偶氮介体的制作方法
【专利摘要】本申请涉及偶氮化合物和它们作为诊断方法中的介体的用途。本申请还涉及包含这类偶氮化合物的检测试剂、试剂盒和测试元件。
【专利说明】偶氮介体
[0001]说明书
本申请涉及偶氮化合物和它们作为诊断方法中的介体的用途。本申请还涉及包含这类偶氮化合物的检测试剂、试剂盒和测试元件。
[0002]诊断元件是用于测定被分析物的临床相关方法的重要部件。在这方面的主要焦点特别是使用酶基系统测定的被分析物的快速和精确测量。在这种方法中，使要测定的被分析物与通常以催化量使用的合适的酶、辅酶和任选介体接触，其中辅酶被物理化学改变，例如氧化或还原并可随后借助合适的技术检测。
[0003]如果另外使用介体，其将通常在被分析物的酶法转化过程中由物理化学改变的辅酶释放的氧化还原等效物转移到光学指示剂或电极的导电部件上以例如光度学或电化学检测该过程。测量值的校准随后得出与测定的被分析物的浓度的直接关系。
[0004]在测试元件中用于测定被分析物的介体是现有技术中已知的并且其中包括亚铁氰化钾、二茂铁衍生物、醌类、噁嗪类、吩嗪类和噻嗪类。例如在Takaminami (MaterialsIntegration (2008), 21, 317-323)和 Heller 等人(Chemical Reviews (2008), 108,2482-2505)中可以找到确保氧化还原等效物直接转移到合适的检测系统上并尤其可用于血糖的电化学检测的介体的综述。
[0005]介体的另一已知种类包含如US 5，206, 147和US 5，286，362中公开的亚硝基苯胺类。与能够直接转移氧化 还原等效物的上述介体相比，亚硝基苯胺类的特征在于首先制备实际介体的前体化合物，其在后继步骤中还原成具有避免空白反应的优点的有效介体。
[0006]但是，使用亚硝基苯胺类时的问题在于，它们通常具有形成氧化偶氮二聚体的倾向并对含氨基和巯基的物质具有高反应性(J.A.Hinson !Advances in ExperimentalMedicine and Biology (1986)，197，691-696)，这会最终导致不想要的副反应并且不利地影响被分析物测定的特异性和灵敏性。
[0007]因此，本发明的目的是提供用于定性或/和定量测定被分析物的介体，其中至少部分消除现有技术的缺点。特别地，应该设计所述介体以避免发生空白反应(例如介体被抗坏血酸还原)并同时在最低程度上形成副产物(例如介体的二聚体)或介体与含氨基或/和巯基的物质的不受控反应的产物。此外，该介体应该比亚硝基苯胺类更耐水解，同时具有可接受的反应速率。
[0008]根据本发明借助通式(I)的偶氮化合物实现这一目的
【权利要求】
1.通式(I)的偶氮化合物
2.根据权利要求1的偶氮化合物， 其特征在于 R1表示残基NR7R8。
3.根据权利要求1或2的偶氮化合物， 其特征在于 选自R2、R3、R4和R5的至少三个残基表示残基H。
4.根据权利要求1至3中一项的偶氮化合物， 其特征在于 R2表示选自H和0(烷基)的残基，且R3、R4和R5各自表示残基H。
5.根据权利要求1 至4中一项的偶氮化合物， 其特征在于 R6表示残基C (=X) NR9R10,特别是残基C (=0) NR9N10。
6.根据权利要求1至5中一项的偶氮化合物， 其特征在于 R8 表示一个或多个选自 C00_、N (烷基)3+、NH-C (=NH2) _NH2+、0H、O- (CH2CH2) n_0H、O- (CH2CH2) n-0 (烷基)、OPO32' PO32-和 SO3-的取代基。
7.根据权利要求1至6中一项的偶氮化合物， 其特征在于 R7或/和R8表不残基轻乙基。
8.根据权利要求1至7中一项的偶氮化合物， 其特征在于 R9或/和Rw表示选自烷基和芳基的残基，其中所述烷基或芳基可含有一个或多个选自0H、O (烷基)和O (芳基)的取代基，或 R9和Rw与它们所键合的N原子一起形成5元或6元杂环，其中所述杂环可含有选自N、O和S的另一杂原子。
9.根据权利要求1至8中一项的偶氮化合物， 其特征在于 R9或/和Rici表不选自甲基、乙基、苯基、轻甲基、轻乙基、轻苯基和甲氧基苯基的残基。
10.通式(I)的偶氮化合物作为诊断方法中的介体的用途
11.用于测定被分析物的检测试剂，其包含: (a)黄素_、烟酰胺-或吡咯喹啉醌-依赖性氧化还原酶， (b)可还原的黄素、烟酰胺或吡咯喹啉醌辅酶， (c)通式(I)的偶氮化合物
12.根据权利要求11的检测试剂， 其特征在于， 所述黄素_、烟酰胺-或吡咯喹啉醌-依赖性氧化还原酶是黄素_、烟酰胺-或吡咯喹啉醌-依赖性脱氢酶，特别是黄素_、烟酰胺-或吡咯喹啉醌-依赖性葡萄糖脱氢酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。
13.根据权利要求11或12的检测试剂， 其特征在于， 所述可还原的黄素、烟酰胺或吡咯喹啉醌辅酶是FAD、FMN、NAD+、NADP+、PQQ或其衍生物，特别是 NAD+、NADP+> CarbaNAD+ 或 carbaNADP+。
14.用于测定被分析物的试剂盒，其包含(a)根据权利要求11至13中一项的检测试剂，和 (b)测试元件，特别是设计为光学或电化学传感器的测试元件。
15.用于测定被分析物的测试元件，其包含根据权利要求11至13中一项的检测试剂。
16.根据权利要求15的测试元件， 其特征在于， 其被设计为光学或电化学传感器。
17.测定被分析物的方法，其包括以下步骤: (a)使含有被分析物的样品与根据权利要求11至13中一项的检测试剂、根据权利要求14的试剂盒或根据权利要求15或16的测试元件接触，和 (b)测定被分析物的存在或/和量。
【文档编号】C12Q1/26GK103958463SQ201280057963
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2012年9月26日 优先权日:2011年9月28日
【发明者】S.H.杜瓦尔, P.格鲍尔, D.海因德尔, C.霍恩, P.克拉奇, M.马宽特, T.迈尔 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司