一种饲料益生素的培养制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种饲料益生素的培养制备方法，包括1)选取微生物菌种，所选取的微生物菌种为枯草芽孢杆菌或地衣芽胞杆菌；2)将选取的微生物菌种进行培养，(1)茄子瓶斜面培养基培养，(2)一级种子罐培养，(3)二级种子罐培养；(4)发酵培养。将上述产品粉未化处理的方法，包括：在发酵液中加入絮凝剂0.1-3%的磷酸氢二钠，0.1-3%的氯化钙，加入助滤剂碳酸钙，60℃搅拌20-30分钟，进行板框过滤，收集固体，后进入旋风分离器进行干燥处理，得到粉末固体产品。本发明制备方法得出的菌量在≥500亿cfu/g，活力高，应用广泛，价格合理，完全符合了各养殖户的需求。
【专利说明】一种饲料益生素的培养制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种饲料益生菌的制备方法，具体说是一种选择菌株后经种子培养、 发酵，净化处理得到的一种益生素的方法。
【背景技术】
[0002] 益生素（Probiotic)，又称促生素、生菌剂、活菌制剂、微生态调节剂，其中文名称 尚无统一规定，对其定义的解释也不尽一致。首先Lilley和Still well于1965年使用益 生素一词（Probiotic),与抗生素（antibiotic)相对，两者的作用矛盾。抗生素是直接杀灭 或抑制有害菌生长。1974年美国RE Parker认为'益生素是维持肠道菌群平衡的微生物或 物质'。1989年Fuller重新定义为'一种可通过改变肠道微生物平衡而对动物施加有利 影响的活的微生物饲料添加剂'。1990年H.S 〇SSard给益生素的定义是'摄入动物体内参 与肠内微生物群落的阻碍作用，或者通过增强非特异性免疫功能来预防疾病而间接地起促 进作用和提高饲料效率的活的微生物培养物'。1991年我国学者又提出了一个较通俗的概 念一"饲用微生物添加剂"。
[0003] 益生素是一类微生物制剂，它作为一种新型饲料添加剂，具有无毒、无副作用，以 及促进动物生长，提高饲料转化率，增强动物机体的免疫功能等特点，目前已被广泛应用 于畜禽养殖业。
[0004] 可用作益生素的微生物种类很多，美国FDA(1989)规定允许饲喂的微生物有42 种。我国1999年经农业部批准使用的微生物品种有12种，包括蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆 菌、粪链球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌和乳酸链球菌等。生产上使用的益生素有两种：一种为 单一菌属组成的单一型菌制剂，另一种为多种不同菌属组成的复合型菌制剂。
[0005] 目前由单一菌株经发酵，净化处理得到的产品菌量都< 100亿cfu/g，而且杂菌较 多，投入畜禽养殖业添加量较多，造成成本较高，给养殖户造成一定的经济负担。本发明制 备方法得出的菌量在> 500亿cfu/g，活力高，应用广泛，价格合理，完全符合了各养殖户的 需求。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是提供一种培养后杂菌含量较少，投入畜禽养殖添加量 较少，且成本低的一种饲料益生素的培养制备方法。为解决上述技术问题，本发明的一种饲 料益生素的培养制备方法包括以下步骤： 一种饲料益生素的培养制备方法，选取微生物菌种，所选取的微生物菌种为枯草芽孢 杆菌或地衣芽胞杆菌；将选取的微生物菌种进行培养，包括。
[0007] (1)茄子瓶斜面培养基培养，胰蛋白胨1%，酵母膏0· 5%，氯化钠1%，琼脂粉1. 5%， 121°C，灭菌30分钟；制成斜面，冷却后进行涂布接种，于38°C培养18-24h。
[0008] (2) -级种子罐培养，豆柏1-6%，玉米粉1-5%，葡萄糖0. 01-0. 1%，玉米浆 0. 5-2. 5%，硫酸盐 0. 001-0. 04%，蛋白胨 0. 001-0. 06%，氢氧化钠 0. 001-0. 15%，消泡剂 0. 001-0. 4% ;121°C灭菌30min，降温至38°C，将备好的菌种无菌接到种子罐中，温度38°C， 罐压 0. 05Mpa，转速 160 转 /min，风量 160m3/h，培养 10h。
