专利名称：减少细菌携带和中枢神经系统侵害的组合物及其使用方法
减少细菌携带和中枢神经系统侵害的组合物及其使用方法本申请是申请日为2004年11月10日，申请号为200480040200. 4，发明名称为“减少细菌携带和中枢神经系统侵害的组合物及其使用方法”的发明专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2003年11月10日提交的美国临时申请No. 60/518，799的权益，因此其全部内容作为参考文献在此处纳入本文。
致谢本发明由国家健康学会的DC 04976、Al 21548及P30 DK 54781号资助和国家过敏和传染病学会的NOl Al 65299号合约的政府支持下完成。政府对本发明拥有一定的权利。
背景技术：
肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是一种存在相当广泛的人类病原体,它可感染包括肺部、中枢神经系统(CNS)、中耳和鼻道在内的一些器官。这些组织的感染导致诸如支气管炎、肺炎、脑膜炎和鼻窦感染之类的各种症状。肺炎链球菌是人类细菌性脑膜炎的一个主要病因，即使经抗生素治疗仍具有相当高的死亡率和发病率。Quagliarello etal.，(1992) N. Eng. J. Med. 327 :869_872。肺炎链球菌脑膜炎可引起永久性的神经性后遗症。肺炎链球菌脑膜炎在发达国家和发展中国家中的发病率分别为每10万人1-2和20。Anon,(2000)CDSC European Bacterial Meningitis Surveillance Project。在美国肺炎球菌脑膜炎的致死率大约是 18%。Fedson et al.，(1994)Arch. Intern. Med. 154 :2531_2535。肺炎球菌脑膜炎的最高发病率发生于1-4岁的儿童(占所有细菌性脑膜炎的30% )，然后是 15-19 岁(14% )和 1-11 月大的婴儿(13% )。Anon, (2000)CDSC European BacterialMeningitis Surveillance Project。在发达国家和发展中国家中的老年人也受到链球菌脑膜炎的严重侵袭。Butler et al. , (1999) Drugs Aging 15 (Suppl. I) :11-19 ;Fedson etal.，(1999)Vaccine 17Suppl. I :S11_18。世界上主要的肺炎球菌病原体库存在于人的鼻携带物。通常从携带者处获得感染并且鼻携带总是在感染之前。鼻咽建群(colonization of the nasopharynx)被认为是肺炎球菌蔓延到下呼吸道、鼻窦和中耳的必要条件。因此，任何防止携带的医疗干预不仅会消除受治个体的患病风险，还可产生群体免疫甚至还能大大降低群体中未治疗成员的感染风险。虽然肺炎链球菌是一种重要的人类病原体，但是人们对肺炎链球菌造成鼻携带或脑膜炎的机理却知之甚少。一些现有资料显示神经氨酸酶是鼻道的独特致病因子。一个这样的观测来自对NanA缺陷型肺炎链球菌菌株D39的研究，该菌株比其亲本菌株更快地从鼻咽中被消除。Tong et al. , (2002) Infect. Immun. 68 :921_924。神经氨酸酶切割在宿主细胞表面和体液中的多种糖脂、糖蛋白和寡聚糖的末端唾液酸残基。肺炎球菌脑膜炎患者脑脊液(CSF)中游离唾液酸水平的提高与预后不良相关。O' Toole et al.，(1971) J. Clin. Invest. 50 979-985。两个独立的研究发现每个新的临床上的肺炎链球菌分离株都具有神经氨酸酶活性，这进一步说明了这种酶对肺炎链球菌致人生病的重要性。O' Toole et al.，(1971)J. Clin. Invest. 50 :979-985 ；Kelly et al.，J. Bacteriol. 94 :272_273。