专利名称：一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂盒及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及青少年肥胖易感性的检测，具体地说，是一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂盒及其应用。
背景技术：
儿童和青少年时期的肥胖问题已经成为一个世界性的公共卫生问题，全球约10%的儿童体重超重或肥胖。在中国，8个主要大城市的儿童10年肥胖增长率为93.4%，其中上海、南京10年间分别增长了 523.8%和467.7%。儿童和青少年时期出现肥胖除了会引起一系列的健康问题:包括血脂紊乱、高胰岛素血症、糖尿病、高血压、脂肪肝、睡眠呼吸障碍等，还会造成其社会适应能力、活动能力和社交能力下降等社会问题，因此越来越受到人们的重视。在儿童或青少年时期通过诊断预测其肥胖易感性，再于后期饮食和生活过程中进行调整和控制，对预防儿童和青少年肥胖具有十分重要的意义。脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(Adipocytefatty acid binding protein, FABP4)是成熟脂肪细胞的重要的细胞溶质蛋白，在脂肪组织中高度表达，占整个细胞蛋白的6%，在脂类代谢紊乱和炎症疾病的发生中发挥着重要作用，血清中FABP4水平与代谢疾病和肥胖的严重程度成正相关，具体可参见文献:(I) Furuhashi, M.and G.S.Hotamisligil,Fatty acid-binding proteins: role in metabolic diseases and potential as drugtargets.Nature Reviews Drug Discovery, 2008.7(6): p.489-503.(2) Furuhashi,M., Fuchoj R., Gorgunj C.Z., et al., Adipocyte/macrophage fatty acid - bindingproteins contribute to metabolic deterioration through actions in bothmacrophages and adipocytes in mice.The Journal of clinical investigation,2008.118(7): p.2640.。基因是 定位于8q21的单拷贝基因，含4个外显子和3个内含子。Gozal等通过研究发现在高加索人和非裔美国人中，肥胖儿童血浆FABP4蛋白水平也显著上升，并且其与儿童的体重指数(Body Mass Index, BMI)呈正相关。同时，他们还发现基因第四号外显子上的单核苷酸多态位点(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs)rsl054135与儿童肥胖的形成和血浆FABP4蛋白水平的上升都密切相关[(I)Khalyfaj A.，Bhushanj B.，Hegazij M.，et al.，Fatty-acid binding protein 4 genevariants and childhood obesity: potential implications for insulin sensitivityand CRP levels.Lipids Health Disj 2010.9: p.18.(2)Bhushan，B.，Khalyfaj A.，Spruytj K.，et al.，Fatty-acid binding protein 4 gene polymorphisms and plasmalevels in children with obstructive sleep apnea.Sleep Medj 2011.12(7): p.666-71.] ^gden等认为，不同时期、种族、年龄和性别的儿童肥胖的界定标准及成因都在发生变化[Ogden，C.L，Carroll, M.D.，Kitj Β.K.et al.，Prevalence of obesity andtrends in body mass index among US children and adolescents, 1999-2010.JAMA,2012.307(5): p.483-90.]。然而，基因与中国汉族青少年肥胖形成的相关性如何目前尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的引物对。本发明的再一的目的是，提供一种上述引物对的用途。本发明的另一的目的是，提供一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂盒。本发明的第四个目的是，提供一种上述试剂盒的使用方法。本发明的第五个目的是，提供一种上述试剂盒的用途。本发明的第六个目的是，提供一种检测FABP4基因SNPs位点rsl054135、rsl6909187和rsl6909196的基因型的方法。为实现上述目的，本发明采取的技术方案是:一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的的引物对，所述的引物对的序列如SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.3所示。为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是:如上所述的引物对在制备检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂中的应用。为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是:一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂盒，所述的试剂盒包括序列如SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.3所示的引物。所述的试剂盒还包括dNTPs、PCR反应液和DNA聚合酶。
为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是:如上所述的试剂盒的使用方法，PCR反应体系包括包括
权利要求
1.一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的的引物对，其特征在于，所述的引物对的序列如SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.3所示。
2.权利要求1所述的引物对在制备检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂中的应用。
3.—种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括序列如SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.3所示的引物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括dNTPs、PCR反应液和DNA聚合酶。
5.权利要求3或4所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，PCR反应体系包括
6.权利要求3或4所述的试剂盒在制备检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的试剂中的应用。
7.一种检测基因 SNPs 位点 rsl054135、rsl6909187 和 rsl6909196 的基因型的方法，其特征在于，所述的方法是收集待测个体的外周血，抽提DNA，以SEQ ID N0.2和SEQID N0.3所示的序列为引物扩增/ / 基因第四号外显子，测序，获得所述的SNPs位点的基因型。
全文摘要
本发明涉及一种检测中国汉族女性青少年肥胖易感性的引物对及包含该引物对的试剂盒，所述的引物对的序列如核苷酸序列表中SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示，本发明还提供了上述试剂盒的使用方法及用途。该试剂盒可用于检测中国汉族女性青少年个体的FABP4基因第四号外显子的3个SNPs位点rs1054135、rs16909187和rs16909196的基因型分布及等位基因频数，从而进一步判断该个体的肥胖易感性，指导其饮食和预防肥胖，为中国汉族女性青少年的肥胖易感性评估提供了新的途径。
文档编号C12Q1/68GK103205497SQ201310120180
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月9日 优先权日2013年4月9日
发明者董美玲, 王世东, 张庆华 申请人:上海市闸北区市北医院