[0009] (3)二级种子罐培养，豆柏1-6%，玉米粉1-5%，葡萄糖0. 01-0. 1%，玉米浆 0. 5-2. 5%，硫酸盐 0. 001-0. 04%，蛋白胨 0. 001-0. 06%，氢氧化钠 0. 001-0. 15%，消泡剂 0. 001-0. 4%，氯化钠 0. 01-0. 4%，磷酸氢二钾 0. 001-0. 4% ;121°C灭菌 30min，降温至 38°C，将 培养好的一级种子罐培养基无菌打压至二级种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速150 转 /min，风量 200m3/h，培养 9h。
[0010] (4)发酵培养，豆柏1-6%，玉米粉1-5%，葡萄糖0· 01-0. 1%，玉米浆0· 5-2. 5%，硫酸 盐 0. 001-0. 04%，蛋白胨 0. 001-0. 06%，氢氧化钠 0. 001-0. 15%，消泡剂 0. 001-0. 4%，氯化钠 0. 01-0. 4%，121 °C灭菌30min，降温至38°C，将培养好的二级种子罐培养基无菌打压至发酵 罐培养基中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速180转/min，风量260m3/h，培养32h，镜检观察 产生的芽孢率> 95%。
[0011] 将上述饲料益生素的培养制备方法所生产的产品粉未化处理的方法，包括以下步 骤：在发酵液中加入絮凝剂0. 1-3%的磷酸氢二钠，0. 1-3%的氯化钙，加入助滤剂碳酸钙， 60°C搅拌20-30分钟，进行板框过滤，收集固体，后进入旋风分离器进行干燥处理，得到粉 末固体产品。
[0012] 培养后杂菌含量较少，菌量高，菌量> 500亿cfu/g，投入畜禽养殖添加量较少，且 成本低，更能促进畜禽生长及提高饲料利用率。
【专利附图】
【附图说明】
[0013] 图1是本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0014] 本发明的一种饲料益生素的培养制备方法，包括以下步骤： 选取微生物菌种，所选取的微生物菌种为枯草芽孢杆菌或地衣芽胞杆菌。
[0015] 将选取的微生物菌种进行培养，包括： (1)茄子瓶斜面培养基培养，胰蛋白胨1%，酵母膏〇. 5%，氯化钠1%，琼脂粉1. 5%，121°C， 灭菌30分钟；制成斜面，冷却后进行涂布接种，于38°C培养18h。
[0016] (2) -级种子罐培养，豆柏1%，玉米粉1%，葡萄糖0· 01%，玉米浆0· 5%，硫酸盐 0. 001%，蛋白胨0. 001%，氢氧化钠0. 001%，消泡剂0. 001% ;121°C灭菌30min，降温至38°C， 将备好的菌种无菌接到种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速160转/min，风量160m3/ h，培养10h。
[0017] (3)二级种子罐培养，豆柏1%，玉米粉1%，葡萄糖0· 01%，玉米浆0· 5%，硫酸盐 0. 001%，蛋白胨0. 0016%，氢氧化钠0. 001%，消泡剂0. 001%，氯化钠0. 01%，磷酸氢二钾 0. 001% ;121°C灭菌30min，降温至38°C，将培养好的一级种子罐培养基无菌打压至二级种 子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速150转/min，风量200m3/h，培养9h。
[0018] (4)发酵培养，豆柏1%，玉米粉1%，葡萄糖0· 01%，玉米浆0· 5%，硫酸盐0· 001%， 蛋白胨0. 001%，氢氧化钠0. 001%，消泡剂0. 001%，氯化钠0. 01%，121 °C灭菌30min，降 温至38°C，将培养好的二级种子罐培养基无菌打压至发酵罐培养基中，温度38°C，罐压 0. 05Mpa，转速180转/min，风量260m3/h，培养32h，镜检观察产生的芽孢率彡95%。
[0019] 将上述饲料益生素的培养制备方法所生产的产品粉未化处理的方法，包括以下步 骤：在发酵液中加入絮凝剂0. 1%的磷酸氢二钠，0. 1%的氯化钙，加入助滤剂碳酸钙，60°C搅 拌20-30分钟，进行板框过滤，收集固体，后进入旋风分离器进行干燥处理，得到粉末固体 产品。
[0020] 实施例1 枯草芽孢杆菌饲料益生素的培养制备方法 1.菌株培养 250ml是茄子瓶斜面培养基加入胰蛋白胨1%，酵母膏0. 5%，氯化钠1%，琼脂粉1. 5%， 121°C，灭菌30分钟，制成斜面，冷却后进行涂布接种，与38°C培养18-24h。
[0021] 2.种子培养 将茄子瓶培养的菌种，以无菌处理方式转接与500ml三角瓶中，以备接种种子罐。400L 的一级种子罐培养基加入豆柏4%，玉米粉2%，蛋白酶0. 03%，与45°C酶解40min，后加入葡萄 糖0. 6%，玉米浆1. 2%，硫酸锰0. 025%，氢氧化钠0. 075%，消泡剂0. 16%，121 °C灭菌30min，降 温至38°C，将备好的菌种无菌接到种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速150转/min，风 量 200m3/h，培养 10h。