而且，小鼠传代经常提高肺炎球菌分离株的致病性，它已被报道也会导致神经氨酸酶活性的2-5倍的提高。Vishniakova et al. , (1992)Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii9-10 26-9ο肺炎球菌C-多糖，亦被称为磷壁酸，其结构上与亦被称为脂磷壁酸质的肺炎球菌 F-抗原的多糖部分相同。Fischer et al. , (1993)Eur. J. Biochem 215:851-857。这些分子是肺炎链球菌区别于其它革兰氏阳性菌的独特特征。这些分子上的免疫显性决定子是磷酸胆碱(PC)残基，PC的抗体对于腹膜内、静脉内和鼻部的肺炎球菌的攻击有保护作用。Briles et al.，(1984)Eur. J. Immunol. 14 1027-1030 ；Briles et al.，(1981)Nature294 :88-90 ；Yother et al. , (1982) Infect. Tmmun. 36 :184-188 ；Briles et al. , (1984)J.Mol. Cell. Immunol. I :305_309。然而，虽然所有这些研究都评估了含药血清对全身感染的保护作用，却没有关于这些抗体对鼻建群的保护作用的可用信息。然而，表面磷酸胆碱残基通常位于呼吸器官细菌的表面。Lysenko, et al. , (2000) Infect. Tmmun. 68 :1664_71。肺炎链球菌引起鼻携带和后续疾病的机理还相对未知。迄今为止还没有研究已经确定了减少或防止鼻携带的机理。由于鼻咽建群被认为是肺炎球菌全身性蔓延到下呼吸道、鼻窦乃至到脑的必要条件，所以本领域需要一种在初始的肺炎球菌建群位置提供粘膜免疫的手段。防止鼻咽中初始的肺炎球菌建群将防止鼻携带并减少肺炎链球菌在个体之间的传播。而且，在鼻咽部的粘膜表面提供免疫能防止或减少由肺炎链球菌引起的后续疾病。
发明内容
在此提供用于减少或防止细菌感染(例如肺炎球菌感染)、鼻携带、鼻建群和中枢神经系统侵害的组合物。任选地，该组合物被设计为用于粘膜给药。在此提供去毒的肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质，或这些中任意一个的抗原性部分和包括这些去毒试剂的组合物。还提供组合物，它包括肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质或这些中任意一个的抗原性部分和可药用的载体。任选地，该组合物可包括肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质或这些中任意一个的抗原性部分的任意组合。还提供了去毒的肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质，或这些中任意一个的抗原性部分和包括这些去毒试剂的组合物以及使用该试剂的方法。还提供了在受试者体内产生针对肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质，或肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸或肺炎球菌脂磷壁酸质的任意一个的抗原性部分的抗体的方法，包括给予受试者包括试剂的组合物。任选地，该组合物适用于给药至粘膜表面或全身给药。进一步提供了包括针对肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球 菌脂磷壁酸质或这些中任意一个的抗原性部分的抗体和可药用的载体的组合物。任选地，该组合物适用于给药至粘膜表面或全身给药。进一步提供了在受试者体内减少或防止鼻携带、鼻建群或细菌感染(例如肺炎球菌感染)的方法，包括将在此教导的组合物与受试者的鼻粘膜相接触。
