 所述特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞是利用所述特异粘合蛋白的功能阻断抗体孵 育所述间充质干细胞获得的。发明人发现，相对于普通间充质干细胞即特异粘合蛋白功能 未阻断的间充质干细胞，本发明所述的特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞，其黏附能 力显著下降，静脉注射后的肺滞留细胞大幅减少，到达损伤的心（或脑）组织的细胞数量明 显增加，对机体的损伤减小。进而，采用本发明的试剂盒，利用特异粘合蛋白功能阻断的间 充质干细胞能够有效治疗缺血性心、脑血管病，并且该间充质干细胞静脉注射后的肺滞留 显著减少，因而利用率高，治疗效果和用药安全性好。
[0010] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0011] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0012] 图1显示了根据本发明一个实施例，经台盼蓝染色的对照组和β 1阻断组的细胞 的荧光显微镜观测结果；
[0013] 图2显示了根据本发明一个实施例，荧光显微镜下观测到的对照组和β 1阻断组 的间充质干细胞的肺滞留情况；
[0014] 图3显示了根据本发明一个实施例，对照组和β 1阻断组的间充质干细胞的在肺 中的平均滞留面积比较图。
【具体实施方式】
[0015] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。
[0016] 根据本发明的一个方面，本发明提供了特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞在 制备药物中的用途，所述药物用于治疗缺血性心、脑血管病。发明人惊奇的发现，相对于普 通间充质干细胞即特异粘合蛋白功能未阻断的间充质干细胞，本发明所述的特异粘合蛋白 功能阻断的间充质干细胞，其黏附能力显著下降，静脉注射后的肺滞留细胞大幅减少，到达 损伤的心（或脑）组织的细胞数量明显增加，对机体的损伤减小。进而，利用特异粘合蛋白 功能阻断的间充质干细胞制备的药物能够有效用于治疗缺血性心、脑血管病，并且其静脉 注射后的肺滞留显著减少，药物利用率高，治疗效果和用药安全性好。
[0017] 根据本发明实施例，所述特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞是利用所述特异 粘合蛋白的功能阻断抗体孵育所述间充质干细胞获得的。由此，能够有效获得特异粘合蛋 白功能阻断的间充质干细胞。
[0018] 根据本发明实施例，所述特异粘合蛋白为β 1粘合蛋白，所述特异粘合蛋白的功 能阻断抗体为抗粘合蛋白β?抗体。由此，能够有效获得β?粘合蛋白功能阻断的间充质 干细胞。发明人发现，该β?粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞存活能力不变，黏附能力显 著下降，经静脉注射后肺滞留细胞大幅减少，血液循环中间充质干细胞水平显著提高，到达 损伤的心（或脑）组织的细胞数量明显增加。从而β?粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞 能够有效用于制备治疗缺血性心、脑血管病的药物。
[0019] 根据本发明实施例，于4摄氏度下，进行所述孵育20-40分钟，优选30分钟。由此， 孵育效果好，能够有效阻断间充质干细胞的特异粘合蛋白的功能。
[0020] 根据本发明实施例，每100万所述间充质干细胞采用0. 1-1. 0 μ g，优选0. 5 μ g所 述特异粘合蛋白的功能阻断抗体进行所述孵育。由此，孵育效果好，能够有效阻断间充质干 细胞的特异粘合蛋白的功能
[0021 ] 根据本发明的实施例，所述药物通过血管给药，优选静脉给药。由此，治疗效果好。
[0022] 根据本发明的另一方面，本发明还提供了一种用于治疗缺血性心、脑血管病药物， 所述药物用于治疗缺血性心、脑血管病。根据本发明的具体实施列，所述药物包含特异粘合 蛋白功能阻断的间充质干细胞。发明人惊奇的发现，相对于普通间充质干细胞即特异粘合 蛋白功能未阻断的间充质干细胞，本发明的药物中包含的特异粘合蛋白功能阻断的间充质 干细胞，其黏附能力显著下降，静脉注射后的肺滞留细胞大幅减少，到达损伤的心（或脑） 组织的细胞数量明显增加，对机体的损伤减小，从而，本发明的用于治疗缺血性心、脑血管 病的药物的利用率高，治疗效果和用药安全性好。
[0023] 根据本发明实施例，所述特异粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞是利用所述特异 粘合蛋白的功能阻断抗体孵育所述间充质干细胞获得的。由此，能够有效获得特异粘合蛋 白功能阻断的间充质干细胞，进而有效用于制备治疗缺血性心、脑血管病的药物。
[0024] 根据本发明实施例，所述特异粘合蛋白为β 1粘合蛋白，所述特异粘合蛋白的功 能阻断抗体为抗粘合蛋白β?抗体。由此，能够有效获得β?粘合蛋白功能阻断的间充质 干细胞。发明人发现，该β?粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞存活能力不变，黏附能力显 著下降，经静脉注射后肺滞留细胞大幅减少，血液循环中间充质干细胞水平显著提高，到达 损伤的心（或脑）组织的细胞数量明显增加。从而β?粘合蛋白功能阻断的间充质干细胞 能够有效用于制备治疗缺血性心、脑血管病的药物，即包含β 1粘合蛋白功能阻断的间充 质干细胞的本发明的药物能够有效用于治疗缺血性心、脑血管病。
[0025] 根据本发明实施例，于4摄氏度下，进行所述孵育20-40分钟，优选30分钟。由此， 孵育效果好，能够有效阻断间充质干细胞的特异粘合蛋白的功能。
[0026] 根据本发明实施例，每100万所述间充质干细胞采用0. 1-1. 0 μ g，优选0. 5 μ g所 述特异粘合蛋白的功能阻断抗体进行所述孵育。由此，孵育效果好，能够有效阻断间充质干 细胞的特异粘合蛋白的功能。
[0027] 根据本发明实施例，所述药物通过血管给药，优选静脉给药。
[0028] 根据本发明实施例，本发明的药物的给药剂量并不受特别限制，在实际操作中，医 生可以依据其临床经验、给药对象的实际情况以及病程发展状况灵活掌握，只要能够获得 良好的治疗效果即可。根据本发明的实施例，所述药物的给药剂量为：4000-6000万细胞/ kg，优选5000万细胞/kg。根据本发明的一些具体示例，进行动物实验时，对体重约20g的 Babl/c小鼠进尾静脉注射本发明的药物，使每只小鼠被注射100万特异粘合蛋白功