[0022] 5000L的二级种子罐培养基加入豆柏4. 6%，玉米粉2%，蛋白酶0. 0173%，与45°C酶 解40min，后加入葡萄糖0. 23%，玉米浆0. 46%，硫酸锰0. 0116%，氢氧化钠0. 023%，消泡剂 0. 0693%，氯化钠0. 23%，磷酸氢二钾0. 023%，121°C灭菌30min，降温至38°C，将培养好的一 级种子罐培养基无菌打压至二级种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速150转/min，风量 200m3/h，培养 9h。
[0023] 3.发酵培养 20T的发酵罐培养基加入豆柏5%，玉米粉2. 6%，蛋白酶0. 02%，与45°C酶解40min，后加 入葡萄糖0. 25%，玉米浆0. 5%，硫酸锰0. 23%，氢氧化钠0. 23%，消泡剂0. 1%，氯化钠0. 23%， 将培养好的二级种子罐培养基无菌打压至发酵罐培养基中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速 160转/min，风量260 m3/h，培养32h，镜检观察产生的芽孢率彡95%。
[0024] 4.后序粉末处理 发酵液达到要求，加入絮凝剂2%的磷酸氢二钠、2. 5%的氯化钙，加入助滤剂6%的碳酸 钙，60°C搅拌30分钟，进行板框过滤，收集固体，后进入旋风分离器进行干燥处理，得到粉 末固体产品。或者发酵液达到要求，直接进入喷雾干燥塔进行喷雾处理得到粉末固体产品。
[0025] 实施例2 枯草芽孢杆菌，地衣芽胞杆菌（10702 ) 1.菌株培养 250ml是茄子瓶斜面培养基加入胰蛋白胨1%，酵母膏0. 5%，氯化钠1%，琼脂粉1. 5%， 121°C，灭菌30分钟，制成斜面，冷却后进行涂布接种，与38°C培养18-24h。
[0026] 2.种子培养 将茄子瓶培养的菌种，以无菌处理方式转接与500ml三角瓶中，以备接种种子罐。400L 的一级种子罐培养基加入豆柏4%，玉米粉2. 5%，蛋白酶0. 03%，与45°C酶解40min，后加入葡 萄糖0. 6%，硫酸锰0. 025%，氢氧化钠0. 03%，消泡剂0. 16%，121°C灭菌30min，降温至38°C， 将备好的菌种无菌接到种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速160转/min，风量160m3/ h，培养10h。
[0027] 5000L的二级种子罐培养基加入豆柏4%，玉米粉2. 65%，蛋白酶0. 0173%，与45°C 酶解40min，后加入葡萄糖0. 23%，玉米浆0. 46%，硫酸锰0. 023%，氢氧化钠0. 026%，消泡剂 0. 093%，氯化钠0. 23%，121°C灭菌30min，降温至38°C，将培养好的一级种子罐培养基无菌 打压至二级种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速180转/min，风量200m3/h，培养9h。
[0028] 3.发酵培养 20T的发酵罐培养基加入豆柏5%，玉米粉2. 65%，蛋白酶0. 02%，与45°C酶解40min， 后加入葡萄糖〇. 25%，玉米浆0. 465%，硫酸锰0. 23%，氢氧化钠0. 23%，消泡剂0. 1%，氯化 钠0. 235%，将培养好的二级种子罐培养基无菌打压至发酵罐培养基中，温度38°C，罐压 0. 05Mpa，转速180转/min，风量260 m3/h，培养32h，镜检观察产生的芽孢率彡95%。
[0029] 后序粉末处理 发酵液达到要求，加入絮凝剂2%的磷酸氢二钠、2. 5%的氯化钙，加入助滤剂6%的碳酸 钙，60°C搅拌30分钟，进行板框过滤，收集固体，后进入旋风分离器进行干燥处理，得到粉 末固体产品。或者发酵液达到要求，直接进入喷雾干燥塔进行喷雾处理得到粉末固体产品。
[0030] 地衣芽孢杆菌对断奶仔猪生产性能的影响 1材料与方法 1. 1试验动物与试验日粮 试验选取25日龄断奶体重相近的健康断奶仔猪104头，平均体重7. 37±0. 02kg，由山 东7K和新泰养殖基地提供。
[0031] 1组为空白对照组，饲喂基础日粮，采用300瘦肉型乳猪配合饲料，由山东六和 有限公司提供。基础日粮主要营养水平：粗蛋白质> 21.0%、粗纤维< 4.0%、粗灰分 彡7. 0%、钙0· 05%?1. 2%、总磷0· 4%?1. 2%、食盐0· 3%?0· 8%、赖氨酸彡1. 25%。