另外的优点一部分将在随后的描述中阐明，还有部分可从描述中显而易见，或者从下述的各方面实践中知道。下述的优点将通过所附的权利要求中具体指出的要素和组合的方式实现和获得。应当理解前述的一般性描述和随后的细节描述仅仅是示例性和解释性的，而非限制性的。
纳入说明书中并作为说明书一部分的附图解释了下述的一些方面。图I显示了将3X IO6CFU的肺炎球菌的未包膜的R36A菌株或致病性的EF3030菌株经鼻给予xid小鼠。鼻部攻击后I和4天，采集神经组织0Ν/Ε、0Β、脑和淋巴组织(NALT，CLN和肺)，搅碎并对活肺炎球菌的存在进行分析。示出了 Iogltl菌落形成单位(CFU)的平均值+—个标准误差(SE)。Y轴上的O值表示没有可检出的CFU。示出的是每组5只小鼠的平均CFU+SE，代表了三组不同的实验。
图2显示了肺炎链球菌EF3030菌株在鼻部攻击后的CFU器官分布动力学。在第
4、11、18、25和39天采集了 ON/E、0B、脑、血、NW、NALT, CLN和肺组织并分析肺炎链球菌的存在。3X IO6CFU的肺炎链球菌的等分试样导致了鼻道建群和随后的OB感染。Y轴上的O值表示没有可检出的CFU。示出的是三个单独实验的平均CFU+SE。除39天的时间点代表5只小鼠之外，每个时间点代表10只小鼠。图3显示了在与GLS预培养之后肺炎链球菌菌株EF3030的分布。在鼻部使用之前用20 μ g的无唾液酸基的GMl (a-GMl)或125 μ g的混合GLS (MG)培养肺炎链球菌的等分试样(3 X IO7CFU) 30分钟。在四天之后采集ON/E、OB、脑和NW、NALT和肺，并对肺炎链球菌的数量进行分析。Y轴上的O值表示没有可检出的CFU。示出的是5只小鼠的平均值+ —个SE，在统计分析后获得P值。该数据表示两个单独的实验。图4显示了在鼻部攻击后OB中肺炎链球菌的TIGR4菌株的检测。5 X IO5CFU的等分试样由鼻部和血液给样，攻击后一周分析NW、0N/E、0B和脑组织的建群(分图A和B)。还用PCR分析了这些组织(IOyg DNA)中肺炎球菌溶血素基因的存在(分图C)。另外，还用PspA特异性抗体的免疫荧光法观察了对照组(D)或受肺炎链球菌攻击的小鼠的OB肺炎链球菌(分图E和F)。示出的是平均值+—个SE。该数据表示三个单独的实验。图5显示了分泌型NanA、TIGR4和R6(2型)的基序比较，后者具有用于附着细胞壁的LPXTG(SEQ ID NO :14)基序。TIGR4基因包括一个在编码LPETG(SEQ ID NO 13)基序序列之前的终止密码子。NanA没有这个基序，经由TIGR4分泌到环境中。图6A显示了在被肺炎链球菌亲代菌株TIGR4( ■)或NanA等基因(isogenic)突变体TIGR4/nanA-( O )鼻内感染的CBA/N小鼠的鼻洗出物中活性肺炎球菌的动力学。每个点表示了每只小鼠的每毫升鼻洗出液中的细菌总数。与用TIGR4接种的小鼠比较，*为P < O. 05 ; * * 为 P < O. 01 ; * * * 为 P < O. 005。图6B显示了被肺炎链球菌亲代菌株TIGR4( ■)或NanA等基因突变体TIGR4/nanA-( O )鼻内感染的CBA/N小鼠的鼻建群动力学。每个点表示了每只小鼠的每克组织中的细菌总数。与用TIGR4接种的小鼠比较，*为P<0. 05;**为P<0. 01;***为P
<O. 005。图6C显示了被肺炎链球菌亲代菌株TIGR4( ■)或TIGR4/nanA_( O )鼻内感染的CBA/N小鼠的嗅球中CFU的动力学。每个点表示了每只小鼠的每克组织中的细菌总数。与用TIGR4接种的小鼠比较，*为Ρ<0·05;**为Ρ<0·01;***为Ρ<0· 005。图7Α显示了在被肺炎链球菌亲代菌株EF3030 ( ■)或EF3030/nanA_ (〇)鼻内感染的CBA/N小鼠的鼻建群动力学。每个点表示了每只小鼠的每毫升鼻洗出液中的细菌总数。与用 EF3030 接种的小鼠比较，*SP<0.05;**SP<0.01;***SP< 0. 005。图7B显示了在被肺炎链球菌亲代菌株EF3030 ( ■)或EF3030/nanA_ (〇)鼻内感染的CBA/N小鼠的鼻建群动力学。每个点表示了每只小鼠的每克组织中的细菌总数。与用 EF3030 接种的小鼠比较，* 为 Ρ<0·05;** 为 Ρ<0·01;*** 为 Ρ<0· 005。图7C显示了在被肺炎链球菌亲代菌株EF3030( ■)或NanA等基因突变体EF3030/nanA-(〇)鼻内感染的CBA/N小鼠的鼻建群动力学。每个点表示了每只小鼠的每克组织中 的细菌总数。与用EF3030接种的小鼠比较，*为P<0. 05;**为P<0. 01;***为P
