专利名称：高效绿色降氟富金花散茶制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及农产品加工技术领域，具体涉及一种高效降低富金花散茶中氟含量的 散茶制备工艺，绿色降氟指无污染降低黑毛茶原料中氟含量。
背景技术：
氟是人类生命活动所必需的微量元素之一，人每日约需要摄入1. O 1. 5 mg的 氟。适量的氟可以促进人体骨骼和牙齿的钙化，增强骨骼的强度。但是长期摄入过量氟 化物会引起氟中毒，如由于氟摄入过多可引起牙齿、骨骼等组织的病理改变，也可引起肾 脏、肝脏等器官的组织病变等。
茶树是一种富集氟元素的植物，其中叶片是氟元素富集的一个重要场所，因茶 树品种、叶片老嫩程度的不同每千克茶叶中的氟含量从几十到上千毫克不等。因此，由氟 元素引起的茶的饮用安全性问题近年来逐渐引起人们的重视。目前，世界上大多数国家 均制定了人体每日氟摄入量标准。美国和德国提出的推荐标准是成人每日摄入量1. 5 4. O mg;日本标准为2.1 2 .3 mg;世界卫生组(WHO)规定，人均每天适宜的氟摄入量为2.5 4 .0 mg;我国制定的最大日摄入量标准为3. 5mg。而对于茶叶氟含量标准目前有农 业部2003年茶叶行业标准NY65922003规定的每千克茶叶中氟化物含量应低于200mg以 及GB1996522005中对砖茶含氟量规定的每千克中氟化物含量小于300 mg。
富金花散茶是用黑毛茶为原料制作而成，属于典型的黑茶，原料较为粗老，其中氟 的含量相当高，为了提高茶叶的产品质量和饮用安全性，确保证人民的身体健康，1997年， 时任国务院总理的朱镕基同志作了“要赶快组织低氟黑茶的生产”的批示，此后中央财政多 年拨付专项资金用于低氟黑茶的研究和开发并获得了一些重要进展。但氟含量降低问题目 前仍未很好的解决，目前，降氟措施主要有选择低氟品种、优化栽培技术、提高原料嫩度、加 工过程中化学降氟、砖茶水化学降氟等，从目前的研究进展看，培育低氟品种是一项长期性 措施，短期内尚难解决黑茶含氟量高的问题，而提高原料等级，势必加重消费者的负担，可 能导致部分消费者流失，在茶汤中添加降氟剂，虽然降氟效果显著，但其大多为化学试剂， 在除氟的同时可能造成新的污染或导致茶汤品质下降。因而亟待研制一种无污染高效绿色 降低富金花散茶中氟的具体工艺。发明内容
本发明所要解决的技术问题是解决上述现有降氟技术存在的问题，而提供一种 高效绿色降氟富金花散茶制备工艺，能在富金花散茶制作期内实现无污染绿色降氟，而且 不影响富金花散茶的汤色、茶香、茶味、耐冲泡度等各种品质。
本发明采用的技术方案是一种高效绿色降氟富金花散茶制备工艺，具体步骤如 下①黑毛茶分筛、拼配；②绿色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分离、纯化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定；⑥添加冠突散囊菌孢子悬液；⑦烘茶；⑧发花；⑨干燥和保存。
上述技术方案中，所述的黑毛茶分筛、拼配按照黑毛茶分级标准进行；所述的绿色 降氟方法为80°C的干净水浸泡4-8分钟后弃浸泡液；所述渥堆为37°C渥堆24小时控制含 水量为28% ;所述的冠突散囊菌的分离纯化方法为用添加10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培 养基平板梯度稀释分离纯化；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定方法 为挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养 基培养，28°C静置培养5天，然后升高温度至30-32°C培养14-30天，震荡分散孢子，无菌水 稀释孢子悬液浓度控制在IO7-1O8个/mL ;所述的添加冠突散囊菌孢子悬液添加量为O. 25 mL/100g ;所述的烘茶条件为密闭65-68°C、l小时；所述的发花控制湿度和温度发花条件为 前两天湿度80%、温度26°C，然后湿度70%、温度28°C直至金花生长普遍茂盛、色泽鲜艳金 黄、颗粒肥大，菌花香浓郁为止；所述的干燥和保存为富金花散茶40-50°C干燥I天后常温 室内保存。
PDA 指 Potato Dextrose Agar 的简称。
PDA琼脂固体培养基指将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧杯中，加适 量蒸馏水，煮沸I小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加入15g琼脂，加热熔化，最后加 入蔗糖20g，混匀，用量筒定容至IOOOmL,趁热分装在三角瓶中，在1.1 kg/cm2 (121°C)中保 持20分钟灭囷。
PDA液体培养基指上述培养基配制过程操作，但不添加琼脂。
PDA平板指上述培养基灭菌结束后冷却至50°C左右，在超净工作台上将培养基倒 入事先已经灭菌并干燥的培养皿中，待冷却即为制得的PDA琼脂固体培养基平板。
