. 0~ 4. 4时，才能达到显著的抗癫痫作用；而中国专利CN104147054A公开的这种银杏叶提取物 中原花青素含量总体较总黄酮含量低，其抗癫痫效果并不好。
[0017] 本发明银杏叶提取物的制备方法如下：1)银杏叶经粉碎后，用乙醇溶液50~80% (v/v)提取，共2~3次，每次1小时，每次乙醇溶液用量为银杏叶的5~10倍，获得提取 液；
[0018] 2)回收提取液至黑色黏稠状浸膏；
[0019] 3)浸膏冷却至低于10°C，用水浸提浸膏，水的用量为浸膏的5~10倍，浸提时间 为12~48小时；
[0020] 4)浸提液过滤，滤液用大孔树脂吸附分离，用乙醇溶液30% -70% (v/v)进行洗 脱，获得洗脱液；
[0021] 5)洗脱液干燥后即得银杏叶提取物。
[0022] 作为优选方案，
[0023] 步骤1)中，银杏叶经粉碎后，用乙醇溶液60% (v/v)提取，共提取3次，每次1小 时，每次乙醇溶液用量为银杏叶的8倍。
[0024] 步骤2)中，回收提取液至黑色黏稠状浸膏，该黑色黏稠状浸膏在50°C时，相对密 度为L 25~L 30。
[0025] 步骤3)中，浸膏冷藏6h以上，至4°C后，用0~4°C水浸提24~48h，水的用量为 浸膏的6倍。
[0026] 步骤4)浸提液过滤，滤液用HPD417大孔树脂吸附，水洗后，用乙醇溶液50 % (v/ v) 洗脱，获得洗脱液；
[0027] 步骤5)洗脱液干燥后即得银杏叶提取物。
[0028] 本发明取得以下有益效果：
[0029] 1.本发明提供了一种银杏叶提取物，银杏萜内酯、总黄酮和原花青素三者的含量 >95 %，总银杏萜内酯的含量为10 %~12 % (w/w)，总黄酮含量为40 %~44% (w/w)，原花 青素含量为45%~50% (w/w)，且总黄酮醇苷含量24%~26% (w/w)。该提取物可测成分 含量银杏萜内酯+总黄酮+原花青素大于95%，杂质成分少，产品质量稳定、可控；且严格 控制了原花青素/总黄酮的含量比值1. 05~1. 25,原花青素/总银杏萜内酯的含量比值 4. 0 ~4. 4。
[0030] 2.本发明提供了一种银杏叶提取物，可用于癫痫病的治疗，包括癫痫持续性发作、 癫痫后大脑内异常的痫性放电、癫痫引发的学习记忆障碍等，其作用机制为：提高BDNF， GDNF，VEGF三种蛋白的表达，有效地促进神经干细胞分化成相关神经元细胞。其中抗癫痫 作用主要是由原花青素产生的，改善学习记忆障碍主要是由银杏萜内酯产生的，而黄酮类 化合物的存在，可以起到协同增效的作用；并且当原花青素、银杏萜内酯和总黄酮的含量在 本发明规定的限定范围内，可以起到显著的抗癫痫作用和改善学习记忆障碍作用。
[0031] 3.本发明提供的银杏叶提取物为纯天然植物提取物，相对于一线治疗的化学制 剂，安全性更高，副作用更小。 (四）
【附图说明】
[0032] 附图1为各组大鼠脑电图结果
[0033] 附图2为各组大鼠部分脑组织尼氏染色结果
[0034] 附图3为大鼠海马BDNF，⑶NF，VEGF蛋白表达免疫组化结果 (五）
【具体实施方式】：
[0035] 实施例1活性实验用药
[0036] 药物1银杏叶提取物1号（市面上可购买到的普通银杏叶提取物）：总银杏萜内 酯的含量为7 % (w/w)，总黄酮含量为40 % (w/w)，原花青素含量为5 % (w/w)，总银杏萜内 酯+总黄酮+原花青素=52%，且总黄酮醇苷含量24% (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比 值为0. 125。
[0037] 药物2总银杏萜内酯提取物：总银杏萜内酯的含量95% (w/w)。
[0038] 药物3银杏总黄酮提取物：总黄酮含量为95% (w/w)，且总黄酮醇苷含量50% (w/ w) 〇
[0039] 药物4银杏原花青素提取物：原花青素含量为95% (w/w)。
[0040] 药物5银杏叶提取物2号：总银杏萜内酯的含量为10% (w/w)，总黄酮含量为48% (w/w)，原花青素含量为38 % (w/w)，总银杏萜内酯+总黄酮+原花青素=96 %，且总黄酮醇 苷含量28% (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比值为0. 79。
[0041] 药物6银杏叶提取物3号：总银杏萜内酯的含量为8% (w/w)，总黄酮含量为44% (w/w)，原花青素含量为43 % (w/w)，总银杏萜内酯+总黄酮+原花青素=95 %，且总黄酮醇 苷含量24% (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比值为0. 98。