[0032] 2组为试验组，饲喂试验日粮，在基础日粮上按200g/t地衣芽孢杆菌量添加，其中 地衣芽孢杆菌的活菌数彡500亿CFU / g，由山东高龙生物科技有限公司提供。
[0033] 试验分组与饲养管理 试验仔猪随机分为2个组，每组2个重复，每重复26头(公母各半)。试验前预试5天， 30日龄称重，开始正式试验，试验周期21天。试验期间自由采食，自由饮水，其它饲养管理 按照断奶仔猪饲养管理程序进行。试验在山东六和新泰养殖基地完成。
[0034] 试验数据记录 试验全程记录各组饲料消耗量、采食情况、腹泻及生长情况；观察粪便、毛色及精神情 况。在试验第1天(即30日龄)和试验第21天早晨空腹称重，称量剩余饲料量，计算各组平 均日增重、料肉比（F/G)、死淘率和腹泻率。
[0035] 试验结果统计与分析 采用统计学软件SPSS13. 0软件对数据进行单因子方差分析和相关性分析。
[0036] 试验结果与分析 2. 1地衣芽孢杆菌对断奶仔猪增重的影响 由试验结果可以看出，在试验初期空白组与地衣芽孢杆菌组（简称芽孢组）平均初重 无明显差异（P>〇. 05);在试验末期（第21日龄），芽孢组体重明显高于空白对照组，平均总 增重、平均日增重分别提高了 12.33%、13. 89%，差异显著（P〈0. 05)。由表1可见，与空白 对照组相比，0.02%的地衣芽孢杆菌组显著提高了仔猪的试验末重、总增重及平均日增重。
[0037] 表1 0. 02%地衣芽孢杆菌对断奶仔猪增重的影响(单位：kg/头）
【权利要求】
1. 一种饲料益生素的培养制备方法，其特征在于： 1) 选取微生物菌种，所选取的微生物菌种为枯草芽孢杆菌或地衣芽胞杆菌； 2) 将选取的微生物菌种进行培养，包括： (1) 茄子瓶斜面培养基培养，胰蛋白胨1%，酵母膏〇. 5%，氯化钠1%，琼脂粉1. 5%，121°C， 灭菌30分钟；制成斜面，冷却后进行涂布接种，于38°C培养18-24h ; (2) -级种子罐培养，豆柏1-6%，玉米粉1-5%，葡萄糖0. 01-0. 1%，玉米浆0. 5-2. 5%，硫 酸盐0· 001-0. 04%，蛋白胨 0· 001-0. 06%，氢氧化钠 0· 001-0. 15%，消泡剂 0· 001-0. 4% ; 121 °C 灭菌30min，降温至38°C，将备好的菌种无菌接到种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速 160 转 /min，风量 160m3/h，培养 10h ; (3) 二级种子罐培养，豆柏1-6%，玉米粉1-5%，葡萄糖0. 01-0. 1%，玉米浆0. 5-2. 5%， 硫酸盐 0. 001-0. 04%，蛋白胨 0. 001-0. 06%，氢氧化钠 0. 001-0. 15%，消泡剂 0. 001-0. 4%，氯 化钠 0. 01-0. 4%，磷酸氢二钾0. 001-0. 4% ;121°C灭菌30min，降温至38°C，将培养好的一级 种子罐培养基无菌打压至二级种子罐中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速150转/min，风量 200m3/h，培养 9h ; (4) 发酵培养，豆柏1-6%，玉米粉1-5%，葡萄糖0. 01-0. 1%，玉米浆0. 5-2. 5%，硫酸盐 0· 001-0. 04%，蛋白胨 0· 001-0. 06%，氢氧化钠 0· 001-0. 15%，消泡剂 0· 001-0. 4%，氯化钠 0. 01-0. 4%，121 °C灭菌30min，降温至38°C，将培养好的二级种子罐培养基无菌打压至发酵 罐培养基中，温度38°C，罐压0. 05Mpa，转速180转/min，风量260m3/h，培养32h，镜检观察 产生的芽孢率> 95%。
2. -种将权利要求1所述的饲料益生素的培养制备方法所生产的产品粉未化处理的 方法，其特征在于：在发酵液中加入絮凝剂0. 1-3%的磷酸氢二钠，0. 1-3%的氯化钙，加入助 滤剂碳酸钙，60°C搅拌20-30分钟，进行板框过滤，收集固体，后进入旋风分离器进行干燥 处理，得到粉末固体产品。
【文档编号】C12N1/20GK104232500SQ201310512504
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年10月28日 优先权日:2013年10月28日
【发明者】李国文, 赵洪涛, 袁伟岗 申请人:山东文远生物技术有限公司