专利名称：一株海洋真菌萨氏曲霉及其在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌-萨氏曲霉(Aspergillus
sydowii) MNP12010103，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
癌症一直都是人类难以攻克的一个难题，寻找生理活性强的物质成为人类攻克疾病的主要工作之一。海洋微生物代谢产物研究是近年来国际上新兴的研究课题。在海洋生态系统漫长的演化过程中，海洋微生物形成了适应严酷生存环境的独特机制，进化出基因型、代谢途径和生理生态功能的多样性，蕴藏着大量新颖的次级代谢产物。一些海洋来源的先导化合物已成功地开发成药物,包括来源于海洋真菌的抗感染药物头孢霉素(cephalo sporins),来源于海绵的抗肿瘤药物阿糖胞苷(cytarabine, AraC),抗病毒药物阿糖腺苷(vidarabine, AraA),来源于芋螺的镇痛药芋螺毒素(ziconotide,Prialt)等。目前,全球还有40余种海洋新药批准进入临床研究。在过去的几十年，全世界范围内已从海洋微生物中分离得到新型化合物20000多种。大量研究表明，海洋真菌的代谢产物结构类型主要有:环肽类、留醇类、蒽醌类、吡喃酮类、缩酮类、含羰基羟基类(醛酮化合物、酯和游离羧基化合、含羟基化合物)、含氮类(含硫生物碱类化合物、哌嗪类与喹唑类化合物、吡咯类、其他氮杂稠环类与吡啶类化合物、酰胺、胺与其他含氮化合物)。海洋真菌产生的生物活性物质主要有:抗菌活性物质、抗肿瘤活性物质。目前研究较多的抗肿瘤、抑制乙酰胆碱酯酶、抗细菌和抗氧化等海洋真菌次级代谢产物已成为具有生物医学意义的天然化合物丰富来源，均具有广阔的药用前景。故从海洋真菌的次级代谢产物中发现高活性的物质对于发现先导化合物非常的重要，对疾病的攻克也具有着重要的意义。
发明内容
本发明目的是提供一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——萨氏曲霉(Aspergillussydowii) MNP12010103，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明采用的技术方案是:—株具有抗肿瘤活性的海洋真菌-萨氏曲霉(Aspergillus sydowii)
MNP12010103,保藏于中国典型培养物保藏中心，地址:中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号:CCTCC No:M 2012391，保藏日期2012年10月8日。所述萨氏曲霉MNP12010103的菌落特征如下:涂布或划线接种于海水PDA上生长迅速，在海水PDA上28°C培养 5d，菌落直径31mm，平坦，中部突起，质地绒状至絮状，分生孢子结构大量，表面灰蓝色至暗蓝色，边缘白色，老后色深，无渗出液，菌落反面淡黄褐色，可溶性色素缺乏；所述萨氏曲霉的菌体生长特征如下:在液体培养基中，28°C培养48 h后呈颗粒状悬浮生长；所述的萨氏曲霉MNP12010103分生孢子头球形至辐射形，小分生孢子头似青霉状，散乱或疏松柱形。本种的最主要特征是致密的柱形分生孢子头和光滑的小分生孢子，且菌丝体呈白色。本发明菌株是由浙江省三门湾海域采集的海水中分离和筛选得到的。菌株的筛选纯化方法为:将采集的海水运用稀释涂布法涂于土豆平板培养基上，28 V培养至菌落数量不再增加，挑取单菌落至斜面培养基上。28°C培养2d，以菌株形态特征区别进行挑选，即得该菌株，并对该菌株进行菌种鉴定。所述的平板培养基和斜面培养基的组成相同，组成为:土豆15(T350g/L，葡萄糖10 30g/L，琼脂15 35g/L，溶剂为水，ρΗ7.2 8.0。将所述的萨氏曲霉Aspergillus sydowii MNP12010103 的 rDNA-1TS 序列在美国国立生物信息中心(National Center for Biotechnology Information USA, NCBI)的GenBank中进行同源比对,鉴定为萨氏曲霉(Aspergillus sydowii)。其rDNA-1TS的测序序列如下:
权利要求
1.一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌-萨氏曲霉(Aspergillus sydowii)MNP12010103，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址:中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号:CCTCC No:M 2012391，保藏日期2012年10月8日。
2.如权利要求1所述的萨氏曲霉MNP12010103，其特征在于其rDNA-1TS的测序序列如下:CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGAGTGCGGGCTGCCTCCGGGCGCCCAACCTCCCACCCGTGAATACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAACCCCCTCGGGGGCGAGCCGCCGGGGACTACTGAACTTCATGCCTGAGAGTGATGCAGTCTGAGTCTGAATATAAAATCAGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAACTGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGTGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCGACTAGGGCCGGCCGGGCGCCAGCCGACGTCTCCAACCATTTTTCTTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA。
3.权利要求1所述的萨氏曲霉MNP12010103在制备抗肿瘤药物中的应用。
4.如权利要求3所 述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物为治疗肝癌、神经癌或淋巴癌的药物。
5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于萨氏曲霉MNP12010103提取物用于制备抗肿瘤药物。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述提取物为乙酸乙酯提取物，由如下方法制得:将萨氏曲霉MNP12010103接种至液体发酵培养基中，于25 35°C、15(T250 r/min振荡条件下培养14 30(1，得到发酵液，发酵液去除菌体细胞后用乙酸乙酯萃取，浓缩挥干得浸膏，即为所述萨氏曲霉MNP12010103的乙酸乙酯提取物；所述发酵培养基组成为:葡萄糖8^20 g/L，蛋白胨1.5^3 g/L，酵母膏0.8 2g/L，溶剂为水:人工海水体积比1:广4的混合物，pH 7 8。
全文摘要
本发明提供了一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——萨氏曲霉(Aspergillus sydowii)MNP12010103及其应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC NOM 2012391，保藏日期2012年10月8日。本发明的有益效果主要体现在(1)本发明的海洋真菌萨氏曲霉MNP12010103营养要求简单、容易培养；(2)该菌株的代谢产物具有抗肿瘤活性；(3)该菌株的次级代谢产物的抗肿瘤活性高，其培养所得的发酵液总浸膏对HepG2细胞、PC12细胞和U937细胞有较强的抗肿瘤活性。
文档编号C12R1/66GK103074234SQ20121057433
公开日2013年5月1日 申请日期2012年12月25日 优先权日2012年12月25日
发明者王鸿, 叶建军, 赵美蓉, 梅建凤, 易喻, 应国清 申请人:浙江工业大学