一种黄色篮状菌孢子粉的制备方法、黄色篮状菌可湿性粉剂及其制备方法【专利摘要】本发明涉及一种黄色篮状菌可湿性粉剂，它包括黄色篮状菌(Talaromycesflavus)分生孢子粉、载体和助剂，所述黄色篮状菌可湿性粉剂中的活菌含量为5×l08cfu/g～5×l09cfu/g，所述黄色篮状菌可湿性粉剂的悬浮率大于75％，润湿时间小于60秒，含水量小于6％。本发明优化了黄色篮状菌qw12菌株的孢子发酵工艺；以黄色篮状菌孢子为活性成分，创制出黄色篮状菌可湿性粉剂，提供了一种黄色篮状菌生防制剂的生产技术和方便实用的新剂型。该发明为黄色篮状菌可湿粉剂大规模商品化生产奠定了基础，有利于加速黄色篮状菌在生物防治中的推广应用进程，具有重要理论和实践意义。【专利说明】-种黄色篮状菌孢子粉的制备方法、黄色篮状菌可湿性粉剂及其制备方法【
技术领域：
】[0001]本发明涉及微生物农药【
技术领域：
】，特别涉及一种微生物农药可湿性粉剂及其制备方法，更具体地说，本发明涉及一种黄色篮状菌孢子粉发酵及制备方法，以及该黄色篮状菌可湿性粉剂及其制备方法。【
背景技术：
】[0002]农药在防治植物病虫害，保证农业稳产和增产、提高农产品的质量、改善人民的生活水平起着重要的作用。化学农药在控制农作物病害和保护农业安全方面发挥了重要的作用，但也导致了一系列环境和社会问题，如广泛应用化学农药出现的"3R"问题等等，严重影响了现代农业的可持续发展。[0003]微生物农药是用生物活体或者代谢产物制成的能够防治作物病、虫和杂草的制齐U，防治的对象不容易产生抗药性，选择性强、对人畜及天敌较安全，繁殖较快，可以利用农副产品、工农业废水以及废弃物等来广泛生产，是生产无公害食品的首选药剂。目前，已开发成为产品、投入实际使用的杀虫细菌主要有4种，即球形芽孢杆菌、日本金龟子芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和缓病芽孢杆菌；已经记载的杀虫真菌有100个多个属、800多个种，研究最多的是白僵菌和绿僵菌。木霉菌（Trihoderma)对植物病原真菌有很好的抑制作用，是研究最多的真菌杀菌剂，已开发为木霉菌农药制剂。[0004]为了便于微生物农药的保存、运输和使用，提高药效，需将其制成一定的剂型的制齐IJ。微生物农药加工比化学农药困难，首先微生物农药的有效成分一般是活的生物体，其疏水性直接影响到制剂的分散性、悬浮性和润湿性等物理性能；其次微生物与各类助剂的生物相容性一般都比较差；另外生物体对湿度、温度和光照等环境比较敏感，制剂贮存稳定性差，需要添加保护剂等助剂。[0005]微生物农药的剂型包含了可湿性粉剂、颗粒剂、悬浮剂、微粒剂等。可湿性粉剂(WettableP〇wderS，WP)具备使用、贮存及运输方便，不添加有机溶剂和加工操作相对容易等特点，是人们在制剂开发中的首选剂型。可湿性粉剂由原药、载体和表面活性剂等助剂组成，助剂对农药制剂具有重要影响，直接影响到农药药效。尤其在真菌孢子制剂中对助剂具有更高的要求，除了要求助剂的性能优良外，还必须不能影响真菌孢子的萌发和菌丝的生长，因此筛选与真菌具有优良生物学相容性的助剂对菌剂的研制尤为重要，针对特定菌株筛选适宜的助剂是真菌可湿性粉剂生产的关键。[0006]黄色篮状菌（TalaromycesfIavus)对核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum)、齐整小核菌（Sclerotiumrolfsii)、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani)等多种病原菌产生的菌核有重寄生作用，此外对大丽轮枝菌（Verticillumdahliae)和尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum)等有明显的抑制作用。该菌生防机制多样，主要包括重寄生作用、竞争作用、溶菌作用等；其中重寄生作用是黄色篮状菌是最重要的作用机制，在与寄主真菌互作中，可以被诱导产生几丁质酶、纤维素酶、β-1，3-葡聚糖酶等多种葡萄糖氧化酶和水解酶。