<O. 005。当集合了全部时间点的野生型和突变型的数据时，EF3030和EF3030NanB_的比较是 P = O. 001。图8显示了在被肺炎链球菌亲代菌株TIGR4( ■)或TIGR4/nanB_( O )鼻内感染的CBA/N小鼠在接种4天后的鼻建群动力学。每个点表示了每只小鼠的每毫升鼻洗出液或每克组织中的细菌总数。每组中的TIGR4和TIGR4/nanB-之间均没有统计学上的显著性差
巳图9显示了在被肺炎链球菌亲代菌株TIGR4 ( ■)或TIGR4/nanA_ (〇)或TIGR4/AB-鼻内感染的CBA/N小鼠在接种4天后的鼻建群动力学。每个点表示了每只小鼠的每毫升鼻洗出液或每克组织中的细菌总数。每组中的TIGR4/nanA-和双突变体TIGR4/nanAB_之间均没有统计学上的显著性差异。图10显示了在鼻攻击之后抗磷酸胆碱的特异性单克隆抗体对肺炎链球菌鼻建群的抑制。在鼻攻击之后抗磷酸胆碱的特异性单克隆抗体对肺炎链球菌鼻建群的抑制。总共I X IO6CFU的TIGR4菌株与5 μ g的IgG3亚类或IgM同种型的抗磷酸胆碱单抗共培养。每只鼻孔的总给药量为5μ I。示出的是分别在使用后9和12小时时500μ I鼻洗出液中的CFU。示出的是每组5只小鼠的平均值+SD。
具体实施例方式在本化合物、组合物、物品、装置和/或方法公开和描述之前，应当理解下述各方面并不限于特定的合成方法或特定的给药方法，因为它们理所当然地可有多种变化。还应理解在此使用的术语仅是出于描述具体方面的目的而非意在限制。必须指出，除非上下文中明确指出，否则在说明书和所附的权利要求中使用的单数形式“一” “一个”和“该”包括复数指代物。因而例如提及“一种抗原片段”包括抗原片段的混合物，提及“一种药用载体”或“佐剂”包括两种或更多这样的载体或佐剂的混合物，
坐坐寸寸ο正如通篇所使用的，“受试者”意为一个个体。因而，“受试者”可以包括驯养的动物，如猫、狗等，家畜(例如牛、马、猪、绵羊、山羊等)，实验动物(例如小鼠、兔、大鼠、豚鼠等)和鸟类。一方面，受试者为例如灵长类动物或人的哺乳动物。“任选的”或“任选地”意为后来描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括该事件或情况发生和不发生的实例。例如，短语“任选地该组合物可以包括一个组合”意为该组合物可以包括不同分子的组合或可以不包括组合，以致于该描述包括存在该组合和缺少该组合(即组合的单个成员)。范围在这里被表述为从“大约”一个具体的值，和/或到“大约”另一个具体的值。当表述这样一个范围时，另一方面包括从一个具体的值和/或到另一个具体的值。类似地，当值通过前面冠以“大约”被表述为近似值时，它应被理解为该具体值形成了另一方面。应进一步理解每一个范围的端点在相关和独立于另一个端点时都是有意义的。在此提供用于减少或防止细菌感染(例如肺炎球菌感染)、鼻携带、鼻建群和中枢神经系统侵害的组合物和方法。肺炎链球菌在鼻道内建群，部分是通过C-多糖-神经节苷脂相互作用穿过上皮细胞屏障，再通过内吞作用进入上皮细胞。C-多糖通过结合神经节苷脂的末端或内部的GalNAc β l-4Gal序列来结合无唾液酸基GM1、无唾液酸基GM2和岩藻糖基无唾液酸基GM1。虽然无唾液酸神经节苷脂在细胞质膜中含量在正常情况下较低，但在人肺部的肺炎链球菌有两种神经氨酸酶NanA和NanB时例外(Berry et al.