调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴将新鲜或经浸润、软化后的干燥的青藏高原特有牛种牦牛wildyak的牦牛皮清洗干净，然后加碱浸泡，得到脱毛后的牦牛皮；⑵脱毛后的牦牛皮加水浸泡脱碱后清水冲洗，得到脱碱脱毛的牦牛皮；⑶脱碱脱毛的牦牛皮剪切成小块，然后加水焯皮，得到脱脂后的牦牛皮；⑷脱脂后的牦牛皮用水进行提取后过滤，弃去残渣，得到滤液；⑸滤液用水稀释后进行分离，即得4Kda小分子的牦牛皮胶原蛋白溶液；⑹将4Kda小分子的牦牛皮胶原蛋白溶液经浓缩、干燥，即得牦牛皮小分子胶原蛋白。本发明方法简单、效果显著，所制得的牦牛皮胶原蛋白分子量分布集中，具有调控机体能量代谢的功能。
【专利说明】调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种胶原蛋白的制备方法，尤其涉及调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法。
【背景技术】
[0002]机体所需的能量来源于食物中的糖、脂肪和蛋白质，这些营养成分经消化转变成为可吸收的小分子营养物质而被吸收。人体大约有16%是蛋白质，而蛋白质中有35~45%的胶原蛋白，主要存在的部位有皮肤、肌肉、骨骼、牙齿等，胶原蛋白是人体骨骼、尤其是软骨组织中的重要组成成分。
[0003]乳酸脱氢酶(LDH)是一种糖酵解酶，存在于机体所有组织细胞的胞质内，是催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，丙酮酸当糖酵解速度超过有氧代谢速度时被还原为乳酸，是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。
[0004]肌酸激酶(CK)存在于心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。
[0005]三磷酸腺苷(ATP)直接供给能量的物质，PCr是主要的能量储备物质，生理情况下ATP可被线粒体肌酸激酶从线粒体内膜转移并形成PCr，PCr在需能部位再经胞质CK同工酶催化转为ATP以供利用。
[0006]牦牛是中国古老而又原始的牛种之一，是唯一能在青藏高原生态环境下生存繁衍的牛种，是青藏高原特有的优势畜种，具有独特的生态学特性及经济价值。经过千百年的自然选择与进化，形成了其独特的遗传性能和对高寒缺氧恶劣环境的适应能力，具有极强的抗逆能力、抗病能力、耐受性和适应性，能适应一般家畜不能适应的高海拔、高缺氧等严酷的高寒恶劣生态环境。牦牛体内含有许多抗疲劳、抗缺氧的生物活性物质。从牦牛皮中提取纯天然的小分子胶原蛋白，被机体吸收后被转化成参与机体能量代谢过程中所需酶类或参与到中间产物合成代谢过程中，在机体需要能量时能有效及时提供能量，有效降低乳酸含量，避免代谢产物对机体的损伤。
【发明内容】
[0007]本发明所要解决的技术问题是提供一种方法简单、效果显著的调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法。
[0008]为解决上述问题，本发明所述的调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤:
⑴将新鲜或经浸润 、软化后的干燥的青藏高原特有牛种牦牛wild yak的牦牛皮清洗干净，然后按其重量的2~3倍加入质量浓度为0.5^10%的碱，在温度为2(T38°C的条件下浸泡2~?2小时，得到脱毛后的牦牛皮；
⑵将所述脱毛后的牦牛皮按其重量的3飞倍加入水，在水温为2(T30°C的条件下浸泡脱碱，重复f 4次，每次10-30分钟，然后清水冲洗，洗净残余毛屑，并测定pH值，得到脱碱脱毛的牦牛皮；
⑶将所述脱碱脱毛的牦牛皮剪切成3~5cm的小块，然后加入其重量5~20倍的水，在温度为4(T60°C的条件下焯皮2~3次，得到脱脂后的牦牛皮；
⑷将所述脱脂后的牦牛皮用其质量8~12倍的水进行提取，2~10小时后过滤，弃去残渣，得到滤液；
(5)将所述滤液用其体积的5~50倍水稀释后，在分离温度为3(T50°C的条件下进行分离，即得4Kda小分子的牦牛皮胶原蛋白溶液；
(6)将所述4Kda小分子的牦牛皮胶原蛋白溶液经浓缩、干燥，即得牦牛皮小分子胶原蛋白。
[0009]所述步骤⑴中的碱是指氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、碳酸氢钠溶液中的一种。
[0010]所述步骤(5)中的滤液分离为离心、膜分离、透析方法中的任意一种。
[0011 ] 所述步骤(6)中的浓缩是指减压浓缩、吹干浓缩中任意一种。
[0012]所述步骤(6)中的干燥条件为喷雾干燥、冷冻干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一种。
[0013]本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明以牦牛皮为原料，通过碱法脱毛处理牦牛皮，经过提取分离得到小分子胶原蛋白。采用该方法制得的牦牛皮胶原蛋白分子量分布集中，其分子量在4KDa，粒度为
2.9nm，含量大于99.9%以上(参见表1、表2、图1、图2)。
[0014]表1:小分子胶原DLS动态光散射测定结果
【权利要求】
1.调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤: ⑴将新鲜或经浸润、软化后的干燥的青藏高原特有牛种牦牛Wild yak的牦牛皮清洗干净，然后按其重量的2~3倍加入质量浓度为0.5^10%的碱，在温度为2(T38°C的条件下浸泡2~?2小时，得到脱毛后的牦牛皮； ⑵将所述脱毛后的牦牛皮按其重量的3飞倍加入水，在水温为2(T30°C的条件下浸泡脱碱，重复f 4次，每次10-30分钟，然后清水冲洗，洗净残余毛屑，并测定pH值，得到脱碱脱毛的牦牛皮； ⑶将所述脱碱脱毛的牦牛皮剪切成3~5cm的小块，然后加入其重量5~20倍的水，在温度为4(T60°C的条件下焯皮2~3次，得到脱脂后的牦牛皮； ⑷将所述脱脂后的牦牛皮用其质量8~12倍的水进行提取，2~10小时后过滤，弃去残渣，得到滤液； (5)将所述滤液用其体积的5~50倍水稀释后，在分离温度为3(T50°C的条件下进行分离，即得4Kda小分子的牦牛皮胶原蛋白溶液； (6)将所述4Kda小分子的牦牛皮胶原蛋白溶液经浓缩、干燥，即得牦牛皮小分子胶原蛋白。
2.如权利要求1所述的调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤⑴中的碱是指氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、碳酸氢钠溶液中的一种。
3.如权利要求1所述的调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤(5)中的滤液`分离为离心、膜分离、透析方法中的任意一种。
4.如权利要求1所述的调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤(6)中的浓缩是指减压浓缩、吹干浓缩中任意一种。
5.如权利要求1所述的调控机体能量代谢的牦牛皮小分子胶原蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤(6)中的干燥条件为喷雾干燥、冷冻干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一种。
【文档编号】C12P21/06GK103820517SQ201410080303
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年3月6日 优先权日:2014年3月6日
【发明者】杜玉枝, 魏立新, 李岑, 高婷婷, 刘海青 申请人:中国科学院西北高原生物研究所, 青海省食品药品检验所