专利名称：适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于植物检验检疫小麦属作物、食品、深加工产品转基因检测领域，更具体涉及一种利用 Real-time PCR 基于 PSG719 (Ta PSG719gene，FJ497025.1)、UCB (Tu CypBgene, EU868840.1)基因小麦种属特异性区段设计的用于小麦转基因定量检测中内标准基因引物，同时涉及一种转基因小麦定量的内标准基因引物的设计方法，还涉及一种转基因小麦定量的内标准基因引物的用途。
背景技术：
小麦作为世界第一大作物，由于受到转基因技术的限制，小麦转基因研究滞后于其它作物。近年来，我国在小麦转基因方面也取得了初步的进展，并获得了一批具有抗病虫、抗逆境及改善品质的转基因小麦新材料，部分品系已经进入环境释放阶段(尹钧，李永春我国小麦转基因研究的现状及发展趋势中国农业信息2009.13-17)。而人们也开始关注食品安全与健康，而与之相对的则是现有的转基因检测技术的发展仍然在缓步前行。出于对转基因食品可能存在的未知安全隐患的忧虑，同时也是对消费者知情权
的保护，各国政府纷纷立法设立相关的检测阈值以利于管理(c.A.Carter International
Approaches to the Labeling of Genetically Modified Foods Agricultural Issue
Center University of California 2003)。
权利要求
1.一种转基因小麦定量的内标准基因引物，其序列为SEQ ID N0:1所不。
2.—种转基因小麦定量的内标准基因引物，其序列为SEQ ID N0:2所示。
3.—种转基因小麦定量的内标准基因引物的设计方法，其步骤是: A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段如下，同时将上下游序列进行Primer-Blast，设置参数为:特异物种:禾本科；数据库:nr ； 利用Primer5 (Primer C0.Ltd.Canada)软件设计的符合无错配,低发夹结构，二聚体自由能低等要求的内标准基因引物，其信息见下表:
4.权利要求1或2所述的一种转基因小麦定量的内标准基因引物在小麦转基因定量检测中的应 用。
全文摘要
本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤A.通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B.选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C.SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D.普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性；E.普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组，通过Real-timePCR检测，线性关系良好。
文档编号C12N15/10GK103173521SQ20111043229
公开日2013年6月26日 申请日期2011年12月21日 优先权日2011年12月21日
发明者廖玉才, 李和平, 赵正喜, 瞿波, 黄涛, 张静柏, 左东云, 程伟, 杨鹏 申请人:华中农业大学