一种间充质干细胞迁移简易装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本实用新型属于生物实验用具领域，尤其是一种诱导间充质干细胞快速向去细胞化羊膜贴片内部迀移的简易装置。
【背景技术】
[0002]人体皮肤为人体与外界环境隔离的屏障，不仅负责人体的感知，尚有机械防护、分泌、非特异性免疫等功能。当前临床上应对皮肤损伤的方法主要有皮肤移植和人造皮肤补片2种。皮肤移植可有效帮助小面积的皮肤损伤快速恢复，如用于局部烧伤，但如果用于大面积的皮肤损伤或反复性较强的慢性伤口，则可能受到健康皮肤来源有限的限制。尽管目前也有组织工程学皮肤产品可弥补这一缺陷，如dermagraft，surgisis，但其造价高昂，使用效果一般，难以被广大患者接受。
[0003]去细胞化后的羊膜贴片具有通透性适宜、免疫原性低、生物亲和性好等优点，而且因为其可为细胞生长提供部分营养，是良好的用于创面覆盖的医用材料。
[0004]间充质干细胞具有多种分化潜能，且可以通过定向迀移和旁分泌作用改善细胞微环境，促进创伤组织修复，加之其免疫原性低、来源丰富等优点，是再生医学中的热点开发对象。
[0005]当前临床上已经试用成功通过负载间充质干细胞的羊膜贴片修复角膜损伤，但还没有成功制备大面积负载间充质干细胞的羊膜贴片用于临床的报道。由于去细胞化羊膜本身的物理特性，将其浸泡在细胞悬液中时本身会形成大量褶皱，不利于细胞向其内部迀移，而细胞悬液的均一性也不利于间充质干细胞定向迀移至去细胞化羊膜贴片内部，这些都是制备大面积负载间充质干细胞的羊膜贴片的技术难题。
[0006]为成功制备可用于临床的大面积负载间充质干细胞的羊膜贴片，本申请提供了一种易操作、低成本的解决方案。
【实用新型内容】
[0007]本实用新型的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种具有易操作、耗时少、细胞植入效率高、低成本等优点的诱导间充质干细胞快速向去细胞化羊膜贴片内部迀移的简易装置。
[0008]本实用新型实现目的的技术方案如下:
[0009]—种间充质干细胞迀移简易装置，包括细胞培养皿、弹性聚乙烯环、嵌套碗、羊膜贴片以及聚碳酸酯膜片，细胞培养皿分为上盖和底座，上盖同轴盖装在底座上部，在底座内同轴嵌装嵌套碗，嵌套碗下端敞口，敞口处同轴嵌装聚碳酸酯膜片，在嵌套碗外缘下端径向同轴包覆羊膜贴片，羊膜贴片外部同轴紧密套装弹性聚乙烯环。
[0010]而且，所述弹性聚乙烯环为非封闭的“C”形。
[0011]本实用新型的有益效果为:
[0012]本申请提供了一种可诱导间充质干细胞定向迀移至去细胞化羊膜贴片内部的简易装置，该装置在细胞培养皿和嵌套碗(insert)组件之间保持了一定的血清浓度梯度，作为诱导间充质干细胞迀移的化学信号，同时将羊膜垂直固定于间充质干细胞的迀移方向上，在细胞培养的过程中即可实现间充质干细胞向羊膜贴片内部的迀移诱导，不仅使制作可用于临床的大面积羊膜贴片成为可能，而且实现了间充质干细胞向去细胞化羊膜贴片内部的高效率迀移。
[0013]本装置中“C”形聚乙烯环可将大小形状适宜的羊膜基质固定于insert组件下层，保证了 insert组件上下层之间仅有非常缓慢的血清梯度扩散，长时间保持足够强度的化学信号梯度，诱导间充质干细胞定向迀移。
【附图说明】
[0014]图1为本实用新型的结构示意图(轴向剖视);
[0015]图2为图1中A-A向剖视图；
【具体实施方式】
[0016]下面结合附图并通过具体实施例对本实用新型作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本实用新型的保护范围。
[0017]—种间充质干细胞迀移简易装置，包括细胞培养皿、C形弹性聚乙烯环2、嵌套碗1、羊膜贴片3以及3.0um孔径聚碳酸酯膜片4，细胞培养皿分为上盖5和底座6，上盖同轴盖装在底座上部，在底座内同轴嵌装嵌套碗，嵌套碗下端敞口，敞口处同轴嵌装3.0um孔径聚碳酸酯膜片，在嵌套碗外缘下端径向同轴包覆羊膜贴片，羊膜贴片外部同轴紧密套装C形弹性聚乙烯环，C形弹性聚乙烯环将羊膜贴片紧紧包裹在嵌套碗上，不会掉落。
[0018]本申请使用C形弹性聚乙烯环在套装时较为容易，0型的套装过紧，会损坏羊膜。
