专利名称：一种精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医学检验测定技术领域，涉及一种体外诊断用试剂盒及其应用， 具体地说是一种精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒及其应用。
背景技术：
附睾是精子输送、成熟、贮存的场所，附睾分泌功能的下降会对精子的活性和功能产生不良影响。目前，用以检测附睾分泌功能的指标有甘油磷酸胆碱、左旋肉碱以及α-糖苷酶(α -糖苷酶)。研究表明，与左旋肉碱和甘油磷酸胆碱相比，在输精管结扎和确诊为生殖道梗阻的患者中，α -糖苷酶对附睾分泌功能的检测更加特异和灵敏，被认为是附睾分泌功能的标志酶和特异性酶。在输精管结扎、梗阻、切除或先天性精囊缺如、发良不良的患者中，α-糖苷酶活性显著降低；另外，在不完全射精或射精过频以及附睾炎、附睾分泌功能紊乱的患者中，该酶活性也呈现下降现象。相反，α-糖苷酶活性越高，则精子与透明带结合能力越强，宫腔内人工授精成功的可能性越大。精浆α-糖苷酶结合其它指标如精浆果糖、精子染色等的检测，还可实现梗阻性无精子症患者的梗阻部位定位，分泌型或排泄型无精症的鉴别、附睾水平上局部梗阻的判断等，被认为是一种快速、敏感、无创伤性的检测方法。目前，精浆α -糖苷酶(a -GLUC)活性定量检测的方法主要是化学比色法，该法多为手工或半自动操作，加样程序多，操作步骤复杂，试剂和样品混勻一定的时间后，通过分光光度计逐一比色测定，再根据公式计算出结果，不但耗时耗力，而且人为误差也比较大。现在，临床生化检验基本上都实现了自动化分析。全自动生化仪就是将原始手工操作过程中的取样、混勻、温育、检测、结果计算、判断、显示和打印结果及清洗等步骤全部或者部分自动运行，由于其测量速度快、准确性高、消耗试剂量小，现已在各级医院、防疫站、计划生育服务站等得到了广泛应用，配合使用可大大提高常规生化检验的效率和收益。 遗憾的是，截止到目前，无论是国外还是国内，对于精浆α -糖苷酶项目的检测，除了早期的科研成果外，尚没有一种可与全自动生化仪相配套的、商品化的检测试剂盒问世，因此， 建立一种与全自动生化仪相配套使用的精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒及检测方法就显得尤为迫切和重要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，填补市场上的空缺，提供一种与全自动生化仪相配套使用的精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒。本发明的另一目的在于提供所述精浆α -糖苷酶活性定量检测试剂盒在检测精浆α-糖苷酶活性中的应用。为解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案一种精浆α -糖苷酶活性定量检测试剂盒，包括Rl试剂和R2试剂，其中Rl试剂包括以下含量的组份:90-110mmol/L pH6. 8-7. 0缓冲液、1. 0-3. 0U/L葡萄糖氧化酶、
31. 0-2. 5U/L过氧化物酶和0. 01-0. 防腐剂；R2试剂包括以下含量的组份90-110mmol/ LpH6. 8-7. 0 缓冲液、100-115mmol/L 生色剂、70-100mmol/L 麦芽糖、0. 2-1. Ommol/L 4-氨基安替比林和0.01-0. 防腐剂；其中，所述生色剂为苯酚、2，4_ 二氯酚、3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠或4-氨基-3-甲基苯甲酸；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液；所述防腐剂为硫柳汞、庆大霉素或ftx)Clin系列防腐剂中任意一种。所述的精浆α -糖苷酶活性定量检测试剂盒在检测精浆α _糖苷酶活性中的应用。其中，利用精浆α -糖苷酶活性定量检测试剂盒监测检测精浆α -糖苷酶活性，包括如下步骤1)样品制备新鲜精液液化后通过3000 5000rpm离心10 20min，所获得的上