黄色篮状菌生长温度和pH的范围广泛，可在我国南、北方不同的生态条件下生存和繁殖，对菌核病及黄萎病等重要植物真菌病害有明显防治作用，是一种重要的生防因子，具有良好的生防应用前景和研究价值。[0007]黄色篮状菌（Talaromycesflavus)作为重要的生防菌之一，目前国内尚无该菌相应的制剂开发研究，极大地制约了黄色篮状菌在生物防治中的使用和推广。我们从土壤中分离筛选到一株黄色篮状菌qwl2(保藏编号是：CGMCC5067,特征基因GenBank登陆号：JN602366)，它对杨树腐烂菌、立枯丝核菌和玉米纹枯病菌等植物病原真菌具有很强的抑制作用。【
发明内容】[0008]针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种黄色篮状菌分生孢子粉发酵及制备方法，以及该黄色篮状菌可湿性粉剂及其制备方法。[0009]本发明的技术方案如下：[0010]-种黄色篮状菌可湿性粉剂，它包括黄色篮状菌（Talaromycesflavus)分生孢子粉、载体和助剂，所述黄色篮状菌可湿性粉剂中的活菌含量为5X108cfu/g?5X109cfu/g，所述黄色篮状菌可湿性粉剂的悬浮率大于75%，润湿时间小于60秒，含水量小于6%。[0011]所述黄色篮状菌分生孢子粉在可湿性粉剂中的重量百分比为5-50%。所述载体选自硅藻土、皂土、高岭土中的一种或多种，载体在可湿性粉剂中的重量百分比为40%?93%;所述助剂包括润湿剂、分散剂和紫外保护剂；所述润湿剂选自木质素磺酸钠、吐温80中的一种，润湿剂在可湿性粉剂中的重量百分比为1%?5%;所述分散剂为聚乙二醇，分散剂在可湿性粉剂中的重量百分比为0.5%?2%;所述紫外保护剂选自糊精和甲基纤维素的一种，紫外保护剂在可湿性粉剂中的重量百分比为〇.5%?2%。[0012]如上所述的黄色篮状菌可湿性粉剂，具体的制备方法如下：[0013](1)按量称取可湿性粉剂中各组分；[0014](2)将载体先用粉碎机粉碎，过325目筛；[0015](3)按比例依次将载体、润湿剂、分散剂、紫外保护剂和黄色篮状菌分生孢子粉充分混合均匀，即获得黄色篮状菌可湿性粉剂。[0016]在上述方案的基础上，所述黄色篮状菌为黄色篮状菌qwl2。[0017]在上述方案的基础上，所述黄色篮状菌（Talaromycesflavus)分生孢子粉中黄色篮状菌分生孢子含量为5XIO9?1.42XIO11个/g，含水量小于12%，活孢率大于90%。[0018]所述的黄色篮状菌分生孢子粉为黄色蓝状菌的固体发酵结束后，固体培养物干燥、粉碎后过200目筛；或用真菌孢子分离器分离收集的黄色篮状菌分生孢子粉。[0019]一种利用黄色篮状菌qwl2制备分生孢子粉的发酵培养方法，培养基中固体基质/水=10/4?10/10,碳源为基质的0.5%?4%，硫酸铵为基质的0.1%?4%，无机盐为基质的0·5%。?5%〇。[0020]所述的固体基质为麸皮和玉米秸杆粉，其中麸皮在固体基质中的重量百分比为20%?100%;所述的碳源选自葡萄糖、麦芽糖中的一种或两种；所述的无机盐选自MgS04、ZnS04、FeS04、CuSO4中的一种或两种的组合。[0021]发酵条件为黄色篮状菌9?12种子的接种量为3%?22(%，每天1211?2411光照，25?30°C，发酵时间为5?13d，[0022]发酵结束后，将固体培养物干燥、粉碎后过200目筛；或用真菌孢子分离器分离收集的黄色篮状菌分生孢子粉。[0023]在上述方案的基础上，所述黄色篮状菌种子为浓度IXIO6个/mL?IXIO8个/mL的黄色篮状菌孢子悬浮液或IX106cfu/mL?IX109cfu/mL的黄色篮状菌培养液。[0024]本发明优化了黄色篮状菌qwl2菌株的孢子发酵工艺；以黄色篮状菌孢子为活性成分，创制出黄色篮状菌可湿性粉剂，提供了一种黄色篮状菌生防制剂的生产技术和方便实用的新剂型。该发明为黄色篮状菌可湿粉剂大规模商品化生产奠定了基础，有利于加速黄色篮状菌在生物防治中的推广应用进程，具有重要理论和实践意义。