毕赤酵母配置过程中抽提质粒ｄｎａ溶液的调配方法
【专利摘要】本发明公开了毕赤酵母配置过程中抽提质粒ＤＮＡ溶液的调配方法。步骤如下：首先将柠檬酸钠室温下进行过滤；加入琼脂糖凝胶电缓冲液后浓缩；将７０ml的甘油和3倍的纯净水混合均匀后，在高压下进行灭菌处理；其后再过滤除菌；最后加入3%的琼脂粉，随后室温保存即可；可以加入质量比例为而十分之一的硫酸铵；所述柠檬酸钠中，可以加入适量山梨醇。本发明的有益效果是，成本低，对环境污染小，可以作为大量制备GK8的途径。
【专利说明】毕赤酵母配置过程中抽提质粒D N A溶液的调配方法【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说，毕赤酵母配置过程中抽提质粒D N A溶液的调配方法。
【背景技术】
[0002]毕赤酵母，是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌。与其它酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在，当环境营养限制时，常诱导2个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配，融合成双倍体。毕赤酵母的另一个生物学特点是，甲醇代谢所需的醇氧化酶被分选到过氧化物酶体中，形成区域化。以葡萄糖作碳源时，菌体中只有I个或很少几个小的过氧化物酶体，而以甲醇作碳源时，过氧化物酶体几乎占到整个细胞体积的80%，AOX增至细胞总蛋白的35%-40%。因此，当在AOX基因前利用同源重组方式插入外源蛋白基因时，可获得大量表达。同时，根据甲醇酵母这种可以形成过氧化物酶体的特性，既可利用该系统表达一些毒性蛋白和易被降解的酶类，也可用以研究细胞特异区域化的生物发生及其机制和功能，为闻等动物类似的研究提供启不。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
毕赤酵母配置过程中抽提质粒D N A溶液的调配方法，步骤如下:首先将柠檬酸钠室温下进行过滤；加入琼脂糖凝胶电缓冲液后浓缩；将7 O ml的甘油和3倍的纯净水混合均匀后，在高压下进行灭菌处理；其后再过滤除菌；最后加入3%的琼脂粉，随后室温保存即可。
[0004]本发明中，可以加入质量比例为而十分之一的硫酸铵。
[0005]本发明中，所述柠檬酸钠中，可以加入适量山梨醇。
[0006]本发明的有益效果是，成本低，对环境污染小，可以作为大量制备GK8的途径。【具体实施方式】
[0007]毕赤酵母配置过程中抽提质粒D N A溶液的调配方法，步骤如下:首先将柠檬酸钠室温下进行过滤；加入琼脂糖凝胶电缓冲液后浓缩；将7 O ml的甘油和3倍的纯净水混合均匀后，在高压下进行灭菌处理；其后再过滤除菌；最后加入3%的琼脂粉，随后室温保存即可。加入质量比例为而十分之一的硫酸铵，所述柠檬酸钠中，加入适量山梨醇。
[0008]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.毕赤酵母配置过程中抽提质粒DNA溶液的调配方法，其特征在于，步骤如下:首先将柠檬酸钠室温下进行过滤；加入琼脂糖凝胶电缓冲液后浓缩；将7 O ml的甘油和3倍的纯净水混合均匀后，在高压下进行灭菌处理；其后再过滤除菌；最后加入3%的琼脂粉，随后室温保存即可。
2.如权利要求1所述的毕赤酵母配置过程中抽提质粒D N A溶液的调配方，其特征在于，可以加入质量比例为而十分之一的硫酸铵。
3.如权利要求1所述的毕赤酵母配置过程中抽提质粒D N A溶液的调配方，其特征在于，所述柠檬酸钠中，可以加入适量山梨醇。
【文档编号】C12R1/84GK103602664SQ201310525799
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】徐丽 申请人:徐丽