[0042] 药物7银杏叶提取物4号（本发明的提取物）：总银杏萜内酯的含量为11% (w/ w)，总黄酮含量为40% (w/w)，原花青素含量为48% (w/w)，总银杏萜内酯+总黄酮+原花 青素=99%，且总黄酮醇苷含量25% (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比值为1.2,原花青 素/总银杏萜内酯的含量比值4. 36。
[0043] 药物8银杏叶提取物5号（本发明的提取物）：总银杏萜内酯的含量为12% (w/ w)，总黄酮含量为40% (w/w)，原花青素含量为48% (w/w)，总银杏萜内酯+总黄酮+原花 青素=100%，且总黄酮醇苷含量24. 5% (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比值为1. 2,原花 青素/总银杏萜内酯的含量比值4. 0。
[0044] 药物9银杏叶提取物6号（本发明的提取物）：总银杏萜内酯的含量为10. 5% (w/ w)，总黄酮含量为43. 5% (w/w)，原花青素含量为45. 5% (w/w)，总银杏砲内酯+总黄酮+原 花青素=99. 5%，且总黄酮醇苷含量25. 5% (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比值为1. 05， 原花青素/总银杏萜内酯的含量比值4. 3。
[0045] 药物10银杏叶提取物7号（本发明的提取物）：总银杏萜内酯的含量为11. 5% (w/w)，总黄酮含量为42% (w/w)，原花青素含量为45. 5% (w/w)，总银杏砲内酯+总黄酮+ 原花青素=99%，且总黄酮醇苷含量25% (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比值为1. 08,原 花青素/总银杏萜内酯的含量比值4. 0。
[0046] 药物11银杏叶提取物8号（本发明的提取物）：总银杏萜内酯的含量为11% (w/ w)，总黄酮含量为41 % (w/w)，原花青素含量为47. 5% (w/w)，总银杏萜内酯％ +总黄酮％ +原花青素％ = 99. 5 %，且总黄酮醇苷含量25. 5 % (w/w)，原花青素/总黄酮的含量比值为 1. 16,原花青素/总银杏萜内酯的含量比值4. 3。
[0047] 对以下实施例药效学实验证实，药物7~11抗癫痫的效果差不多，以药物7相对 最佳，以下实施例2~6以药物7作为代表药物来描述本发明效果。
[0048] 实施例2癫痫大鼠模型的制作
[0049] 健康SD大鼠，饲养一星期以适应环境。分批腹腔注射氯化锂3mmol/kg，18-24h后 注射匹罗卡品20mg/kg，且在注射匹罗卡品前30min，首先给予硫酸阿托品lmg/kg对抗匹罗 卡品的外周胆碱能作用。匹罗卡品首次注射30min后，对未引发癫痫的大鼠，补注射匹罗卡 品10mg/kg，每隔30min补注射一次，直至引发癫痫。注射达极量40mg/kg后，仅出现III级以 下一过性发作视为未点燃，对于建模未成功的大鼠予以淘汰。抽搐行为评价采用经Becker 等修改后的Racine分级标准，即：0级，无任何反应：1级，湿狗样抖动、面部抽搐及咀嚼；II 级，点头或甩头；III级，前肢阵挛；IV级，前肢阵挛伴伸直；V级，前肢及全身阵挛，失去平衡， 跌倒。大鼠癫痫持续lh后腹腔注射地西泮（安定）10mg/kg止癫，若效果不佳30min后补注 射一次。注射地西泮后，要格外小心，防止大鼠呼吸受到抑制而死亡。存活大鼠急性期过后 进入静默期，开始的2-4d为毒性阶段，表现为蜷伏不动，不思饮食，易怒。此时，每天腹腔注 射0. 5ml糖盐水（50g/L)，以维持其正常的生理状态。此后行为渐趋正常。经过7d到20d 的静默期后，开始产生自发性癫痫，进入慢性期。存活大鼠进入慢性期后，观察一段时间待 大鼠的慢性发作形成常态后，按照大鼠的发作情况均分成10组，每组8只，分别为正常组， 模型组，药物1~7组，阳性药组。
[0050] 灌胃给药：药物1~7以40mg/kg浓度灌胃；阳性药卡马西平以108mg/kg浓度灌 胃；正常组和模型组灌胃生理盐水。各组大鼠持续给药4周。
[0051 ] 实施例3药物对大鼠癫痫发作次数的影响
[0052] 用监控记录各组大鼠癫痫发作的次数，表1数据显示，7种银杏叶提取物用药前， 各癫痫组大鼠痫性发作无统计学意义（P > 〇. 05)，说明大鼠用药前处于同一水平，具有可 比性。7种银杏叶提取物分别用药4周、8周后，药物1和3对大鼠痫性发作无抑制作用（P > 0. 05);药物2、4、5、6能减少大鼠癫痫发作次数，但与模型组比较，无统计学意义（P > 0. 05);药物7用药4周、8周后，与模型组相比，均能减少大鼠痫性发作的次数，有显著性统 计学意义（Ρ<〇.〇1)。因此，本发明提供的银杏叶提取物（药物7)可降低癫痫大鼠痫性发 作的次数。
[0053] 表1不同银杏叶提取物对癫痫大鼠痫性发作次数的影响（η = 8)
[0055] 实施例4药物对癫痫