一种基于微流控芯片的多功能集成分析多孔细胞培养芯片的制作方法
【专利摘要】一种基于微流控芯片的多功能集成分析多孔细胞培养芯片属细胞培养分析【技术领域】。该细胞培养芯片主要由细胞培养池、小皿组成；细胞培养池位于小皿内底部，与小皿可逆封接而成；细胞培养池上有2～6个孔室。所述细胞培养池的材料为可透光透气的PDMS聚合物，所述孔室由打孔器制出。所述细胞培养池为厚度为1mm～5mm。本实用新型细胞培养芯片具操作简便，成本低廉，试剂及细胞消耗量低，显微观察视野无明显的明暗影响，加液换液时细胞不易被冲起，细胞接种时密度更均一等优点，能够实现特定的实验目的，在细胞培养与分析评价方面有广泛的应用价值。
【专利说明】一种基于微流控芯片的多功能集成分析多孔细胞培养芯片
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及细胞培养分析的【技术领域】，具体涉及一种基于微流控芯片的多功能集成分析多孔细胞培养芯片。
【背景技术】
[0002]市场上的各类细胞培养孔板以及细胞培养皿进行细胞接种密度不均，细胞容易聚集，且边缘视野不清，只能在中间区域才易于观察。进行免疫染色相关实验试剂比较昂贵，如12孔板、24孔板进行免疫染色时浪费试剂较多，加液换液时，底部细胞容易被冲起；而96孔板虽然相对节省，但视野不清基本无法进行清晰的显微观察，加液时也容易将细胞冲起，并且如果不是一次做大量的样本，还会造成多余孔的浪费。常见细胞培养孔板及细胞培养皿也仅能进行常规的细胞实验，无法观察多种细胞相互作用或多种因素的分批刺激，不能满足如细胞共培养这样特殊的实验需求。
[0003]微流控芯片技术作为一门迅速发展起来的科学技术，已经在生物医学领域展现了其独特的优势，更因其同细胞尺寸匹配、环境同生理环境相近、在时间和空间维度上能够提供更为精确的操控，易于通过灵活设计实现多种细胞功能研宄等特点而成为新一代生物仿生和细胞研宄的重要平台。现有阶段的基于微流控芯片的细胞分析平台大多是利用同生物相容性好的PDMS硅胶材料作为芯片材料，具有很好的生物相容性，透光透气，实现芯片内的细胞培养和各种生物物理、生物化学刺激以便得到在不同细胞外微环境下细胞的行为变化，诸如存活、增殖、凋亡、分化等。PDMS芯片经无水乙醇处理后可逆封接的性质，保证封接时密闭不漏液，还可以随时根据实验需求揭下PDMS整体芯片。利用PDMS材料制作适合显微观察、免疫染色的细胞培养池进行细胞分析以及如细胞共培养等特定实验还处于空白阶段。
【发明内容】
[0004]本实用新型的目的是提供一种基于微流控芯片制作技术的细胞培养芯片，该细胞培养芯片应用于细胞在显微观察、免疫染色及细胞共培养等特定实验的研宄。
[0005]本实用新型一种基于微流控芯片的多功能集成分析多孔细胞培养芯片，该细胞培养芯片主要由细胞培养池、小皿组成；细胞培养池位于小皿内底部，与小皿可逆封接；细胞培养池上有2?6个孔室。
[0006]所述细胞培养池(I)的材料为可透光透气的PDMS聚合物，所述孔室由打孔器制出。
[0007]所述细胞培养池为厚度为Imm?5mm。
[0008]细胞培养池先经无水乙醇浸泡12小时，80°C烘干后与小皿可逆封接
[0009]本实用新型提供的细胞培养芯片，因为细胞培养池材料透光性好，且高度较低，在显微镜下观察细胞培养区受培养池壁的影响较小，视野里没有明显的明暗影响。
[0010]本实用新型提供的细胞培养芯片，因为体积小，所需细胞接种液量小，细胞接种时密度更均一，加液换液时微升级的操作对细胞影响很小，不易将细胞冲起。
[0011]本实用新型提供的细胞培养芯片，可以在细胞培养池不同孔室中接种不同细胞，细胞生长良好时，在小皿中加培养液没过细胞培养池，观察不同细胞分泌的因子对其他细胞的相关影响。