，(1996)J. Bacteriol. 178 :4854-4860)，NanA和NanB可以各自切割N-乙酰神经氨酸的α2，3_和α 2,6-键生成半乳糖,及α 2,6-键生成N-乙酰半乳糖胺。Scanlon et al. , (1989) Enzyme41 :143-150。神经节苷脂的唾液酸残基以α2，3连接半乳糖。肺炎链球菌的神经氨酸酶去除存在于所有单唾液酸神经节苷脂的尾端唾液酸残基和可见于双-和三唾液酸神经节苷脂中的半乳糖连接的多个唾液酸残基。因此，他们可以暴露发现于最常见的哺乳动物细胞表面的神经节苷脂中的GalNAc β l-4Gal序列。这些残基是推测的细胞表面的C-多糖结合位点。肺炎链球菌通过使用通常较多与细胞壁相连的NanA和被认为是分泌型的NanB，产生它自己在呼吸道上皮细胞上的附着位点。这样肺炎球菌C-多糖结合无唾液酸神经节苷月旨，特别是无唾液酸GM1，和可将大量GMl转化为无唾液酸GMl的神经氨酸酶，可以在0Ν/Ε上产生大量的C-多糖结合位点。这种机制为鼻携带提供了便利并使肺炎链球菌可通过鼻嗅觉神经和覆盖鼻甲(0Ν/Ε)和嗅球(OB)的上皮组织进入CNS。类似地，中耳炎和其他包括肺炎链球菌的感染也可以类似地通过支配中耳的神经得以进入CNS。除肺炎链球菌以外的其他细菌也有类似的神经氨酸酶，因此同样的机制也发生于其他细菌。因此在此公开的组合物和方法是靶向于多种细菌的这种机制的。在此教导的试剂、组合物和方法涉及阻断这种机制从而减少携带和防止CNS侵害。
任选地，该组合物被设计为用于粘膜给药。例如，在此提供一种组合物，包括肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质或这些中任意一个的抗原性部分和可药用的载体，其中的组合物适用于粘膜表面给药。任选地，该组合物可以包括肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质或这些中任意一个的抗原性部分的任意组合。任选地,组合物的形式是气雾剂、鼻腔雾剂、鼻腔喷剂(nasal spray)、滴鼻剂、喷雾溶液(nebulizer solution)、气雾吸入剂(aerosol inhalant)、栓剂或任何适于粘膜给药的形式(包括口服给药)。任选地，该组合物可存在于用于给药的微球或脂质体中。“给药至粘膜表面”意为给药至包括呼吸系统、消化系统或泌尿生殖系统的任何粘膜表面。粘膜表面的实例包括但不限于鼻腔(属于嗅觉神经上皮)、鼻咽、直肠、阴道、喉部、口部、咽鼓管、气管、支气管和其他气道以及肠粘膜。
粘膜佐剂可用于粘膜表面给药。该佐剂的给药可伴随本发明的组合物一起、刚刚先于或后于组合物的给药。任选地，该组合物进一步包括佐剂。粘膜佐剂的组成包括例如革巴向粘膜诱导位点的试剂。该佐剂可任选地从包括但不限于细胞因子、趋化因子、生长因子、血管生成因子、细胞凋亡抑制素或它们的组合中选择。当选择细胞因子作为佐剂时，该细胞因子可以从包括但不限于白介素(包括IL-1、IL-I Y、IL-I β、IL-2、IL_5、IL_6、IL-12、IL-15和EL-18);转化生长因子-β (TGF-β);粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；干扰素-Y (IFN-Y)或其他有佐剂活性的细胞因子中选择。有佐剂活性或其他生物活性的细胞因子的片段或突变体或模拟的细胞因子(或它们的组合)也可以被用于本发明的组合物和方法。当选择趋化因子作为佐剂时，该趋化因子可以任选地从包括但不限于淋巴细胞趋化因子、RANTES、LARC、PARC、MDC、TARC、SLC和FKN中选择。当选择细胞凋亡抑制素作为佐剂时，该细胞凋亡抑制素可以任选地从包括但不限于半胱天冬酶-8的抑制素和它们的组合中选择。当选择血管生成因子作为佐剂时，该血管生成因子可以任选地从包括但不限于碱性成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、透明质烷(HA)片段和它们的组合中选择。