一种治疗癫痫病的银杏叶提取物及其用图
【专利说明】一种治疗癫痫病的银杏叶提取物及其用途
[0001](一）技术领域：本发明涉及一种植物药提取物，具体地说是一种治疗癫痫病的银 杏叶提取物。
[0002] (二）【背景技术】：癫痫，一种脑部疾病状态，以具有能够产生癫痫发作的持久易患 性和出现相应的神经生物、认知、心理及社会等方面的后果为特征。根据脑部病变和放电 部位的不同，癫痫的发作有多种形式，如精神上的异常，运动感觉上的异常，行为认知上的 异常和记忆功能的异常等。癫痫并非独立的疾病，而是一组疾病或综合症，其病因复杂、临 床表现多样。癫痫对人类的健康和社会经济的发展构成了很大的危险，因此世界卫生组织 (WHO)将癫痫列为21世纪攻克目标之一。
[0003] 根据WHO在1997年的统计报告，发达国家的患病率为5. 0%。，经济转轨国家患病率 为6. 1%。，发展中国家患病率为7. 2%。，不发达国家患病率为11. 2%。。截止1997年全球就有 5000万癫痫患者。我国六城市（长沙、成都、上海、广州、银川、哈尔滨）患病率为4. 6%。，在 所有的癫痫患者中，约有30%~40%存在不同程度的认知功能损害以及学习记忆功能的 减退。认知功能是人类和动物的大脑的高级神经活动，可简单的理解为四方面：接受功能， 学习记忆功能，思维功能和表达功能。其中最主要的是学习记忆功能。记忆是人脑对经验过 事物的识记、保持、再现或再认，它是进行思维、想象等高级心理活动的基础。人类记忆与大 脑海马结构、大脑内部的化学成分变化有关。记忆与人类正常的生活和工作息息相关。随 着现代神经学的研究发现，日常生活中的短期记忆都储存在海马体中，海马及其周边回路 是人类记忆从短期到长期的关键区域，同时也影响了其他大脑区域的记忆储存。而颞叶癫 痫能在一定程度上损害海马区细胞，进而导致记忆的损伤。反复癫痫发作可以导致海马结 构发生病理变化，包括海马神经元的变性坏死、突触间隙异常增宽及突触后膜的密度改变、 海马异常苔藓样发芽以及由此导致的突触联系异常。
[0004] 随着对癫痫病研究的不断深入，临床发现绝大多数癫痫患者在忍受癫痫发作痛苦 外，还要面对注意力无法集中，学习记忆能力减退等压力。这些都极大的降低了癫痫患者的 生活质量，所以说癫痫病患者认知功能障碍的治疗恢复是改善提高患者生活品质的重中之 重。
[0005] 近年来，由于癫痫患者的数量迅速增加，病症呈现多元化、复杂化趋势。而临床常 用药物虽然种类繁多，但大多存在用药剂量很难控制，长期使用会存在不良反应，疗效不明 显，价格较高等问题。随着药物的大量服用，越来越多的患者对药物的耐受性不断提高，只 能加大服药剂量或者换服新药，治疗成本随之上升，且副作用增大。
[0006] 随着中药研究的日益深入，各种中药抗癫痫的机理不断被阐明，中药抗癫痫药效 的开发成为热点。银杏叶作为传统中药，被广泛应用到心脑血管系统和神经系统等疾病的 治疗中，其提取物在药物代谢和毒理作用方面的特点也已有较为明确的描述，因此在同类 药物的筛选过程中具有优势。银杏叶中含有多种活性成分，包括银杏内酯、黄酮醇苷、原花 青素、聚戊烯醇、双黄酮、有机酸等。因此，提供一种新的银杏叶提取物和新用途具有十分重 要的价值。
[0007] 考察药物的预防作用，一般先给药再制作动物模型；考察药物的治疗作用，一 般先制作动物模型再给药。银杏叶提取物及其制剂在多篇硕士论文中提及具有一定的 预防癫痫发作的作用，即预先给药，再制作癫痫动物模型，可以使癫痫模型鼠的癫痫发作 次数和症状减轻，但对于先造模后给药的治疗作用却不明显。文献《不同剂量银杏叶提 取物对红藻氨酸致痫大鼠神经肽Y蛋白表达的影响》（王芳，等.郑州大学学报：医学 版.2014 (2): 207-210，）公开了先造模再给药，但其给药方式是腹腔注射，且给药剂量很 大，为100~200mg/kg，并给药后24h内全部处死动物，这样很难判断银杏叶提取物对癫痫 病的长期疗效。文献《银杏叶提取物对癫痫患者认知功能及脑脊液乙酰胆碱含量的影响》 (段方荣，等.河北医学，2014(12期）：2015-2017.)结果显示银杏叶片能明显改善癫痫 患者的认知功能，这种作用于银杏叶片增强中枢胆碱能神经系统的功能促进Ach的释放相 关；但研究结果显示，两组治疗后的疗效比较无显著差异，未提示银杏叶提取物能减少或减 轻患者的癫痫发作。《银杏叶（达那康）添加治疗癫痫疗效观察》（彭建伟，等.中国实用 医刊，2013, 40(8) :46-49.)公开了银杏叶片与其他抗癫痫药物联用能明显减少癫痫患者 的发作频率，这种作用可能与银杏叶（达纳康）独特的清除自由基作用有关，提示自由基 生成与清除平衡紊乱在癫痫发生中的价值。《银杏叶提取物辅助治疗癫痫临床观察》（解旭 东，等.脑与神经疾病杂质，2000,8 (3) :172-173)公开了抗癫痫药物加用口服银杏叶提取 物天保宁治疗癫痫总有效率58. 65 %，其抗癫痫作用主要来自银杏内酯B和槲皮素。在已有 的报道中发现，银杏叶提取物抗癫痫的作用机制与抗氧化、抗细胞凋亡、保护神经细胞、调 节N-甲基-D-天冬氨酸受体、γ -氨基丁酸受体、神经肽Y、c-Fos等蛋白的表达及调节Ca 离子通道有关。因此，目前尚无文献报道单独应用银杏叶提取物能减少或减轻患者的癫痫 发作，且银杏叶提取物抗癫痫作用主要来自银杏内酯B、槲皮素药效成分。