10%茯砖茶汁的PDA固体培养基指将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧 杯中，加适量蒸馏水，煮沸I小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加IOOmL制备好的茶 汁，然后加入15g琼脂，加热熔化，最后加入蔗糖20g混匀，用量筒定容至IOOOmL,趁热分装 在三角瓶中，在1. lkg/cm2(12rC)中保持20分钟灭菌。灭菌结束后冷却至50°C左右，在超 净工作台上将10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培养基倒入事先已经灭菌并干燥的培养皿中， 待冷却即为制得的10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培养基平板。
10%茯砖茶汁的PDA液体培养基与上述操作过程相同，但不添加琼脂。
平板梯度稀释法为将成品茯砖样本用植物微型粉碎机将样品粉碎，200目过筛、65°C干燥2小时后称取Ig 样品，定容IOmL,即配成I X 10 — i/mL的获砖样本溶液,从上述溶液中取I mL定容10 mL 配成I X 10 — 'g/mL的茯砖样本溶液，依次配制成浓度I X 10 —3、I X 10 —4、I X 10 — 5g/mL的茯 砖茶样本溶液各10 mL备用。取1X10 —3、IX 10 —4、1X10 —5g/mL的茯砖样本溶液各0.5 mL，用涂布器涂布到冠状散囊菌快速分离培养基平板上，超净台上吹干15分钟左右，倒置平皿，28°C培养，3 — 4天后挑取优势菌——金花菌，同样条件继代培养直至纯化。
画线接种指用灭菌的接种针在超净台上将已经生长好的菌落挑取，在新的固体培 养基平皿画线分离相应微生物。
金花菌落指金花菌在固体培养基平板上生长到一定时候形成的一个菌落集合体， 菌落是指聚集在一起的微生物团。
茯砖茶汁的具体制备方法按照Ig茯砖茶样本比30mL蒸馏水的比例称取20g茯 砖茶，加入600mL蒸馏水，100°C水浴2小时，待稍冷却后用量筒定容至600mL即为制备好的茯砖茶汁。
配成ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—5是指浓度，单位为g/mLo孢子悬液浓度IO7-1O8个/ ml中的“个”是指单个的金花菌的子囊孢子。计数方法为用梯度稀释法涂布在添加10%茯 砖茶汁的PDA琼脂固体培养基平板上生长计数或用722型分光光度计测量其OD值，控制在0.6左右，使金花孢子悬液浓度控制在每毫升IO7-1O8个金花孢子。
上述的金花即冠突散囊菌。
本发明提供了一种高效绿色降氟富金花散茶制备工艺，能在富金花散茶制作期内 实现无污染绿色降氟，而且不影响富金花散茶的汤色、茶香、茶味、耐冲泡度等各种品质。
图1为本发明培养7天分离纯化的冠突散囊菌落照片；图2为本发明冠突散囊菌的孢子悬液20天培养结果照片；图3为一品、极品降氟富金花散茶发花结果照片；图4为一品、极品降氟富金花散茶多次冲泡效果图；图5为绿色降氟对富金花散茶中氟含量、茶多酚、水浸出物、咖啡碱成分影响鉴定表。
具体实施方式
1.黑毛茶分筛、拼配按照传统黑毛茶分级标准对原料进行分筛、拼配以方便压制成对应的不同档次的茯砖茶。
2.绿色降氟以干净水，水温80°C维持浸泡4-8分钟(依原料嫩度而定)后浙干,弃浸泡液。一级黑毛 茶水温80°C维持浸泡4分钟，二级黑毛茶水温80°C维持浸泡5分钟，三级黑毛茶水温80°C 维持浸泡6分钟，四级黑毛茶水温80°C维持浸泡7分钟，五级黑毛茶水温80°C维持浸泡8 分钟。
3.渥堆；37°C渥堆24小时、控制含水量为28%。
4.冠突散囊菌即金花的分离、纯化冠突散囊菌即金花从益阳茶厂成品湘益牌茯砖样本中分离。具体分离和纯化过程为 将成品湘益牌茯砖样本粉碎，用平板梯度稀释法在添加10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培养 基平板上28 °C培养直至纯化。
5. 一定老化度金花的孢子悬液制备与浓度确定挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养 基培养，28°C静置培养5天，然后升高温度至30-32°C培养14-30天，震荡分散孢子，无菌水 稀释孢子悬液浓度控制在IO7-1O8个/mL。
6.添加冠突散囊菌孢子悬液黑毛茶100°C 2小时灭菌冷却后，按照每IOOg黑毛茶添加O. 25mL冠突散囊菌孢子悬液 的比例，以喷雾的形式添加，混匀。
7.烘茶烘茶条件为密闭65-68°C、l小时。
8.发花控制湿度和温度发花条件为前两天湿度80%、温度26°C，然后湿度70%、温度28°C直至 金花生长普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大，菌花香浓郁为止。
