用于电化学测试条的试剂的制作方法

用于电化学测试条的试剂的制作方法
【专利摘要】在电化学测试条例如用于葡萄糖检测的那些测试条中提供改善的性能的干燥试剂组合物，所述干燥试剂组合物包括活性氧化还原酶；和铁氰化物盐，所述活性氧化还原酶氧化作为特异性底物的反应物以产生失活还原形式的酶。所述铁氰化物盐由铁氰根和带正电的抗衡离子组成，并且选择带正电的抗衡离子，从而使得所述铁氰化物盐在水中可溶，并且使得所述铁氰化物盐或所述铁氰化物盐的晶相具有在水中的溶解性，和/或在100mM的浓度下低于铁氰化钾的E0eff。例如，所述铁氰化物盐可以是铁氰化四甲基铵。
【专利说明】用于电化学测试条的试剂
[0001]发明背景
本申请涉及用于电化学测试条的试剂，例如在血糖检测中常用类型的试剂，并且涉及 利用此类试剂的组合物、测试条和有关方法。
[0002]从商业价值和学术兴趣两者考虑，大部分生物传感器涉及利用氧化还原酶对于特 异性目的分子（或“分析物”）的特异性。这些生物传感器中的氧化还原酶用于催化电子脱 离特异性目的分子且转移到更容易通过一些转导机制检测的化学品上，或反之亦然。转导 机制包括通过电化学、电或光学方式测量浓度。更容易通过这些转导机制检测的化学品被 称为“介体”，因为其在生物学酶和生物传感器中的传感机制之间的中介作用。
[0003]氧化还原酶的一个亚类是氧化酶，其使用样品中已经存在的氧作为介体，通常形 成过氧化氢作为已接受来自酶的电子的部分。基于对形成的过氧化氢的检测的生物传感器 构成了早一代的装置，但这些装置由于检测过氧化物的困难而在商业上受到障碍，所述过 氧化物仅在催化电极（例如钼）上可电化学检测。
[0004]开发了克服这种困难的几种方法。与本发明有一些关联的是Lau等人（US 7，135，100和US 7, 608, 180)的公开内容，其中使用不同的铁氰化物盐以促进电子脱离过 氧化氢（当氧充当介体以再生酶时形成）并且转移到电极内。因此，这种系统中的铁氰化 物不充当就酶而言的介体，而是在远离酶的一个步骤起作用。Lau的盐就其在有机溶剂和聚 合物中的溶解度和在水中的低溶解度进行选择，这是旨在处理关于过氧化物介导的生物传 感器的另一个困难的标准。这就是，目的分析物通常在存在过氧化氢酶的生物样品中，所述 过氧化氢酶分解过氧化物而不释放电子。必须开发在生物传感器中的（例如使用膜的）方 法，以保持过氧化物酶远离生成的过氧化物，并且开发膜可溶性铁氰化物，从而使得信号可 以到达电极且被检测。
[0005]针对这些基于过氧化物的生物传感器的问题的另一个响应是开发用于基于氧化 酶的生物传感器的试剂系统，其可以无需氧介导而操作。此类系统通常使用铁氰化钾作为 直接介体以使酶恢复至活性状态。除钾盐外的铁氰化物盐已与之前的氧化还原酶组合提及 并且包括：‘铁氰化钠’(如 US 7，816，145、US 7，749，766、US 7，582，123、US 7，169，273、 US 6，258，254中）或‘碱金属铁氰化物（例如铁氰化钾或钠)，US 6，187，751。在三个其 他实例中，铁氰化物盐无差别地列出：‘金属离子包括例如碱金属离子例如锂、钠和钾离子； 碱土金属离子例如镁和钙离子；以及铝和锌离子’ (Kadota等人US 5，858，695)或靶向有机 溶剂中的溶解度（上文提及的Lau等人US 7，135，100和US 7，608，180)。
[0006]铁氰化钾是用于多种氧化还原酶的良好介体。即使对于氧化酶例如葡萄糖氧化 酶，以高浓度riOO mM或更大）的铁氰化钾也是足够快速的介体，使得它通常可以超出样 品中浓度较少的氧，所述氧随后仅成为干扰物。铁氰化钾在水中的溶解度给予含有它的生 物传感器制剂另一个优点；当铁氰化物以大量存在时（例如Walling等人在US 5，508，171 中限定了铁氰化钾在其传感器中的‘约0.15摩尔（M)到约0.7 M’的有用范围），它可以支 持在对电极处的足够逆反应以平衡在工作电极处的反应。逆反应提供足够的电流并且锚 定化学电位，从而使得不需要参考电极，对电极也不必大于工作电极。这意味着传感器可以简化为具有相同大小和材料的电极的双电极传感器。使用这类试剂的其他工作见于WO97/00441、US 5，708，247 和 US 6，258，229 中。