[0008] 专利《一种银杏叶提取物及其制备方法和应用》（CN104147054A)公开了一种银 杏叶提取物，其特征在于，总银杏萜内酯的含量为6%~12% (w/w)，总黄酮含量为40%~ 60% (w/w)，原花青素含量为30%~50% (w/w)，总银杏萜内酯％ +总黄酮％ +原花青素％ >90%，且总黄酮醇苷含量24%~32% (w/w)，原花青素/总黄酮醇苷的含量比值为1~2。 这种银杏叶提取物的抗氧化活性、神经保护活性、抗糖尿病及其并发症的活性比市面上常 用的银杏叶提取物更好，其用于制备预防或治疗神经系统疾病的药物，可用于治疗糖尿病 性白内障、糖尿病性视神经病变、糖尿性视网膜脂血症。
[0009] 因此，目前已上市的银杏叶提取物其他抗癫痫药物联合用应用，具有一定的抗癫 痫作用，但其单独应用效果不佳。
[0010](三）
【发明内容】
：本发明结合中医理论，以及多年对银杏叶活性成分作用研究和实 验研究，提供一种具有抗癫痫作用的银杏叶提取物，其可用于制备治疗癫痫病的药物中的 用途。
[0011] 本发明所述的癫痫病为癫痫持续性发作、癫痫后大脑内异常的痫性放电、癫痫引 发的学习记忆障碍等。
[0012] 本发明所述的用于治疗癫痫病的银杏叶提取物，其药效成分组成为：总银杏萜内 酯的含量为10 %~12 % (w/w)，总黄酮含量为40 %~44 % (w/w)，原花青素含量为45 %~ 50% (w/w)，且总银杏萜内酯％ +总黄酮％ +原花青素％ >95%，总黄酮醇苷含量24%~ 26% (w/w) 〇
[0013] 本发明为了具有更好的抗癫痫作用，进一步优选，银杏叶提取物的药效成分组成 为总银杏萜内酯的含量为11 % (w/w)，总黄酮含量为40% (w/w)，原花青素含量为48% (w/ w)，总银杏萜内酯％ +总黄酮％ +原花青素％ = 99 %，且总黄酮醇苷含量25 % (w/w)。
[0014] 本发明提供的用于治疗癫痫病的银杏叶提取物，对癫痫大鼠癫痫发作次数、脑电 图、海马组织形态、学习记忆认知功能和脑源性神经营养因子（BDNF)，胶质细胞源性神经营 养因子（GDNF)，血管内皮生长因子（VEGF)等蛋白表达的实验结果显示，本发明所提供的银 杏叶提取物可以减少癫痫发作次数、改善脑电图、海马组织形态和学习记忆认知能力，其作 用机制为：提高BDNF，⑶NF，VEGF三种蛋白的表达，有效地促进神经干细胞分化成相关神经 元细胞。
[0015] 本发明发现，当银杏叶提取物的药效成分组成如下：总银杏萜内酯的含量为 10 %~12 % (w/w)，总黄酮含量为40 %~44 % (w/w)，原花青素含量为45 %~50 % (w/ w)，且总银杏萜内酯％ +总黄酮％ +原花青素％ >95 %，总黄酮醇苷含量24%~26% (w/ w)，且原花青素/总黄酮的含量比值为1. 05~1. 25,原花青素/总银杏萜内酯的含量比值 为4. 0~4. 4时，对大鼠癫痫发作次数的影响试验结果显示，银杏叶提取物以40mg/kg浓 度灌胃4周、8周后，与模型组相比，能减少大鼠痫性发作的次数，有显著性统计学意义（P <0.01);对癫痫大鼠脑电图的影响试验结果显示，银杏叶提取物以40mg/kg浓度灌胃4 周、8周后，癫痫大鼠散在的棘波、尖波出现数量明显低于其他组；对癫痫大鼠海马组织形 态的影响试验结果显示，采用银杏叶提取物干预后的癫痫大鼠胞浆内尼氏小体丰富，并未 见到核固缩等神经元变性受损特征；对癫痫大鼠学习记忆障碍的影响试验结果显示，采用 银杏叶提取物干预后的大鼠进入目标区区域的次数显著高于其他组。
[0016] CN104147054A公开了一种银杏叶提取物，其药效成分组成为总银杏萜内酯的含量 为6%~12% (w/w)，总黄酮含量为40%~60% (w/w)，原花青素含量为30%~50% (w/w)， 总银杏萜内酯％ +总黄酮％ +原花青素％ >90%，且总黄酮醇苷含量24%~32% (w/w)，原 花青素/总黄酮醇苷的含量比值为1~2 ;但本发明人发现，只有当原花青素含量大于总黄 酮，且原花青素/总黄酮的含量比值为1. 2,原花青素/总银杏萜内酯的含量比值为4