[0012]本实用新型提供的细胞培养芯片，可以在细胞培养池不同孔室中接种不同细胞，待细胞生长良好时，可以将细胞培养池揭下，在小皿中加培养液继续培养，观察不同细胞间是否有促进相互迀移或排斥的作用。
[0013]使用本实用新型的细胞培养芯片进行细胞的接种与培养时:细胞密度为5X 105cells/mL，加液量为 30 μ L-150 μ L0
[0014]本实用新型提供的基于细胞培养芯片的细胞培养、免疫染色显微观察方法，可采用生物学上常用的细胞培养、检测手段对细胞培养芯片的细胞进行培养、检测。
[0015]本实用新型细胞培养芯片具操作简便，成本低廉，试剂及细胞消耗量低，显微观察视野无明显的明暗影响，加液换液时细胞不易被冲起，细胞接种时密度更均一等优点，能够实现特定的实验目的，在细胞培养与分析评价方面有广泛的应用价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1本实用新型细胞培养芯片整体结构示意图；其中I为小皿，2为细胞培养池，3为孔室。
【具体实施方式】
[0017]下面的实施例将对本实用新型予以进一步的说明，但并不因此而限制本实用新型。
[0018]一种基于微流控芯片的多功能集成分析多孔细胞培养芯片，该细胞培养芯片主要由细胞培养池1、小皿2组成；细胞培养池I位于小皿2内底部，与小皿2可逆封接而成；细胞培养池上有2?6个孔室3。
[0019]所述细胞培养池I的材料为可透光透气的PDMS聚合物，所述孔室3由打孔器制出。
[0020]所述细胞培养池I为厚度为Imm?5mm。
[0021]本实用新型提供的细胞培养芯片，可以在细胞培养池I不同孔室3中接种不同细胞，细胞生长良好时，在小皿2中加培养液没过细胞培养池1，观察不同细胞分泌的因子对其他细胞的相关影响。
[0022]本实用新型提供的细胞培养芯片，可以在细胞培养池I不同孔室3中接种不同细胞，待细胞生长良好时，可以将细胞培养池I揭下，在小皿2中加培养液继续培养，观察不同细胞间是否有促进相互迀移或排斥的作用。
[0023]本实用新型细胞培养芯片的建立方法为:
[0024]使用75mm规格玻片进行围片，浇灌PDMS单体:引发剂(V:V) = 12:1的PDMS，高度为2臟，真空除气泡，80°C凝胶I小时，取出放凉，将固化PDMS板切割成20mmX 20mm的细胞培养池小单元，使用打孔器在其上制出5个直径为6mm的孔室，将细胞培养池经无水乙醇浸泡过夜后与小皿可逆封接，紫外照射过夜灭菌后即可使用，结构如图1所示。
[0025]利用实验室自行制作的细胞培养芯片，将细胞消化后，稀释成浓度为5 X 15ceIlsAiL的细胞悬液，50 μ L加入细胞培养池，培养池周围滴加PBS溶液增加湿度减少试剂挥干，移入二氧化碳培养箱中继续培养，细胞贴壁并均匀铺展于细胞培养池底面后，进行相关免疫染色处理。
【权利要求】
1.一种基于微流控芯片的多功能集成分析多孔细胞培养芯片，其特征在于:该细胞培养芯片主要由细胞培养池(I)、小皿(2)组成；细胞培养池(I)位于小皿(2)内底部，与小皿(2)可逆封接而成；细胞培养池上有2?6个孔室(3)。
2.按照权利要求1所述的细胞培养芯片，其特征在于:所述细胞培养池(I)的材料为可透光透气的PDMS聚合物，所述孔室(3)由打孔器制出。
3.按照权利要求1所述的细胞培养芯片，其特征在于所述细胞培养池(I)厚度为1mm ?5mm。
4.按照权利要求1所述的细胞培养芯片，其特征在于所述孔室(3)的直径为:5mm?1mm0
【文档编号】C12M3/00GK204198745SQ201420543019
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年9月22日 优先权日:2014年9月22日
【发明者】秦建华, 许慧, 李中玉 申请人:中国科学院大连化学物理研究所