[0007]然而，并且可能由于其广泛使用，关于铁氰化钾的问题已被广泛认识到。这些包括对氧的敏感性，因为即使铁氰化物可以作为介体而超出氧，但产生的亚铁氰化物仍对通过氧的氧化是敏感的。铁氰化物的另一个问题是如果铁氰化钾维持与酶密切接触，一些铁氰化物即使在干燥试剂中经过延长时期也有转化成亚铁氰化物的趋势。已公开了多种制备制剂的方法，以改善这个问题=Nankai等人(US 5，120，420)将其酶和铁氰化钾存放在通过‘亲水高分子物质层’而分开的层中，以使得它们分离且确保‘极佳的保存性质’，而Walling等人(US 5，508，171)使用微晶纤维素以分散铁氰化钾。
[0008]随着更快速的测试时间和改善准确度的重要性的增加，铁氰化钾(需要较高浓度)的缓慢介导速率及其在干燥试剂中产生亚铁氰化物的趋势造成铁氰根离子作为生物传感器试剂中的组分逐渐失宠。为此，已开发了不需要如此高的浓度以超出氧的介体，例如US 5, 378, 628,US 5, 393, 903,US 5, 437, 999,US 5, 410,059,US 5, 589, 326,US 5, 846, 702的金属联吡啶(“bpy”)络合物，US 6,605, 20UUS 6, 676, 816,US 7，074，308的金属吡啶基-咪唑络合物，和US 7，090，756的双配位的咪唑络合物。然而，这些类型的络合物不一定具有高溶解度以支持必需的逆反应，并且因此测试条的结构必须更复杂，并引入参考电极或Ag/AgCl对电极/参考电极。高溶解度Os络合物的类型已在US5，589，326中描述，但锇络合物的成本使得对于一次性测试条，这种方法明显比铁氰化钾更昂贵。
[0009]可以通过添加第二种介体，包括上文描述的那些，补充铁氰化钾的活性；这一般导致加重两种介体的最差特征的问题，特别是:(a)所需氧化电位必须适合最高介体氧化电位，(b)由于氧的信号丧失将受两种介体在这方面最`差的一种支配，和(C)信号大小将仅是最佳表现介体的那种。此外，向含有铁氰化钾的制剂的添加第二种介体加重了干燥试剂中亚铁氰化物的产生。必须开发关于这些问题的方法，并且这些包括Guo等人的，在夹心中的两个电极上的试剂组分的物理分离方法(US 6，033，866)。
[0010]关于该问题的部分解决方案由Harding等人，US 2007/0295616-A1提出，所述专利通过引用并入本文，其中精心选择的电极电位允许两个电子转移种类协同而不是平行作用。在这个系统中，介体再生酶，并且穿梭化合物充当用于向电极转移及转出电子的主要或甚至唯一的电活性种类。公开于该申请中的介体和穿梭化合物的具体组合包括作为介体的[Os (MeBpy) 2 (Im) 2]2+/3+或[Os (Mebpy) 2Pic]+/2+和作为穿梭物的铁/亚铁氰化物。通过引用并入本文的美国专利号5，508，171也公开了其中采用两种介体的一些系统。
[0011]发明概沭
通过使用精心选择的铁氰化物盐，本申请提供了与铁氰化钾介体相关的许多问题，特别包括含有该试剂的测试条的贮存稳定性的解决方案。因此，在第一个方面，本申请涉及干燥试剂组合物，其包含:
(a)活性氧化还原酶，其氧化/还原作为特异性底物的分析物，以产生失活形式的酶；
和
(b)铁氰化物盐，其中所述铁氰化物盐由铁氰根和带正电的抗衡离子组成，所述带正电的抗衡离子经过选择，从而使得铁氰化物盐在水中可溶至分析物在样品中的最大分析浓度的至少两倍但小于铁氰化钾的溶解度，和/或从而使得铁氰化物盐在100 mM的浓度下具有小于100 mM铁氰化钾的更低的Etleff。
