大肠杆菌细胞的制备方法
【专利摘要】本发明公开了大肠杆菌细胞的制备方法。步骤如下：首选挑选合适的细胞菌落，然后将DH5平板划线，在35摄氏度环境下过夜；其后将菌落接种于菌液中，并导入离心管中；随后在35摄氏度的培养箱中过夜；加入10%琼脂；250rpm摇床过夜；加入100ml的氯化钙溶液；混悬菌液，离心分离；将上清去除干净即可；保存的时候可以滴入适量甘油；所述氯化钙溶液需要提前预冷，并保存在摄氏度4度的环境中。本发明的有益效果是，成本低，对环境污染小，同时获得的基因扩增可以得到确认。
【专利说明】大肠杆菌细胞的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说，大肠杆菌细胞的制备方法。
【背景技术】
[0002]肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌,是Escherich在1885年发现的,在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜(禽)，常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核生物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类:致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。大肠杆菌属于细菌。大肠杆菌是与我们日常生活关系非常密切的一类细菌，学名称作“大肠埃希菌”，属于肠道杆菌大类中的一种。它是寄生在人体大肠里对人体无害的一种单细胞生物，结构简单，繁殖迅速，培养容易，它是生物学上重要的实验材料。在婴儿刚出生的几小时内，大肠杆菌就经过吞咽在肠道内定居了。正常情况下，大多数大肠杆菌是非常安分守己的，他们不但不会给我们的身体健康带来任何危害，反而还能竞争性抵御致病菌的进攻，同时还能帮助合成维生素K2，与人体是互利共生的关系。只有在机体免疫力降低、肠道长期缺乏刺激等特殊情况下，这些平日里的良民才会兴风作浪，移居到肠道以外的地方，例如胆囊、尿道、膀胱、阑尾等地，造成相应部位的感染或全身播散性感染。因此，大部分大肠杆菌通常被看作机会致病菌。
【发明内容】
[0003]为克服上述 技术问题，我们提出了以下技术方案:
大肠杆菌细胞的制备方法，步骤如下:首选挑选合适的细胞菌落，然后将DH5平板划线，在35摄氏度环境下过夜；其后将囷落接种于囷液中，并导入尚心管中；随后在35摄氏度的培养箱中过夜；加入10%琼脂；250rpm摇床过夜；加入100ml的氯化钙溶液；混悬菌液，离心分离；将上清去除干净即可。
[0004]本发明中，保存的时候可以滴入适量甘油。
[0005]本发明中，所述氯化钙溶液需要提前预冷，并保存在摄氏度4度的环境中。
[0006]本发明的有益效果是，成本低，对环境污染小，同时获得的基因扩增可以得到确认。
【具体实施方式】
[0007]大肠杆菌细胞的制备方法，步骤如下:首选挑选合适的细胞菌落，然后将DH5平板划线，在35摄氏度环境下过夜；其后将菌落接种于菌液中，并导入离心管中；随后在35摄氏度的培养箱中过夜；加入10%琼脂；250rpm摇床过夜；加入100ml的氯化钙溶液；混悬菌液，离心分离；将上清去除干净即可，保存的时候可以滴入适量甘油。所述氯化钙溶液需要提前预冷，并保存在摄氏度4度的环境中。[0008]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或 改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.大肠杆菌细胞的制备方法，其特征在于，步骤如下:首选挑选合适的细胞菌落，然后将DH5平板划线，在35摄氏度环境下过夜；其后将菌落接种于菌液中，并导入离心管中；随后在35摄氏度的培养箱中过夜；加入10%琼脂；250rpm摇床过夜；加入100ml的氯化钙溶液；混悬菌液，离心分离；将上清去除干净即可。
2.如权利要求1所述的大肠杆菌细胞的制备方法，其特征在于，保存的时候可以滴入适量甘油。
3.如权利要求1所述的大肠杆菌细胞的制备方法，其特征在于，所述氯化钙溶液需要提前预冷，并保存在摄氏 度4度的环境中。
【文档编号】C12R1/19GK103602612SQ201310525800
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】徐丽 申请人:徐丽