事实上，可选择正型(+)和负型(_)血管生成因子作为佐剂。 本发明的基本上无毒的生物活性粘膜佐剂的其他实例包括激素、酶、生长因子或它们的生物活性部分。这样的激素、酶、生长因子或它们的生物活性部分可以来源于人、牛、猪、羊、犬、猫、马或鸟类，例如，可为肿瘤坏死因子(TNF)、催乳素、表皮生长因子(EGF)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、胰岛素样生长因子(IGF-I)、促生长素(生长激素)或胰岛素，或其受体在免疫系统细胞上表达的任何其他激素或生长因子。粘膜给药的佐剂也包括细菌毒素，例如霍乱毒素(CT)、大肠杆菌(E. coli)不耐热毒素(LT)、艰难梭菌毒素A和百日咳毒素(PT),或它们的组合、亚基、类毒素、嵌合体或突变体。例如，可使用天然霍乱毒素亚基B(CTB)的纯化制品。这些毒素中任一个的片段、同系物、衍生物和融合体，只要还保持佐剂活性，也是适用的。优选地，使用一个降低毒性的突变体。合适的突变体在例如 WO 95/17211 (Arg-7-Lys CT 突变体)、W0 96/6627 (Arg-192-GlyLT突变体)和WO 95/34323 (Arg-9-Lys和Glu-129-Gly PT突变体)中有所描述。另外可用于本发明的方法和组合物的LT突变体包括例如Ser-63-Lys、Ala-69-Gly、Glu-IIO-Asp和Glu-112-Asp突变体。其他的佐剂例如RH-3配体；CpG基序寡核苷酸；例如大肠杆菌、明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)或弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)的细菌单磷酸类脂A(MPLA);皂甙(例如QS21)或聚乳酸乙醇酸交酯(PLGA)微球也可以被用于粘膜给药。可能的其他粘膜佐剂有防御素和包括CpG基序的寡核苷酸。正如通篇所使用的，“可药用的载体”意为一种生物学或其他方面没有不良效果的材料，即该材料可与所选化合物一起给药至个体而不会产生任何不良生物学效果或与包括该材料的药物组合物的任何其它成分以有害的方式相互作用。任何在此描述的组合物都可以与一种可药用的载体一起在治疗上使用。在此描述的化合物可以方便地配制成由一种或多种化合物以及可药用载体组成的组合物。见于例如Remington' s Pharmaceutical Sciences, latest edition, by E. ff. Martin Mack Pub.Co.，Easton, PA，它公开了制备药物组合物的典型载体和常规方法，这些载体和方法也可用于制备本文所述的化合物制剂，其全部内容作为参考文献在此处纳入本文。最典型情况下，它们是将组合物给药至人体的标准载体。一方面，人类和非人类，包括例如无菌水、盐溶液、生理pH的缓冲溶液的溶液。其他化合物可以按照本领域技术人员使用的标准程序给药。在此描述的药物组合物除选择的分子之外可包括但不限于载体、增稠剂、稀释剂、缓冲液、防腐剂、表面活性剂等等。药物组合物还可包括一种或多种活性成分例如抗菌试剂、抗炎试剂、麻醉剂等等。肺炎球菌神经氨酸酶意为肺炎球菌中发现的任何神经氨酸酶分子，表I示出了几个菌种的神经氨酸酶的序列比对。神经氨酸酶分子还包括例如SP1326。SP1326的氨基酸序列可以通过 GenBank 登记号 No. AAK75424 得到。Tettelin, H. , et al. , (2001) Science293 :498-506。由GenBank登记号No. AAK75424提供的包括SP1326的任何氨基酸序列和核酸序列的全部信息完整地作为参考文献在此处纳入本文。正如通篇所定义的，所有氨基酸序列的氨基酸残基根据表I所示的肺炎球菌R6菌株的氨基酸序列进行编号。