清液即是；2)在全自动生化仪上输入基本参数如下检测项目α-GLUC；样品试剂比1 60;试剂比例R1 R2 = 1 4 ；检测方法速率法；定标方法因子法；主波长500-520nm ；辅波长600-700nm；反应方向上升；反应时间140-270秒；检测时间90-120秒；3)定标操作采用因子法定标，直接输入理论因子F值即可；F值的计算公式如下
权利要求
1.一种精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒，其特征在于，包括Rl试剂和R2试剂，其中Rl试剂包括以下含量的组份:90-110mmol/L ρΗ6· 8-7. 0缓冲液、1. 0-3. 0U/L葡萄糖氧化酶、1. 0-2. 5U/L过氧化物酶和0. 01-0. 1 %防腐剂；R2试剂包括以下含量的组份:90-110mmol/L ρΗ6· 8-7. 0 缓冲液、100-115mmol/L 生色剂、70-IOOmmol/L 麦芽糖、 0. 2-1. Ommol/L 4-氨基安替比林禾口 0. 01-0. 防腐剂；其中，所述生色剂为苯酚、2，4- 二氯酚、3，5- 二氯-2-羟基苯磺酸钠或4-氨基-3-甲基苯甲酸；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液；所述防腐剂为硫柳汞、庆大霉素或ftx)Clin系列防腐剂中任意一种。
2.权利要求1所述的精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒在检测精浆α-糖苷酶活性中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于包括如下步骤1)样品制备新鲜精液液化后通过3000 5000rpm离心10 20min，所获得的上清液即是；2)在全自动生化仪上输入基本参数如下 检测项目α -GLUC ；样品试剂比1 60; 试剂比例R1 R2 = 1 4 ； 检测方法速率法； 定标方法因子法； 主波长500-520nm ； 辅波长600-700nm ； 反应方向上升； 反应时间140-270秒； 检测时间90-120秒；3)定标操作采用因子法定标，直接输入理论因子F值即可； F值的计算公式如下理论因子 F= 103)<VtX 1000 ε χ LxVs其中，IO3为mmol至μ mol的转化系数；Vt为反应液总体积；ε为醌亚胺的理论摩尔消光系数即13. 78XlO3 ;L为比色皿光径(Icm) ；Vs为样品体积;4)样本检测将制备好的精浆样本和Rl试剂、R2试剂放在全自动生化仪的相应位置上，全自动生化仪根据理论因子得出样本中α-糖苷酶的活性酶活性单位U定义在上述反应条件下，每分钟催化1 μ mol麦芽糖分解所需的酶量为一个酶活性单位；精浆中α-糖苷酶活性(U/L) = Δ A/minX F 其中，ΔΑ/min即每分钟吸光度的变化率，F值为已知。
全文摘要
本发明公开了一种精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂；R1试剂包括以下含量的组份90-110mmol/L pH6.8-7.0缓冲液、1.0-3.0U/L葡萄糖氧化酶、1.0-2.5U/L过氧化物酶和0.01-0.1％防腐剂；R2试剂包括以下含量的组份90-110mmol/L pH6.8-7.0缓冲液、100-115mmol/L生色剂、70-100mmol/L麦芽糖、0.2-1.0mmol/L 4-氨基安替比林和0.01-0.1％防腐剂。本发明还公开了该精浆α-糖苷酶活性定量检测试剂盒在测定精浆α-糖苷酶活性中的应用。本发明仅采用2种液体试剂，试剂种类和用量都减少了许多；采用速率法检测，样本不需预稀释，缩短了反应时间；与全自动生化仪配套使用，简化了步骤，节省了试剂，降低了人为误差，自动化、规模化的检测，在提高检测结果准确性和可靠性的同时，大大提高了检测效率。
文档编号C12Q1/26GK102277410SQ201110233989
公开日2011年12月14日 申请日期2011年8月16日 优先权日2011年8月16日
发明者陆金春, 陈晓慧, 高建 申请人:南京欣迪生物药业工程有限责任公司