[0012]Etlrff可以就铁氰化物盐整体，或仅对于其晶相进行测量。示例性铁氰化物盐是铁氰化铷和铁氰化四甲基铵。
[0013]‘最大分析浓度’是对于给定传感器设计的动态范围的上端。在血糖的情况下，这个值通常为600 mg/dL。
[0014]干燥试剂也可以含有另外的一种或多种电子转移介体、缓冲剂和湿润剂。在优选实施方案中，与此类另外试剂相关的阳离子至少大部分与铁氰化物盐的带正电的抗衡离子相同，且优选全部相同。
[0015]本发明还涉及包含金属电极和本发明的干燥试剂组合物的电化学测试条。本发明的这种干燥试剂实质上且令人惊讶地增加电化学测试条在样品应用前的贮存期限，而不损害获得的测试结果的质量。依照本发明的这个方面，用于检测样品中的可氧化分析物(例如葡萄糖)的电化学测试条包含:
(a)第一和第二非反应电极；
(b)用于接受液体样品的样品池， 其中放置在所述样品池内的液体样品与第一和第二电极接触；和
(C)依照本发明的干燥试剂。
[0016]干燥试剂的放置使得在液体样品应用于测试条后，干燥试剂溶解于样品池内的样品中。
[0017]本发明还提供了包含在水性液体载体中的本发明试剂的液体组合物。当液体样品例如血液引入测试条的样品室内时，或当液体载体在应用于测试条前与试剂混合时，获得此类液体组合物。在制造过程中，此类组合物还可以用于在用于贮存和分配的后续干燥前，将试剂组合物递送至测试装置。
[0018]本发明还提供了通过将样品应用于本发明的测试条而检测液体样品中的分析物的方法，其中干燥试剂中的酶选择为对于分析物是特异性的；并且随后将外部信号应用于测试条以生成指示样品中的分析物的量的信号。在具体实施方案中，外部信号是在第一和第二电极之间施加的电位，并且指示分析物的量的信号是电流。
[0019]本发明还提供了配制用于在分析物的电化学检测中使用的贮存稳定试剂的方法。该方法包括步骤:
(a)选择氧化还原酶，其氧化/还原作为特异性底物的分析物；
(b)选择铁氰化物盐，其中所述铁氰化物盐由铁氰根和所选带正电的抗衡离子组成，所述带正电的抗衡离子经选择，从而使得铁氰化物盐在水中可溶，并且铁氰化物盐或铁氰化物盐的晶相所具有的在水中的溶解度是分析物在样品中的最大分析浓度至少两倍，但小于铁氰化钾的溶解度，和/或从而使得铁氰化物盐在100 mM的浓度下具有小于100 mM铁氰化钾的更低的Etleff ;和
(c)组合所选酶和所选铁氰化物盐，以形成用于在分析物的检测中使用的贮存稳定的电化学测试试剂。
[0020]附图简沭
图1显示当将足够的电位施加于电极时，依照本发明的第一个实施方案在含有干燥试剂的测试条中发生的一组反应。[0021]图2A、2B和2C显示当将足够的电位施加于电极时，依照本发明的第二个实施方案在含有干燥试剂的测试条中时可发生的可选反应组。
[0022]图3显示依照本发明的测试条。
[0023]图4显示对于使用含有葡萄糖氧化酶、铁氰化钾和0S(dmbpy)2 PicCl的干燥试剂制备的测试条，作为葡萄糖浓度的函数的电流。老化条件是将测试条保持在50°C下的干燥器小瓶中；老化时间如图中所示。
[0024]图5显示对于使用含有葡萄糖氧化酶、TMA铁和Os (dmbpy) 2 PicCl的干燥试剂制备的测试条，作为葡萄糖浓度的函数的测量电流。老化如图4所述。
[0025]图6显示对于不同铁氰化物盐，作为老化时间的函数的基线电流(在测试液体中无葡萄糖)的变化。老化如图4所述。
[0026]图7显示来自在干燥器小瓶中在50°C下保持的测试条的基线电流与在那些测试条的试剂中的铁氰化物盐的饱和溶解度之间的关联。
[0027]图8显示对于在干燥器小瓶中在50°C下保持的测试条，基线电流随着老化时间的发展。试剂如实施例15中所述。
[0028]图9显示通过ORP电极测量的化学电位与铁相对于亚铁的浓度比的对数的曲线。