表IClustalff (vl. 4)多序列比对比对了 3个序列比对得分= 6332插入空位=32保守性相同(Conserved Identities) = 105配对比对方式慢配对比对参数开放空位罚分(OpenGap Penalty) = 10. O扩展空位罚分(Extend Gap Penalty)=0. I 相似性矩阵(SimilarityMatrix) :blosum多序列比对参数开放空位罚分(OpenGap Penalty) = 10. 0 扩展空位罚分(Extend GapPenalty) = 0. I延迟差异(DelayDivergent) =40% 空位距离=8相似性矩阵(SimilarityMatrix) :blosum处理时间3. 5秒R6 NanA1MSYFRNRDIDIERNSMNRSVQERKCRYSIRKLSVGAVSMIVGAVVFGTSP50TIGR4NanAIMNRSVQERKCRYSIRKLSVGAVSMIVGAVVNGTSP35S. typhimiriumI0R6 NanA51 VLAQEGASEQPLANETQLSGESSTLTDTEKSQPSSETELSGNKQEQERKD100TIGR4NanA36 VLAQEGASEQPLANETQLSGESSTLTDTEKSQPSSETELSGNKQEQERKD85S. typhimiriumI0
R6 NanA101 KQEEKIPRDYYARDLENVETVIEKEDVETNASNGQRVDLSSELDKLKKLE150TIGR4 NanA 86 KQEEKIPRDYYARDLENVETVIEKEDVETNASNGQRVDLSSELDKLKKLE135S. typhimiriumI0R6 NanA151 NATVHMEFKPDAKAPAFYNLFSVSSATKKDEYFTMAVYNNTATLEGRGSD200TIGR4 NanA 136 NATVHMENKPDAKAPA FYNLNSVSSATKKDEYFTMAVYNNTATLEGRGSD185S. typhimiriumI
0R6 NanA201 GKQFYNNYNDAPLKVKPGQWNSVTFTVEKPTAELPKGRVRLYVNGVLSRT250TIGR4 NanA 186 GKQNYNNYNDAPLKVKPGQWNSVTFTVEKPTAELPKGRVRLYVNGVLSRT235S. typhimirium IMTVEKSVVFKAEG----------EHF
16*****R6 NanA251 SLRSGNFIKDMPDVTHVQIGATKRANNTVWGSNLQIRNLTVYNRALTPEE300TIGR4 NanA236 SLRSGNFIKDMPDVTHVQIGATKRANNTVWGSNLQIRNLTVYNRALTPEE285S. typhimirium17 TDQKG---------------------NTIVGS------------------
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权利要求
1.一种组合物，包括肺炎球菌磷壁酸或肺炎球菌脂磷壁酸质的磷酸胆碱或其抗原性部分和可药用载体，其中该组合物适用于给药至粘膜表面。
2.权利要求I的组合物，其中该组合物为鼻腔喷剂。
3.权利要求I的组合物，其中该组合物为喷雾溶液。
4.权利要求I的组合物，其中该组合物为气雾吸入剂。
5.一种容器，包括权利要求I的组合物。
6.权利要求5的容器，其中该容器为鼻腔喷雾器。
7.权利要求5的容器，其中该容器为雾化器。
8.权利要求5的容器，其中该容器为吸入器。
9.权利要求I的组合物在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内产生特异性针对肺炎球菌神经氨酸酶的抗体。
10.权利要求I的组合物在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内减少肺炎球菌的鼻携带。
