基于DNA Barcoding的9种常见鱼类鉴别试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种基于DNA Barcoding的9种常见鱼类（多宝鱼、青鱼、中华鲟、金鲳、带鱼、生鱼、黄河鲶、武昌鱼、鳕鱼）及其生肉制品的一种鉴别方法。通过对编辑好的碱基序列长度进行比较来鉴别9种常见鱼类及其生肉制品，该方法是基于DNA Barcoding建立的，不受被鉴定材料的形态限制，即便是个体的组织碎片，也能得出准确的结论，因此可广泛用于鱼类及其生肉制品的准确鉴定。
【专利说明】基于DNABarcoding的9种常见鱼类鉴别试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种鱼类的鉴别方法，尤其涉及到一种基于DNA Barcoding的9种 常见鱼类(多宝鱼、青鱼、中华鲟、金鲳、带鱼、生鱼、黄河鲶、武昌鱼、鳕鱼）鉴别方法。
【背景技术】
[0002] 鱼类作为水生环境的指标生物，不仅可做为水体净化指标，还可以作为外来物种 入侵检验指标，同时鱼类多样性指标也可以反映其生境状态。近年来，随着我国经济的高速 发展，生态问题日益突出，为外来物种的入侵提供了便利条件，给当地鱼类开发和保护带来 隐忧。如何快速有效的识别鱼类成为迫切需要解决的问题。但是，由于传统的形态分类学 目前得不到足够的重视，形态分类的专业人员逐步减少，影响了鱼类资源保护以及生境研 究等工作。
[0003] 近年来广泛发展的一种由四川大学研发出的鱼类分子生物学快速鉴别方法 CN200510022323. 1，是通过编码鱼类RNA的核DNA序列的保守性及其转录间隔子的种间差 异结合传统的电泳技术鉴别鱼类，这种方法耗时较长，成本较高，更关键的是这种方法无法 用于筛选和鉴定特定的鱼类。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的缺陷，本发明公开了一种9种常见鱼类及其生肉制品的鉴别方 法，通过对编辑好的碱基序列长度进行比较来鉴别多种鱼类中是否有这9种鱼类中的某 种，该方法是基于DNA Barcoding建立的，不受被鉴定材料的形态限制，即便是个体的组织 碎片，也能得出准确的结论，因此可广泛用于9种常见鱼类及其生肉制品的准确鉴定。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 1、根据已知鱼类的DNA条形码数据库，设计和合成多组引物。
[0006] 2、从包含这9种鱼的多种鱼类中提取DNA，利用引物对每个待测对象的DNA进行扩 增，根据扩增的结果，选出最佳引物和反应条件。
[0007] 3、利用步骤（2)筛选出的引物对每个待测对象的DNA进行扩增，扩增后的序列进 行测序，然后进行数据分析，从而得到针对常见鱼类DNA Barcoding数据库。
[0008] 4、在建立DNA Barcoding数据库后，对新的待测对象采用步骤（2)筛选出的引物 进行检测，将其与步骤（3)的DNA Barcoding数据库中的序列长度进行比对，从而确定其是 否为常见9种鱼类中的某种。
[0009] 通过上述方法，先建立对应特定引物的准确的含有常见鱼类C0I序列长度的DNA Barcoding数据库，在后续检测新的待测样品是否为该9种鱼时只需进行序列长度比对即 可进行鉴定得到准确结果。
[0010] 其中，在上述方法中，采用酚氯仿抽提法提取DNA。
[0011] 具体的说，通过上述方法筛选得到了 一对具有良好PCR扩增性能的引物 (F-BaL1475/F-BaH1752 :CCCGTCTCTGTGGCAAAAGAG/TGGCTGCTTTTAGGCCCAC)。
[0012] 通过上述引物，得到的9种常见鱼类DNABarcoding数据库如下表1所示： 表 1:DNABarcoding数据库
【权利要求】
1.基于DNABarcoding的9种常见鱼类（多宝鱼、青鱼、中华鲟、金鲳、带鱼、生鱼、黄 河鲶、武昌鱼、鳕鱼）及其生肉制品鉴别试剂盒，其特征在于它是通过对试验所得的碱基序 列长度进行比较从而准确鉴别常见9种鱼类及其生肉制品的方法，简便易行，操作容易；包 括下述步骤：（1)根据已知鱼类的DNA条形码数据库，设计和合成多组引物；（2)从包含 这9种鱼的多种鱼类中提取DNA，利用引物对每个待测对象的DNA进行扩增，根据扩增的 结果，选出最佳引物和反应条件；（3)利用步骤（2)筛选出的引物对每个待测对象的DNA 进行扩增，扩增后的序列进行测序，然后进行数据分析，从而得到针对9种常见鱼类DNA Barcoding数据库；（4)在建立DNABarcoding数据库后，对新的待测对象采用步骤（2)筛 选出的引物进行检测，将其与步骤（3)的DNABarcoding数据库中的序列长度进行比对，从 而确定其是否为9种常见鱼类中的某种。
2.根据权利要求1的鉴定方法，其特征在于采用酚氯仿抽提法提取DNA。
3. 根据权利要求1的鉴定方法，其特征在于筛选出一组特异引物，该引物为： F-BaL1475/F-BaH1752：CCCGTCTCTGTGGCAAAAGAG/TGGCTGCTTTTAGGCCCAC〇
4. 根据权利要求3的鉴定方法，其特征在于基于这一组引物建立的9种常见鱼类DNA Barcoding数据库如下所示：
一种9种常见鱼类及其生肉制品的鉴别试剂盒，其特征在于包含权利要求3中的引物。
【文档编号】C12Q1/68GK104450883SQ201410561562
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年10月22日 优先权日:2014年10月22日
【发明者】赵生国, 边琳鹤, 李永青, 郭永博, 郑王山, 权金强, 汪文强, 车拢杰 申请人:甘肃农业大学