专利名称：一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测试剂盒。
背景技术：
伊立替康是DNA拓扑异构酶I抑制剂，可诱导单链DNA损伤，引起DNA双链的断裂，造成细胞死亡。伊立替康主要用于治疗成人晚期/转移性大肠癌患者的治疗，对小细胞和非小细胞肺癌、宫颈癌和卵巢癌亦有疗效。伊立替康最主要的毒副作用为嗜中性粒细胞减少症及迟发性腹泻，后者为剂量限制性毒副反应，严重时可致命。临床研究表明，40%以上接受伊立替康治疗的患者可出现3 4级迟发性腹泻，约10%患者可出现嗜中性粒细胞减 少，从而导致化疗方案中止。伊立替康为前体药物，在体内经过羧酸酯酶转化为活性代谢物SN-38，SN-38经肝脏尿苷二憐酸葡萄糖醒酸转移酶(UDPglucuronosyltransferade lfamily, polypeptideALUGT1A1)灭活，从而保护健康细胞免受伊立替康毒性的影响。与野生型UGTlAl (6/6)相t匕，突变型杂合子UGTlAl (6/7)灭活SN-38的能力稍低，而突变纯合子UGTlAl (7/7)灭活SN-38的能力则仅是野生型的35%，因此更容易产生毒副作用。野生型在接受伊立替康治疗时产生毒副作用风险较低，而杂合子产生毒副作用的几率为12.5%，突变型纯合子则有50%产生毒副作用的可能性。目前临床检测UGTlAl基因多态性的检测试剂原料需多方配备，实验过程分步进行，耗时较长，容易污染，准确性不高，所以探索一种检测UGTlAl基因多态性及测序快速可靠的方法已经成为临床实验研究的热点问题。
实用新型内容为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2、固定座3、引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6、固定座3上设置有PCR管7、加样器吸头8。进一步地，一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测试剂盒，所述固定座3还设置有孔9和隔板10。孔9设置用来分别将PCR管7、加样器吸头8固定，以防止遗撒。孔9的形状依据不同PCR管7、加样器吸头8的形状和大小而设置。隔板10用来将引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6隔开并固定。所述引物的上游引物序列为5' -GATTTGAGTATGAAATTCCAGCCAG-3'，下游引物序列为 5' -CCAGTGGCTGCCATCCACT-3';引物浓度为 5umol/L。所述酶混合物包括浓度为O. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,I. 25U/25 μ I 的 HsTaq0本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测时具有准确性高、耗时短等优点。
图I为本实用新型的整体结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型进行进一步说明。如图I所示，本实用新型的一个实施例为一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测试剂盒，包括盒体I、盒盖2、固定座3、引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6、固定座3上设置有PCR管7、加样器吸头8。固定座3还设置有孔9和隔板10。孔9设置用来分别将PCR管7、加样器吸头8固定，以防止遗撒。孔9的形状依据不同PCR 管7、加样器吸头8的形状和大小而设置。隔板10用来将引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去尚子水试剂瓶6隔开并固定。所述引物的上游引物序列为V -GATTTGAGTATGAAATTCCAGCCAG-3 '，下游引物序列为Y -CCAGTGGCTGCCATCCACT-3';引物浓度为5umol/L。所述酶混合物包括浓度为O. 4mmol/L 的 dNTPs，4mmol/L 的 Mg2+，2xBuffer, I. 25U/25 μ I 的 HsTaq。操作方法I)取模板 DNA取病人全血lml，常规提取DNA，取Iul DNA作为模板。2)反应体系将各反应物质按照如下反应体系进行配比
模板DNAI ul上下游引物各I ul
酶混合物12.5 Ul
去离子水 10. 5 ul 总体积25 ul3)反应将反应体系中各物质在中混合，按照如下程序反应95°C 5min, I 个循环，950C 30sec —62°C 40sec — 72°C 40sec，35 个循环，72 °C 7min，l 个循环。4°C 保温。2%琼脂糖电泳，EB染色分析，目的带为330bp。4) PCR产物纯化使用PCR产物纯化试剂盒进行PCR产物纯化。5) PCR产物测序反应[0032]使用ABI公司试剂进行测序反应。6)测序产物纯化每管加入2ul 3M的NaAC至PCR管底；每管加入50ul 100%酒精，震荡混匀，室温避光放置15min ；12，OOOXg 4°C离心30min，用移液枪吸尽上清；每管加入70ul 70%酒精，12，OOOXg 4°C离心15min，用移液枪吸尽上清；室温挥发净酒精，加入10 μ L Hi-DiFormamide溶解DNA ；溶解后的样品需要在95°C变性4min，迅速置冰中冷却4min后，上样电泳。7)结果判断使用ABI3500自带软件进行分析。综上所述，本实用新型所述的实施方式仅提供一种最佳的实施方式，本实用新型的技术内容及技术特点已揭示如上，然而熟悉本项技术的人士仍可能基于本实用新型所揭示的内容而作各种不背离本发明创作精神的替换及修饰；因此，本实用新型的保护范围不限于实施例所揭示的技术内容，故凡依本实用新型的形状、构造及原理所做的等效变化，均涵盖在本实用新型的保护范围内。
权利要求1.一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测试剂盒，其特征在于，包括盒体(I)、盒盖(2)、固定座(3)、引物试剂瓶(4)、酶混合物试剂瓶(5)、去离子水试剂瓶(6)、固定座(3)上设置有PCR管(7)、加样器吸头(8)。
2.根据权利要求I所述的一种核苷酸切除修复交叉互补组I基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述固定座(3)还设置有孔(9)和隔板(10)。
专利摘要本实用新型公开一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、固定座3、引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6、固定座3上设置有PCR管9、测序管10、加样器吸头11、孔12、挡板13。本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性检测时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。
文档编号C12Q1/68GK202519265SQ2012201646
公开日2012年11月7日 申请日期2012年4月17日 优先权日2012年4月17日
发明者井昶雯, 冯继锋, 吴建中, 唐金海, 路平 申请人:井昶雯, 冯继锋, 吴建中, 唐金海, 路平