专利名称：：一种微卫星不稳定性检测试剂盒的制作方法
技术领域：
：本实用新型涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种微卫星不稳定性检测试剂盒。
背景技术：
：微卫星(microsatellites)是遍布于人类基因组中同一脱氧寡核苷酸重复串联而成的片段，重复顺序为I6bp，重复次数不超过60次，片段长度通常小于350bp，在人群中表现出高度的个体特异性，并且稳定遗传。人类基因组中包含数万个微卫星位点，由于它们一般处于可积累中性突变的非编码DNA区域，在人群中呈现高度多态性。微卫星多态性是微卫星不稳定性(microsatelliteinstability,MSI)的表现。微卫星不稳定性表现于同一微卫星位点在不同个体之间以及同一个体的正常组织与某些异常组织之间，微卫星位点的重复单位的数目不同。。微卫星不稳定性的产生原因可能是DNA复制过程中的“链滑”现象。DNA复制过程中，当复制复合物复制一个重复单位(repeatunit)后,子链与模板链分离，然后与下一个或下几个重复单位重新结合，使一个或几个重复单位形成”环凸”。正常情况下该结构可被错配修复系统(mismatchrepairsystem)所校正,但校正系统失常时，子链DNA如继续延伸即可引起突变。公认研究指标(1997年美国国立癌症学会工作组提供)显示，直接对BAT-25、BAT-26、D5S346、D2S123及D17S250共5个位点进行检测，若其中有2项突变则为MSI-H(HighfrequencyMSI)状态，灵敏度及特异度均会显著提高，同时MSI肿瘤多位于位于近端结肠，肿瘤体积大，分化差，粘液腺癌多见，常有淋巴细胞浸润。进一步讲，MSI-H常见于大部分的遗传性非息肉性结直肠癌(HNPCC)及少部分散发性大肠癌，两者合计约占肠癌的30%[7]ο总体来讲,与MSI-H相比,MSI-L(LowfrequencyMSI)MSS(microsatellitestable)肿瘤患者的预后较差，转移复发常见。因此，微卫星不稳定性检测对于结直肠癌预后评价及化疗反应性有重要意义。而检测MSI常用的方法有变性凝胶电泳、变性高效液相色谱分析等，但这些方法敏感性较低。而且方法不十分稳定，难以在临床广泛应用。所以探索一种检测微卫星不稳定性快速可靠的方法已经成为临床实验研究的热点问题。
实用新型内容为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种微卫星不稳定性检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2、引物试剂瓶3、酶混合物试剂瓶4、去离子水管5、PCR管6和设置在盒体I上的挡板7。所述挡板用来卡住引物试剂瓶3、酶混合物试剂瓶4、去离子水管5、PCR管6，使其固定。所述引物为特异性扩增BAT-25、BAT-26、D5S346、D2S123及D17S250这5个位点的引物。扩增BAT-25位点的上游引物是5'-TCGCCTCCAAGAATGTAAGT-3'，下游引物是5'-TCTGCATTTTAACTATGGCTC-3'，引物量为Ipmol;扩增BAT-26位点的上游引物是5'-TGACTACTTTTGACTTCAGCC-3'，下游引物是5'-AACCATTCAACATTTTTAACCC-3'，引物量为Ipmol;扩增D2S123位点的上游引物是5'-AAACAGGATGCCTGCCTTTA-3/，下游引物是5/-GGACTTTCCACCTATGGGAC-3'，引物量为Ipmol;扩增D17S250上游引物是5'-GGAAGAATCAAATAGACAAT-3'，下游引物是5'-GCTGGCCATATATATATTTAAACC-3'，引物量为IOpmol;扩增D5S346上游引物是5'-ACTCACTCTAGTGATAAATCGGG-3'，下游引物是5'-AGCAGATAAGACAGTATTACTAGTT-3'，引物量为Ipmol。所述酶混合物包括浓度为O.4mmol/L的dNTPs，3mmol/L的Mg2+，2X缓冲液(2Xbuffer)，I.25U/25μI的rTaq。本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测微卫星不稳定性时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。图I为本实用新型的整体结构示意图。具体实施方式以下结合附图和实施例对本实用新型进行进一步说明。表I为本实用新型PCR反应体系。如图I所示，本实用新型的一个实施例为一种微卫星不稳定性检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2、引物试剂瓶3、酶混合物试剂瓶4、去离子水管5、PCR管6和设置在盒体I上的挡板7。所述挡板用来卡住引物试剂瓶3、酶混合物试剂瓶4、去离子水管5、PCR管6，使其固定。所述引物为特异性扩增BAT-25、BAT-26、D5S346、D2S123及D17S250这5个位点的引物。扩增BAT-25位点的上游引物是5'-TCGCCTCCAAGAATGTAAGT-3'，下游引物是5'-TCTGCATTTTAACTATGGCTC-3'，引物量为Ipmol;扩增BAT-26位点的上游引物是5'-TGACTACTTTTGACTTCAGCC-3'，下游引物是5'-AACCATTCAACATTTTTAACCC-3'，引物量为Ipmol;扩增D2S123位点的上游引物是5'-AAACAGGATGCCTGCCTTTA-3/，下游引物是5/-GGACTTTCCACCTATGGGAC-3'，引物量为Ipmol;扩增D17S250上游引物是5'-GGAAGAATCAAATAGACAAT-3'，下游引物是5'-GCTGGCCATATATATATTTAAACC-3'，引物量为IOpmol;扩增D5S346上游引物是5'-ACTCACTCTAGTGATAAATCGGG-3'，下游引物是5'-AGCAGATAAGACAGTATTACTAGTT-3'，引物量为Ipmol。所述酶混合物包括浓度为O.4mmol/L的dNTPs,3mmol/L的Mg2+,2xbuffer,I.25U/25μI的rTaqο操作方法I)取模板DNA取病人全血Iml和病灶石蜡切片，常规提取DNA，取IulDNA作为模板。2)反应体系将各反应物质按照如下表I中反应体系进行配比表I[0022]权利要求1.一种微卫星不稳定性检测试剂盒，其特征在于，包括盒体(I)、盒盖(2)、引物试剂瓶(3)、酶混合物试剂瓶(4)、去离子水管(5)、PCR管(6)和设置在盒体(I)上的挡板(7)。专利摘要本实用新型公开一种微卫星不稳定性检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、引物试剂瓶3、酶混合物试剂瓶4、去离子水管5、PCR管6、挡板7。本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测微卫星不稳定性时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。文档编号C12M1/34GK202519251SQ20122016470公开日2012年11月7日申请日期2012年4月17日优先权日2012年4月17日发明者井昶雯,吴建中,唐金海,曹海霞,王卓申请人:井昶雯,吴建中,唐金海,曹海霞,王卓