专利名称：一种对新鲜及冷冻组织样本egfr外显子基因突变检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种对新鲜及冷冻组织样本EGFR外显子基因突变检测试剂盒。
背景技术：
EGFR是一种蛋白酪氨酸激酶受体(RTK)，位于第7号染色体pl3 q22区，全长200kb，由28个外显子组成，编码1186个氨基酸，其糖蛋白分子量约170kDa。EGFR家族有4 个结构相似的受体分子ErbBl (EGFR)、ErbB2 (HER2)、ErbB3 (HER3)、ErbB4 (HER4)。EGFR诱导癌症至少通过3种机制EGFR配体的过表达，EGFR的扩增或EGFR的突变活化。在这3种机制中，EGFR的突变活化是导致肿瘤细胞异常生物学行为的最主要因素。 基于EGFR在肿瘤细胞过表达的特点，目前已开发出多种EGFR靶向药物。按照作用机制，可将其分为5种1)作用于EGFR激酶区的小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)，如吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib) ；2)作用于EGFR胞外域部分的单克隆抗体(mAb),如西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Vectibix) ；3)利用RNAi作用机理,特异性降解EGFR ；4)与EGFR单克隆抗体偶联的细胞毒素、细胞杀伤因子、放射性粒子等，选择性杀死富含EGFR的肿瘤细胞；5)阻碍EGFR的二聚化/寡聚化进而抑制EGFR的激活。其中EGFRTKI药物在治疗非小细胞肺癌(NSCLC)临床疗效明显，已被推荐为晚期患者的一线药物。常用的EGFR-TKI包括吉非替尼和厄洛替尼，是目前NSCLC患者最有效的靶向药物。但EGFR-TKI并非对所有患者都有效。EGFR外显子18、19或21发生突变的患者，吉非替尼有效率可高达80%，而野生型患者基本无效。EGFR敏感突变是药物有效的前提1-4。但部分EGFR-TKI初始治疗有效的患者后期会发生耐药，与EGFR E20突变密切相关5。以NSCLC为例，EGFR E20突变发生率为I. 6%，约占EGFR突变9%，50%的EGFR-TKI耐药由EGFR E20的T790M点突变所致。因此通过检测EGFR基因有没有突变，可以筛选出抗EGFR (表皮生长因子受体)靶向药物治疗有效的肿瘤患者，实现肿瘤病人的个体化治疗，从而延长患者生存期。对于有突变的患者，则能减少不必要的治疗费用和毒副作用。目前临床检测EGFR基因突变的检测试剂原料需多方配备，实验过程分步进行，耗时较长，容易污染，准确性不高，所以探索一种检测EGFR基因突变快速可靠的方法已经成为临床实验研究的热点问题。
实用新型内容为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种对新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2，盒体I内设置有PCR管3、EGFR18引物瓶4、EGFR19弓丨物瓶5、EGFR20引物瓶6、EGFR21引物瓶7、装酶混合物的试剂瓶8、加样器吸头9、电泳分离检测试剂瓶10。[0007]进一步地，所述试剂盒还包括去离子水瓶11、醋酸钠溶液瓶12。所述EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6和EGFR21引物瓶7分别盛放特异性扩增EGFR外显子18、19、20和21的引物，引物浓度为5 μ mo I/L。所述EGFR18、EGFR19、EGFR20 和 EGFR21 的引物分别为
引物序列片段大小
EGFR18-F5'-AGCATGGTGAGGGCTGAGGTGAC-3'262bp
EGFR18-R5 '-ATATACAGCTTGCAAGGACTCTGGy
EGFR19-F5'-CCAGATCACTGGGCAGCATGTGGCACC-3' 265bp
EGFR19-R5'-AGCAGGGTCTAGAGCAGAGCAGCTGCC-3'
EGFR20-F5'-GATCGCATTCATGCGTCTTCACC-Y362bp
EGFR2O-R5'-TTGCTATCCCAGGAGCGCAGACC-3,
EGFR21-F5 ^TCAGAGCCTGGCATGAACATGACCCTG-37 296bp
EGFR21-R5'-GGTCCCTGGTGTCAGGAAAATGCTGG-3'所述酶混合物包括浓度为O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,
I.25U/25 μ I 的 HsTaq0所述电泳分离检测试剂是Hi-DiFormamide试剂。本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、包含了实验所需的大部分试剂使得检测过程不易受污染；本试剂盒在检测新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。
图I为本实用新型的整体结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型进行进一步说明。如图I所示，本实用新型的一个实施例为对新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变检测试剂盒，一种对新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2，盒体I内设置有PCR管3、EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6、EGFR21引物瓶7、装酶混合物的试剂瓶8、加样器吸头9、电泳分离检测试剂瓶10、去离子水瓶11、醋酸钠溶液瓶12。所述EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6和EGFR21引物瓶7分别盛放特异性扩增EGFR外显子18、19、20和21的引物，引物浓度为5 μ mo I/L。所述EGFR18、EGFR19、EGFR20 和 EGFR21 的引物分别为
权利要求1.一种对新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，包括盒体(I)、盒盖(2)，盒体(I)内设置有PCR管(3)、EGFR18引物瓶⑷、EGFR19引物瓶(5)、EGFR20引物瓶(6)、EGFR21引物瓶(7)、装酶混合物的试剂瓶(8)、加样器吸头(9)、电泳分离检测试剂瓶(10)。
2.根据权利要求I所述的对新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括去离子水瓶(11)、醋酸钠溶液瓶(12)。
专利摘要本实用新型公开了一种对新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2，盒体1内设置有PCR管3、EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6、EGFR21引物瓶7、装酶混合物的试剂瓶8、加样器吸头9、电泳分离检测试剂瓶10。本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、包含了实验所需的大部分试剂使得检测过程不易受污染；本试剂盒在检测新鲜及冷冻组织样本的EGFR基因突变时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。
文档编号C12Q1/68GK202519267SQ201220164678
公开日2012年11月7日 申请日期2012年4月17日 优先权日2012年4月17日
发明者井昶雯, 冯继锋, 吴建中, 曹海霞, 马蓉 申请人:井昶雯, 冯继锋, 吴建中, 曹海霞, 马蓉