[0029]图10显示作为铁氰化物浓度的函数的铁氰化钾在420 nm的吸光度强度。
[0030]图11显示均以800:1稀释的多种饱和铁氰化物溶液的UV/Vis光谱的实例。
[0031]图12显示多个缓冲液类型对含TMA铁的干燥试剂中的酶稳定性的作用。
[0032]图13显示多个缓冲液类型对基线电流的作用。
[0033]图14证实稳定测定所需的活性酶的最小量。
[0034]图15证实在加速老化过程中在含有本发明试剂的测试条中的酶活性的稳定性。
[0035]图16和17显示在用超过优选阈值的酶量制备的测试条中的斜率和基线的稳定性和一致性。
[0036]发明详沭
本申请涉及用于在分析物检测中使用的试剂组合物和包括该组合物的电化学测试条。
[0037]定义
如本申请的说明书和权利要求中使用的，可应用下述术语定义:
一般而言，术语“分教数”指样品中待测定其存在或其量的目的物质。在本申请的情况下，术语分析物具体指这样的化合物:其(a)在小于I V的电位差下，在水溶液中的金属电极或其他非反应电极处不可直接氧化或还原；和(b)在水溶液中通过氧化还原酶可直接氧化或还原。已公开了用于通过“生物传感器”检测的符合这些特征的多种分析物，包括但不限于葡萄糖、胆固醇和表1中列出的那些其他分析物。虽然本申请中的实例是指其为优选分析物的葡萄糖，但可以替换成其他分析物和相应酶，而不脱离本发明的范围，并且其中采用葡萄糖的任何实 例或结构完全可应用于其他分析物，伴随酶和电活性种类中的合适变化。
[0038]太语“活性氧化还原酶”指处于氧化还原态的酶，所述氧化还原态允许它氧化或还原作为特异性底物的所选分析物。这种氧化或还原产生失活形式的酶，所述酶不再能够执行这种功能。在依照本发明的任何给定试剂中，酶都经过选择而将所需分析物作为特异性底物。分析物/酶对的实例在表1中列出，所述表1部分基于美国专利号4，225，410的表I，所述专利通过引用并入本文。
[0039]术语“馇子奪瘦分鎅”指具有从通过与分析物反应形成的失活酶再生活性氧化还原酶的能力的化学化合物。电子转移介体必须在应用于测试条的样品(通常为水介质例如血液、尿或唾液)中具有足够的电化学电位，从而氧化或还原失活形式的酶以再生活性形式。因此，目标分析物控制酶的选择，并且酶控制试剂中电子转移介体的选择。
[0040]术语“测试条”指包括电极和适合于电化学检测至少一种分析物的试剂，和用于将测试条连接至测量计的连接器的部件集合。测试条可以具有用于多重分析物或用于相同分析物的多重测定的多个电极组和试剂。在具体实施方案中，测试条是单次使用的一次性元件。 [0041]术语“游量妖”指与测试条结合的电子装置，以在样品应用于与测量计结合的测试条时，提供用于测定样品中的一种或多种分析物的整合测试单元。一般而言，测量计将电位施加于测试条以刺激电化学反应，并且检测且分析所得到的信号。然而，测量计可以仅执行这些功能的部分，例如电位施加和信号检测，其中分析在分开部件中执行。
[0042]术语“7M铁”、“TMA亚铁”和“TMA耦”分别指铁氰化四甲基铵、亚铁氰化四甲基铵、以及在共同溶液中作为氧化还原耦的TMA铁和TMA亚铁的组合。
[0043]术语“足够电位”指足够大以导致在电极处的铁氰化物耦(例如TMA耦)的氧化和还原的电极间电位差。电压可以施加于一个或两个电极，以产生在电极之间的电位差。
[0044]术语“溶解度”指可以溶解于水中的化合物量。它可以以多种方式表达(例如以实际单位定义或表示为％值的化合物质量/水质量、化合物质量/水体积)，但用于本公开内容中的比较，至少对于铁氰化物盐的比较，最有价值的单位是化合物摩尔数/升(摩尔，M)，因为这允许直接比较铁氰化物含量。适当地，比较铁氰化物盐在常规温度的溶解度，所述常规温度，例如25°C，与测试条的贮存和使用相关。