[0019]细胞培养皿为一次性聚乙烯细胞培养皿，市售标准Φ 100mm规格。嵌套碗由聚乙稀材质框架，碗底为3.0um孔径聚碳酸酯膜，碗底聚碳酸酯膜规格为C>75mm。
[0020]间充质干细胞来源为人类脐带wharton jelly，经机械分离和贴块培养获得原代细胞，并于添加10%人类AB型血清的DF - 12培养基中传代至P3。使用酶消法使细胞悬浮并经离心、重悬调整细胞密度为0.lM/ml，取适量细胞悬液注入嵌套碗内。
[0021]向嵌套碗下层细胞培养皿内添加适量含有10% (v/v)人类AB型血清的DF — 12培养基，将insert置于培养皿内，盖好培养皿盖，将整个装置置于37°C，5% C02环境培养。于培养开始后的D3，全量更换下层细胞培养皿内的培养基和insert内的无血清培养基。于培养开始后的D6收获负载间充质干细胞的羊膜贴片。
[0022]HE染色镜检及视野计数显示羊膜贴片有效面积内的细胞密度为20000/cm2—24000/cm2, IF 染色显示羊膜贴片内细胞显示 CD44+，CD90+，CD105+，CD14-，CD34-，CD45-，为间充质干细胞特征性表面标志物组合，无细胞早期分化或变异。
[0023]如上所述，本发明实现了大面积负载间充质干细胞的羊膜贴片的制备，其过程易操作且成本较低，为临床使用大面积、廉价的皮肤移植替代物提供了较好的解决方案。
[0024]所述一次性聚乙烯细胞培养皿为聚乙烯材质，规格为标准市售Φ 100mm规格，容积为13.0ml、底部面积为44cm2，外观为圆形无色透明。所述“C”形弹性聚乙烯环内直径为75mm，厚度为lmm，“C”形圆弧圆心角为300°，所述insert (嵌套碗)为Φ75ι?πι规格，容积为9.0ml，组件之一聚碳酸酯膜孔径为3.0um，膜厚度10um，外观为白色不透明。所述细胞培养皿需在使用前装填用于诱导间充质干细胞迀移的培养基，如含有2% — 10% (v/v)人类AB型热灭活血清的HDMEM培养基、含有2% — 10% (v/v)人类AB型热灭活血清的DF — 12培养基等。所述insert需在使用前装填适宜浓度的间充质干细胞悬液，如使用无血清HDMEM培养基稀释至0.lM/ml并悬浮均勾的人类脐带whartonjelly来源的间充质干细胞、使用无血清DF - 12培养基稀释至0.lM/ml并悬浮均匀的人类骨髓来源的间充质干细胞等。
[0025]间充质干细胞悬液，其来源为经适当周期贴壁培养并纯化后的人类间充质干细胞，其获取方法为:使用适当浓度的胰蛋白酶或相同功能的分散试剂消化使细胞悬浮。所述的培养基需在该装置使用过程中适时更换。所述嵌套碗需在使用前将去细胞化的羊膜贴片固定于其底面，所述羊膜贴片有效面积不小于嵌套碗组件中底面面积。
【主权项】
1.一种间充质干细胞迀移简易装置，其特征在于:包括细胞培养皿、弹性聚乙烯环、嵌套碗、羊膜贴片以及聚碳酸酯膜片，细胞培养皿分为上盖和底座，上盖同轴盖装在底座上部，在底座内同轴嵌装嵌套碗，嵌套碗下端敞口，敞口处同轴嵌装聚碳酸酯膜片，在嵌套碗外缘下端径向同轴包覆羊膜贴片，羊膜贴片外部同轴紧密套装弹性聚乙烯环。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞迀移简易装置，其特征在于:所述弹性聚乙烯环为非封闭的“C”形。
【专利摘要】本实用新型涉及一种间充质干细胞迁移简易装置，包括细胞培养皿、弹性聚乙烯环、嵌套碗、羊膜贴片以及聚碳酸酯膜片，细胞培养皿分为上盖和底座，上盖同轴盖装在底座上部，在底座内同轴嵌装嵌套碗，嵌套碗下端敞口，敞口处同轴嵌装聚碳酸酯膜片，在嵌套碗外缘下端径向同轴包覆羊膜贴片，羊膜贴片外部同轴紧密套装弹性聚乙烯环。本装置可用于快速诱导不同来源的间充质干细胞向去细胞化的羊膜贴片内部迁移，具有易操作、耗时少、细胞植入效率高、低成本等优点。
【IPC分类】A61L27/36, A61L27/60, A61L27/38
【公开号】CN204995855
【申请号】CN201520535267
【发明人】王之婴, 魏卿, 楼敏铭
【申请人】天津市康婷生物工程有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年7月22日