11.权利要求I的组合物在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内减少或防止肺炎球菌的感染。
12.权利要求11的用途，其中该肺炎球菌感染为脑膜炎。
13.权利要求11的用途，其中该肺炎球菌感染为中耳炎。
14.权利要求11的用途，其中该肺炎球菌感染为肺炎。
15.权利要求11的用途，其中该肺炎球菌感染为溶血性尿毒症。
16.一种组合物，包括肺炎球菌磷壁酸或肺炎球菌脂磷壁酸质的非磷酸胆碱抗原性部分和可药用载体，其中该组合物适用于给药至粘膜表面。
17.权利要求16的组合物，其中该组合物为鼻腔喷剂。
18.权利要求16的组合物，其中该组合物为喷雾溶液。
19.权利要求16的组合物，其中该组合物为气雾吸入剂。
20.一种容器，包括权利要求16的组合物。
21.权利要求20的容器，其中该容器为鼻腔喷雾器。
22.权利要求20的容器，其中该容器为雾化器。
23.权利要求20的容器，其中该容器为吸入器。
24.权利要求16的组合物在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内产生特异性针对肺炎球菌神经氨酸酶的抗体。
25.权利要求16的组合物在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内减少肺炎球菌的鼻携带。
26.权利要求16的组合物在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内防止肺炎球菌的感染。
27.权利要求26的用途，其中该肺炎球菌感染为脑膜炎。
28.权利要求26的用途，其中该肺炎球菌感染为中耳炎。
29.权利要求26的用途，其中该肺炎球菌感染为肺炎。
30.权利要求26的用途，其中该肺炎球菌感染为溶血性尿毒症。
31.一种组合物，包括磷酸胆碱抗体或其片段和可药用载体。
32.权利要求31的组合物，其中该组合物适用于给药至粘膜表面。
33.权利要求31的组合物，其中该组合物为鼻腔喷剂。
34.权利要求31的组合物，其中该组合物为喷雾溶液。
35.权利要求31的组合物，其中该组合物为气雾吸入剂。
36.一种容器，包括权利要求31的组合物。
37.权利要求36的容器，其中该容器为鼻腔喷雾器。
38.权利要求36的容器，其中该容器为雾化器。
39.权利要求36的容器，其中该容器为吸入器。
40.一种磷酸胆碱的抗体或其片段在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内减少肺炎球菌的鼻携带。
41.权利要求40的用途，其中该药剂在给药时与受试者的鼻粘膜相接触。
42.一种磷酸胆碱的抗体或其片段在药剂制备中的用途，所述药剂可在受试者体内防止肺炎球菌的感染。
43.权利要求42的用途，其中该药剂在给药时与受试者的鼻粘膜相接触。
全文摘要
本发明提供一种用于减少或防止细菌感染(如肺炎球菌感染)、鼻携带、鼻建群和中枢神经系统侵害的组合物。提供的组合物包括肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质或者神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质的抗原性部分。任选地，该组合物可包括肺炎球菌神经氨酸酶、磷酸胆碱、肺炎球菌磷壁酸、肺炎球菌脂磷壁酸质或其中任意一个的抗原性部分的任意组合。任选地，该试剂是去毒性的。还提供制备和使用在此公开的组合物的方法。具体提供在受试者中产生抗体的方法，包括给予受试者在此教导的试剂或组合物。还提供了减少或防止受试者中鼻携带或肺炎球菌感染的方法，包括给予受试者在此教导的组合物。
文档编号C12N9/24GK102861325SQ20121029076
公开日2013年1月9日 申请日期2004年11月10日 优先权日2003年11月10日
发明者F·W·范金克尔, D·E·布里利斯, J·M·瓦特 申请人:Uab研究基金会