[0045]当应用于在本发明中使用的铁氰化物盐时，术语“在水中可溶”指示足以在水性样品(例如血液中)达到适合于执行电化学测定的浓度的溶解程度。对于大多数目的，这意指足以达到至少80 mM的浓度的溶解度，尽管操作测试条装置中的实际浓度无需这么高。溶解度的下限由氧化介体浓度设定，所述氧化介体浓度是在负极处确保电流受限于正极处的还原种类浓度所必须的；这种限制取决于通过最大浓度的分析物生成的还原种类量。对于葡萄糖，葡萄糖氧化还原酶一般仅催化β-D-葡萄糖的氧化，所述β-D-葡萄糖占总葡萄糖的64%，并且生成2摩尔亚铁氰化物/摩尔葡萄糖，因此对于600 mg/dL (即33.3毫摩尔(mM))的最大分析血糖浓度,将生成42.7 mM亚铁氰化物。在试剂中希望至少两倍这个浓度的铁氰化物(即85.4 mM)，以在形成亚铁氰化物后具有剩下的过量，从而使得在正极处的亚铁氰化物的氧化保持电流限制。对于铁氰化钾，这将对应于至少28.1 g/L的溶解度，并且对于具有比钾更高的重量的阳离子，该溶解度甚至更大。相比之下，US 7，135，100指示具有低水溶性的化合物具有20 g/L的最大溶解度。
[0046]术语“E°eff”指在目的浓度和在目的离子的存在下，对于给定电活性种类的电极电位。铁氰化物的电极电位是由下述化学半反应代表的平衡状态的表示:
(Fe(CN)6)3- + e_ — (Fe(CN)6)4-
铁氰化物+电子一亚铁氰化物
电化学家认识到标准电极电位E°可以用于方程如能斯特方程中，以测定在任何特定化学电位E时两个化学种类的比例:
E = E0 +(RT/nF)ln{[铁]/[亚铁]}
其中R为气体常数，T为绝对温度(以开尔文绝对温度表示)，η为在半反应中转移的电子数目(其对于铁氰化物为1)，F为法拉第常数，[铁]为铁氰根离子(Fe (CN)6) 3_的浓度，并且[亚铁]为亚铁氰根离子(Fe(CN)6)4_的浓度。这个方程设定下述预期:化学电位E不依赖于系统中的阳离子性质，并且标准电极电位Ε°可以由其中[铁]=[亚铁]的溶液的化学电位测定。还预期相反情况:Ε°可以用于由电极电位测量预测其他浓度比例，或相反地由[铁]/[亚铁]的比例预测电极电位。然而，电化学家还认识到随着浓度的增加，浓度值的直接使用导致误差，并且这些应由热力活性取代。
[0047]除了理想的能斯特方程外，通过Hanania等人(J.Phys Chem 1967,71,第2022-2030页)的研究已探究了铁氰根和亚铁氰根离子与溶液中的阳离子形成络合物或离子对的想法。这个工作已设定相对于标准氢电极Ε° = 356 mV的常用数据手册值，这是在无限稀释时的极限，并且还已详细探究了在更高浓度的钾离子、铁氰化物和亚铁氰化物之间存在的平衡。此外，还简要探究了其他盐(碱金属和四烷基铵盐)对电极电位的影响。Hanania等人报告尽管四烷基铁氰化铵盐得到更低的电极电位，但添加“天然盐如KBr和NaCl……得到还原电位中的立即显著上升”。因此，E°的任何测定将不仅取决于浓度还取决于可能存在的具体络合物。术语Etlrff是可应用于在还原和氧化种类的特定总浓度时的特定盐的E°形式。
[0048]在本发明的干燥试剂中，当试剂中存在包括阳离子抗衡离子的另外的盐时，优选这种阳离子抗衡离子至少大部分与采用的铁氰化物盐中的带正电的抗衡离子相同。术语“大部分相同”意指在作为整体的干燥试剂中，小于25%的带正电的抗衡离子不同于铁氰化物的抗衡离子。应当理解如果采用的另外材料的量在摩尔基础上相对于的铁氰化物盐量很小，则另外的材料的基本上所有的抗衡离子不同于铁氰化物盐的抗衡离子，并且应当理解保持抗衡离子的增加与另外材料的相对`量增加相同的重要性。在具体实施方案中，小于10%且更优选小于5%的带正电的抗衡离子不同于铁氰化物的抗衡离子。