【具体实施方式】[0025]实施例1[0026]黄色篮状菌qwl2固体发酵条件[0027]1、固体发酵基质确定[0028]分别设置3种单一物质的培养基：麸皮、玉米秸杆粉、玉米粉；4种混合物质的培养基：麸皮+玉米秸杆粉、麸皮+玉米粉、玉米秸杆粉+玉米粉、麸皮+玉米秸杆粉+玉米粉，混合物质培养基中的不同成分等比例混合。料水比=1:1，121°C灭菌30min，接种IXIO6个/mL的孢子悬浮液，接种量5%;28°C培养7d，每天翻曲1次。每个处理设三个重复。发酵结束后取0.5g固体发酵培养物，加入无菌水，在磁力搅拌器上搅拌5min，用血球计数板在显微镜下统计孢子的数目。结果表明：培养基为单一基质时，麸皮效果最好，产孢量达到5.66XIO9个/g;混合基质中，麸皮与秸杆粉组合效果最佳，产孢量达到6.10XIO9个/g(表1);进一步研究发现（表2)，麸皮与秸杆粉按4:1配比效果最好，产孢量可达7.80XIO9个/go[0029]表1不同的固体培养某对产抱量的影响【权利要求】1.一种黄色篮状菌可湿性粉剂，其特征在于，它包括黄色篮状菌（Talaromycesflavus)分生孢子粉、载体和助剂，所述黄色篮状菌可湿性粉剂中的活菌含量为5X108cfu/g?5X109cfu/g，所述黄色篮状菌可湿性粉剂的悬浮率大于75%，润湿时间小于60秒，含水量小于6%。所述黄色篮状菌分生孢子粉在可湿性粉剂中的重量百分比为5?50%。所述载体选自硅藻土、皂土、高岭土中的一种或多种，载体在可湿性粉剂中的重量百分比为40%?93%;所述助剂包括润湿剂、分散剂和紫外保护剂；所述润湿剂选自木质素磺酸钠、吐温80中的一种，润湿剂在可湿性粉剂中的重量百分比为1%?5%;所述分散剂为聚乙二醇，分散剂在可湿性粉剂中的重量百分比为0.5%?2%;所述紫外保护剂选自糊精和甲基纤维素中的一种，紫外保护剂在可湿性粉剂中的重量百分比为〇.5%?2%。2.权利要求1所述的黄色篮状菌可湿性粉剂，其特征在于具体的制备方法如下：(1)按量称取可湿性粉剂中各组分；(2)将载体和固体助剂粉碎，过325目筛；(3)各种固体助剂按比例加入到硅藻土中混匀，然后加入润湿剂混匀，最后将干燥的黄色篮状菌分生孢子粉加入到混合物中混合均匀，即获得黄色篮状菌可湿性粉剂。3.权利要求1或2所述的黄色篮状菌可湿性粉剂，其特征在于所述黄色篮状菌为黄色篮状菌qwl2,其保藏号为CGMCC5067。4.权利要求3所述的黄色篮状菌可湿性粉剂，其特征在于，所述黄色篮状菌(Talaromycesflavus)分生孢子粉中黄色篮状菌分生孢子含量为5X109?1.42X1011个/g，含水量小于12%，活孢率大于90%。所述的黄色篮状菌分生孢子粉为黄色蓝状菌的固体发酵结束后，固体培养物干燥、粉碎后过200目筛；或用真菌孢子分离器分离收集的黄色篮状菌分生孢子粉。5.-种利用黄色篮状菌qwl2制备分生孢子粉的发酵培养方法，其特征在于培养基中固体基质/水=10/4?10/10,碳源为基质的0.5%?4%，硫酸铵为基质的0.1%?4%，无机盐为基质的〇.5%。?5%〇。所述的固体基质为麸皮和玉米秸杆粉，其中麸皮在固体基质中的重量百分比为20%?100%;所述的碳源选自葡萄糖、麦芽糖中的一种或两种；所述的无机盐选自MgS04、ZnS04、FeS04、CuS04中的一种或两种的组合。发酵条件为黄色篮状菌qwl2种子的接种量为3%-22%，每天12h?24h光照，25?30°C，发酵时间为5?13d，发酵结束后，将固体培养物干燥、粉碎后过200目筛；或用真菌孢子分离器分离收集的黄色篮状菌分生孢子粉。6.根据权利要求5所述的利用黄色篮状菌qwl2制备分生孢子粉的发酵培养方法，其特征在于所述黄色篮状菌种子为浓度1X1〇6个/mL?1X108个/mL的黄色篮状菌孢子悬浮液或1X106cfu/mL?1X109cfu/mL的黄色篮状菌培养液。【文档编号】C12R1/645GK104286032SQ201410449924【公开日】2015年1月21日申请日期:2014年9月4日优先权日:2014年9月4日【发明者】咸洪泉,张军霞,李雅华申请人:青岛农业大学