一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法
【专利摘要】一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，其方法是：先通过培养容器采用马铃薯燕麦淀粉培养基培养百合灰霉病菌，经灭菌锅灭菌，静置放凉为培养基配制；待测百合的采集：取现蕾初期的健康且无百合灰霉病病原菌感染的百合株苗，其上须有6-9片健康叶片，分别从上中下三个部位取完整百合叶片；病原菌采集：取百合典型感病叶片，分离纯化病原菌，经鉴定是灰霉菌后，在马铃薯燕麦淀粉培养基上培养7d，接种健康的百合叶片；采用菌丝块接种法、孢子液喷雾接种法或摩擦接种法接种；接种好病原菌的百合叶片叶柄伤口处用湿润的棉花包裹，将接种好的百合叶片置于培养皿中，喷洒适量无菌水进行保湿培养；然后分别于3、5、7、9d调查叶片发病情况观察鉴定。本发明实现了在可控条件下准确高效地鉴定不同百合品种对百合灰霉病的抗性。
【专利说明】一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于花卉抗病性鉴定【技术领域】，具体涉及一种快速人工接种离体鉴定百合 灰霉病抗性的方法。
【背景技术】
[0002] 百合)是百合科百合属多年生草本球根植物，主要分布在亚洲东部、 欧洲、北美洲等北半球温带地区，全球已发现有上百个品种，其中55种产于中国，中国是其 最主要的起源地。百合除传统药用、食用和提取香精外，由于其花姿优美，气度不凡，已是 目前世界上最受欢迎的鲜切花之一。百合灰霉病（及ciflerea)是百合地上部的主 要病害，是抑制百合生产的重要因素之一。
[0003] 百合灰霉病病原菌为椭圆葡萄孢) Cbofc.)。每年 6-8月，为灰霉病多发季节，田间百合叶片枯死，花器褐腐，茎杆发黑，后期似火烧一样。病株 地下鳞茎提早停止生长，导致产量下降，品质变劣，严重制约了百合生产和发展。一般产量 损失209Γ30%，严重流行时可造成失收。
[0004] 不同百合品种对百合灰霉病的感、抗程度不同，目前鉴定百合抗病性的调查方法 多以田间喷雾处理为主，此法易受温度、湿度、光照、空气传播等不定因素影响，造成鉴定结 果不准确并且较难估计观察时间。由于灰霉病原菌可在土壤及各种植体上存活生长，在寄 主被害部或以菌核遗留在土壤中越冬，故开放式活体接种易造成该病的扩散。因此采用一 种可控的、科学有效的方法评价和鉴定不同百合品种的抗病性，对于抗源材料的筛选、抗病 品种的选育和抗性品种的利用具有十分重要的意义。
[0005] 长期以来，由于没有筛选到抗源材料，致使百合抗灰霉病的育种工作进展缓慢。综 上可见，如果能找到离体条件下安全、快速的鉴定百合对百合灰霉病抗性的方法，可为筛选 抗病百合资源提供科学、有效的评价方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，高效地 鉴定不同百合品种对于百合灰霉病的抗性。
[0007] 本发明提供的技术方案如下： A.培养容器准备：采用平板培养皿作为离体培养容器，在培养皿中放置滤纸2-3张。
[0008] B.培养基配制：采用马铃薯燕麦淀粉培养基培养百合灰霉病菌，高压灭菌锅 121°C灭菌25分钟，超净工作台上将灭菌后的培养基分装到平板培养皿中，静置放凉。
[0009] C.待测百合的采集：选取现蕾初期的健康且无百合灰霉病病原菌感染的百合株 苗，其上须有6-9片健康叶片，分别从上、中、下3个部位剪取完整的百合叶片。
[0010] D.病原菌采集：取百合典型感病叶片，分离纯化病原菌，经鉴定是灰霉菌后，在马 铃薯燕麦淀粉培养基上培养7d，用于接种健康的百合叶片。
[0011] E.接种方法：采用以下的菌丝块接种法，孢子液喷雾接种法或摩擦接种法来接种 百合灰霉病原菌； 所述菌丝块接种法：用直径为0. 5cm的打孔器将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的 灰霉菌打成菌丝块，将其接种于待测百合叶片； 所述孢子液喷雾接种法：用无菌水将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌孢 子洗出，并调成浓度为
【权利要求】
1. 一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于： A. 培养容器准备：采用平板培养皿作为离体培养容器，在培养皿中放置滤纸2-3张； B. 培养基配制：采用马铃薯燕麦淀粉培养基培养百合灰霉病菌，高压灭菌锅 121-125°C灭菌25分钟，超净工作台上将灭菌后的培养基分装到平板培养皿中，静置放凉； C. 待测百合的采集：选取现蕾初期的健康且无百合灰霉病病原菌感染的百合株苗，其 上须有6-9片健康叶片，分别从上、中、下3个部位剪取完整的百合叶片； D. 病原菌采集：取百合典型感病叶片，分离纯化病原菌，经鉴定是灰霉菌后，在马铃薯 燕麦淀粉培养基上培养7d，用于接种健康的百合叶片； E. 接种方法：采用以下的菌丝块接种法，孢子液喷雾接种法或摩擦接种法来接种百合 灰霉病原菌； 所述菌丝块接种法：用直径为0. 5cm的打孔器将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的 灰霉菌打成菌丝块，将其接种于待测百合叶片； 所述孢子液喷雾接种法：用无菌水将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌孢 子洗出，并调成浓度为
的菌悬液，喷雾接种于待测百合叶片； 所述摩擦接种法：挑取马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉病原菌与适量石英砂 及无菌水混合均匀，用无菌的小指形管沾取调制好的孢子叶，避开主叶脉涂抹于待测叶片 上，摩擦数次至形成细小的伤口； F. 培养：接种好病原菌的百合叶片叶柄伤口处用湿润的棉花包裹，将接种好的百合叶 片置于培养皿中，喷洒适量无菌水，于25°C (常温）条件下保湿培养； G. 观察鉴定：分别于3、5、7、9d调查叶片发病情况。
2. 根据权利要求1所述的人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：在 E.接种方法中，选择菌丝接种法接种。
3. 根据权利要求1所述的人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：所 述的平板培养皿为9cm平板培养皿。
【文档编号】C12R1/645GK104087653SQ201410212525
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年5月20日 优先权日:2014年5月20日
【发明者】陈丽静, 杨妮娜, 孙少坤, 马镝, 孙红梅, 苏瑛, 郭志富, 马慧 申请人:沈阳农业大学