9.干燥和保存富金花散茶40-50°C干燥I天后常温室内保存。
实施例1 :金花即管突散囊菌的分离、纯化将成品湘益牌茯砖样本用植物微型粉碎机粉碎，200目过筛、65°C干燥2小时后称取 Ig 样品，定容 10mL，配成 ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—4、10_5 各 10mL，取 10' 10_4、10_5 三个梯度各0.0. 5mL涂布添加10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培养基平板，超净台上吹干，28°C培养3天， 挑取金黄色优势菌落，画线至添加10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培养基平板上，同样条件继 代培养直至纯化。
分离纯化的金花菌落见附图1。
实施例2 :冠突散囊菌孢子的孢子悬液制备挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养 基培养，28°C静置培养5天，然后升高温度至30-32°C培养14-30天，震荡分散分生孢子，用 双层无菌纱布过滤，再后280rpm振荡培养分散分生孢子，无菌水稀释孢子悬液至OD值为0.6，孢子悬液浓度控制在IO7-1O8个/ml，即为可用的冠突散囊菌孢子悬液。
冠突散囊菌孢子悬液培养结果见附图2。
实施例3 :高效绿色降氟富金花散茶发花验证分别取益阳茶厂一品茯砖原料、极品茯砖原料各lOKg，以不进行绿色降氟作为对照，按 照具体实施方式
中1-9步在湖南省黑茶品质与发酵关键技术控制产学研示范基地进行发 花实验，其降氟率最低能达到50%，生长普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大，菌花香浓郁。冲 泡结果说明汤色与对照几乎没有差别，同样泡十遍汤色不变，味道更醇和，无新茶的涩味； 检测结果表明，经过水浸降氟处理后的富金花散茶中茶多酚、水浸出物、咖啡碱成分与对照 相比，下降量十分微弱，口味于对照相比，尝不出明显改变，故而可以说对富金花散茶品质 影响甚微。
一品、极品降氟富金花散茶发花结果见附图3。
一品、极品降氟富金花散茶十次冲泡效果见图4。
绿色降氟对富金花散茶中氟含量、茶多酚、水浸出物、咖啡碱成分影响鉴定表，见 图5。
权利要求
1.一种高效绿色降氟富金花散茶制备工艺，其特征在于具体步骤如下①黑毛茶分筛、拼配；②绿色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分离、纯化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定；⑥添加冠突散囊菌孢子悬液；⑦烘茶；⑧发花；⑨干燥和保存。
2.根据权利要求1所述的高效绿色降氟富金花散茶制备工艺，其特征在于所述的黑毛茶分筛、拼配按照黑毛茶分级标准进行；所述的绿色降氟方法为80°C的干净水浸泡4-8 分钟后弃浸泡液；所述渥堆为37°C渥堆24小时控制含水量为28% ;所述的冠突散囊菌的分离纯化方法为用添加10%茯砖茶汁的PDA琼脂固体培养基平板梯度稀释分离纯化；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定方法为挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养基培养，28°C静置培养5天，然后升高温度至30-32°C培养14-30天，震荡分散孢子，无菌水稀释孢子悬液浓度控制在IO7-1O8 个/mL ;所述的添加冠突散囊菌孢子悬液添加量为O. 25 mL/100g ;所述的烘茶条件为密闭 65-680C U小时；所述的发花控制湿度和温度发花条件为前两天湿度80%、温度26°C，然后湿度70%、温度28°C直至金花生长普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大，菌花香浓郁为止；所述的干燥和保存为富金花散茶40-50°C干燥I天后常温室内保存。
全文摘要
一种高效绿色降氟富金花散茶制备工艺，具体步骤如下①黑毛茶分筛、拼配；②绿色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分离、纯化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定；⑥添加冠突散囊菌孢子悬液；⑦烘茶；⑧发花；⑨干燥和保存。本发明提供了一种高效绿色降氟富金花散茶制备工艺，能在富金花散茶制作期内实现无污染绿色降氟，而且不影响富金花散茶的汤色、茶香、茶味、耐冲泡度等各种品质。
文档编号A23F3/14GK103053736SQ20131001468
公开日2013年4月24日 申请日期2013年1月16日 优先权日2013年1月16日
发明者赵运林, 刘石泉, 龙立平, 胡治远 申请人:湖南城市学院