[0049]在一些实施方案中，与另外材料相关的“基本上所有”的阳离子抗衡离子与采用的铁氰化物盐中的带正电的抗衡离子相同。如这个背景下使用的，术语“基本上所有”不要求不存在其他可检测的抗衡离子，而是将任何此类抗衡离子视为加入的另外材料中的杂质。在具体实施方案中，另外材料的纯度是对于包括与铁氰化物盐中的带正电的抗衡离子相同的抗衡离子的化合物，具有至少98%纯度的盐。
[0050]术语“贮存稳定的试剂”指干燥试剂，其在与金电极接触时，具有的贮存期限大于在相同条件下其中铁氰化钾用作铁氰化物组分的在其他方面相同的组合物的贮存期限。贮存期限可以使用加速老化技术进行评估，且基于与在任何测量系统中用含葡萄糖液体(例如参考标准)实现的结果比较而进行测量，或基于在氧化和还原介体在电极间穿梭的系统中的本底电流(在样品室内没有葡萄糖输入测量的)的变化而进行测量。
[0051]术语“抗衡离子”指离子化合物中平衡用于实施。因此，在TMA铁中，铁氰根离子提供电子转移功能，并且TMA是阳离子抗衡离子。
[0052]术语“基线信号”指在使用所述试剂测试不含分析物的样品时发生的信号。在用含有铁氰化钠或钾的试剂制备的生物传感器中，当基线信号对于贮存的干燥试剂增加时，这显示已生成或正在生成亚铁氰化物(因为所检测的正是该分子)。导致基线增加的最终电子来源无需是确定的，但它通常与试剂中氧化还原酶的存在相关。
[0053]术语“非反应电极”指不有意参与用于在分析条件下检测分析物的电化学反应的电极。非反应电极的实例包括金属电极(金、钼、钯等)和碳电极，其接受或释放电子，而不改变电极的化学性质。这与反应电极例如Ag/AgCl形成对比，在所述反应电极中发生银/银离子的反应，以支持可测量信号的生成。
[0054]干燥试剂组合物
依照第一个方面，本发明提供了包含下述的干燥试剂组合物:
(a)活性氧化还原酶，其氧化/还原作为特异性底物的反应物，以产生失活形式的酶；
和
(b)铁氰化物盐，其中所述铁氰化物盐由铁氰根和带正电的抗衡离子组成，所述带正电的抗衡离子经过选择，从而使得铁氰化物盐在水中可溶，具有的在水中的溶解度是分析物在样品中的最大分析浓度至少两倍，但小于铁氰化钾的溶解度，和/或从而使得铁氰化物盐在100 mM的浓度下具有小于100 mM铁氰化钾的更低的E°eff。
[0055]如下文进一步讨论的，通过由钾变为其他抗衡离子可以增强试剂稳定性和贮存期限的机制并不显而易见。最初由本发明人考虑的一种可能性是具有更低Etlrff导致铁氰化物至亚铁氰化物的转换更少，并且因此减少基线随贮存时间的增加。然而，当考虑到铷盐的E0eff时，变得显而易见的是这种解释与实验结果不一致。最终，本发明人发现盐在水中的溶解度和观察到的效应之间存在关联。事后看来，这可以基于如下所述的结晶热力学加以解释。然而，不能排除单独或与溶解度因素组合的足够低的Etleff未实现相同效应，并且本发明因此无需限制于仅一种机制理解。
[0056]图1显示在含有此类试剂组合物的测试条中发生的一组反应，其中葡萄糖作为示例性分析物，葡萄糖氧化酶作为示例性酶并且TMA铁作为示例性铁氰化物盐。葡萄糖与氧化的酶葡萄糖氧化酶(G0X(fUMn)反应，以产生葡萄糖酸和还原型酶(G0X(ii_))。GOXiimm与TMA铁反应，以再生G0X(fUMn和TMA亚铁。这些反应可以在没有在电极10，11施加的电位时发生。当足够电位V施加于电极10，11时，电子可以从电极11转移12到邻近电极11的TMA铁，以形成TMA亚铁，而电子由邻近电极10的TMA亚铁分子转移13，以产生TMA铁。这种电子转移反应产生可测量的电流。电流也通过在TMA亚铁从电极11扩散14到电极12后的相同转移13生成，其中任一可以用于提供葡萄糖浓度的指示。用于分析这些电流的众多方法是本领域已知的(例如来自美国专利号7，501，052，6，284，125 ;5，942，102 ；5，352，351 ;和5，243,516，以及美国
【发明者】伊恩·哈丁, 玛丽·Y·利, 桑迪·坦 申请人:埃葛梅崔克斯股份有限公司