本发明涉及饲料添加剂技术领域，尤其是一种石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂。
背景技术：
随着人民生活水平的不断提高，人们对于安全、绿色、健康农产品的需求，也是与日俱增。因此如何在养殖中使用安全、无毒、绿色、环保的添加剂，成为时下科研院校研究的热点问题之一。其中，中草药添加剂的使用已经被很多业内人士所公认。中草药饲料添加剂具有低毒性、无抗药性、多功能性等优点，已在畜牧生产中得到广泛应用。而微生物在中草药发酵过程中发挥着强大的分解转化能力，并能产生丰富的次生代谢产物，可大幅提高中草药中活性成分的含量，提高疗效，降低毒副作用，这对于注重养殖成本的水产养殖业显得尤为重要。
石斑鱼，属鲈形目，体长椭圆形稍侧扁，体色变异甚多，常呈褐色或红色，并具条纹和斑点，为暖水性的大中型海产鱼类。石斑鱼可分为很多种类：海红斑，东星斑，西星斑，泰星斑，豹星斑，老鼠斑，老虎斑，青斑等。目前人工养殖的主要是青斑、老虎斑。石斑鱼因其营养丰富，肉质细嫩洁白，类似鸡肉，素有“海鸡肉”之称。石斑鱼又是一种低脂肪、高蛋白的上等食用鱼，被港澳地区推为中国四大名鱼之一，在日本、新加坡、马来西亚等国家也有巨大的市场潜力，是出口创汇的优良品种。由于天然产量的不足，人工养殖石斑鱼已成为满足石斑鱼市场需求的最主要的途径。但是其养殖过程中所存在的抗生素使用过量、养殖风险大等弊端成为制约其发展的瓶颈因素。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种绿色、环保、高效的石斑鱼发酵中药免疫增强剂。
本发明采取的技术方案是：
一种石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂，其特征在于复方中草药由以下质量比的中草药组成：山茶籽15～35份、黄芪20～35份、山楂10～25份、甘草6～10份、淫羊藿6～8份、生栀子8～15份、白头翁15～28份、当归5～7份、党参3～5份。
本发明提供一种石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂，所选发酵剂为黑曲益生菌株(中国普通微生物菌株保藏管理中心，菌种编号CGMCC3.3289)和植物乳杆菌(中国普通微生物菌株保藏管理中心，菌种编号CGMCC1.124)组成的复合发酵剂，其中黑曲益生菌株的接种量为2～4％，植物乳杆菌的接种量为3～5％。
本发明提供一种石斑鱼发酵中草药免疫增强剂的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)复方中草药的制备：按照上述配方准确称量中草药，将其粉碎至80目，混合均匀，制得复方中草药；
(2)中药水溶性活性物质浸提和灭菌：向复方中草药粉剂中加入5～10倍的蒸馏水，加入葡萄糖1～2％、酵母膏0.1～0.4％、K2HPO4 0.05～0.2％，调节pH至4.5～5.5，升温至95～100℃浸泡3小时；
(3)好氧发酵：选用50L液体发酵罐，装液量为60～70％，接种黑曲霉益生菌株，接种量为2～4％，控制发酵温度30～40℃，转速150～300rpm，通气量10～20L/min，在此条件下发酵48～72h；
(4)厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种植物乳杆菌，接种量为3～5％，发酵温度为35～45℃，发酵24～48h；
(5)发酵后处理：发酵完成后将发酵液体用1～2倍体积比麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(6)粉碎：将干燥后的产品粉碎过80目筛，即得石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂。
本发明提供一种石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂，所述石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂产品在水产饲料全价料中所用的质量比例为0.2～1.0％；或所述的饲料添加剂在预混料、浓缩料以全价料中所需的比例添加使用。
本发明的优点和积极效果是：
在发酵中草药饲料添加剂制备过程中采用““有氧和厌氧异步发酵”混菌发酵工艺，与现有的同类中草药饲料添加剂产品相比作用效果更显著；发酵中草药饲料添加剂具有中草药和益生菌的双重优点，可保护石斑鱼肠道健康，保持肠道微生态平衡和最佳免疫状态，提高营养物质的消化吸收率；刺激石斑鱼非特异性免疫机制，增强其免疫应答能力；提高养殖收益，降低养殖风险。本发明作为抗生素替代物使用，无耐药和药物残留等问题，且对石斑鱼无不良影响，使用安全。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
实施例1
一种石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂，具体制备步骤如下：
(1)称量：按照如下配方准确称量中草药：山茶籽25份、黄芪20份、山楂10份、甘草7份、淫羊藿6份、生栀子10份、白头翁20份、当归5份、党参5份。
(2)复方中草药的制备：将称量后的中草药粉碎至80目，混合均匀，制得复方中草药；
(3)中药水溶性活性物质浸提和灭菌：向复方中草药粉剂中加入8倍的蒸馏水，加入葡萄糖1％、酵母膏0.2％、K2HPO4 0.05％，调节pH至5.0，升温至95～100℃浸泡3小时；
(4)好氧发酵：选用50L液体发酵罐，装液量为60～70％，接种黑曲霉益生菌株，接种量为2％，控制发酵温度30℃，转速150～300rpm，通气量10～20L/min，在此条件下发酵64；
(5)厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种植物乳杆菌，接种量为3％，发酵温度为37℃，发酵32h；
(6)发酵后处理：发酵完成后将发酵液体用1.5倍体积比麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(7)粉碎：将干燥后的产品粉碎过80目筛，即得石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂。
实施例2
一种石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂，具体制备步骤如下：
(1)称量：按照如下配方准确称量中草药：山茶籽20份、黄芪25份、山楂15份、甘草10份、淫羊藿8份、生栀子12份、白头翁25份、当归7份、党参5份。
(2)复方中草药的制备：将称量后的中草药粉碎至80目，混合均匀，制得复方中草药；
(3)中药水溶性活性物质浸提和灭菌：向复方中草药粉剂中加入10倍的蒸馏水，加入葡萄糖1.5％、酵母膏0.2％、K2HPO4 0.1％，调节pH至5.2，升温至95～100℃浸泡3小时；
(4)好氧发酵：选用50L液体发酵罐，装液量为60～70％，接种黑曲霉益生菌株，接种量为2％，控制发酵温度32℃，转速150～300rpm，通气量10～20L/min，在此条件下发酵60
(5)厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种植物乳杆菌，接种量为4％，发酵温度为35℃，发酵36h；
(6)发酵后处理：发酵完成后将发酵液体用1.2倍体积比麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(7)粉碎：将干燥后的产品粉碎过80目筛，即得石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂。
实施例3
一种石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂，具体制备步骤如下：
(1)称量：按照如下配方准确称量中草药：山茶籽30份、黄芪20份、山楂15份、甘草10、淫羊藿6、生栀子10、白头翁15、当归6、党参5。
(2)复方中草药的制备：将称量后的中草药粉碎至80目，混合均匀，制得复方中草药；
(3)中药水溶性活性物质浸提和灭菌：向复方中草药粉剂中加入6倍的蒸馏水，加入葡萄糖1.2％、酵母膏0.1、K2HPO4 0.15％，调节pH至5.0，升温至95～100℃浸泡3小时；
(4)好氧发酵：选用50L液体发酵罐，装液量为60～70％，接种黑曲霉益生菌株，接种量为2％，控制发酵温度30℃，转速150～300rpm，通气量10～20L/min，在此条件下发酵70h；
(5)厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种植物乳杆菌，接种量为3％，发酵温度为37℃，发 酵26h；
(6)发酵后处理：发酵完成后将发酵液体用2体积比麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(7)粉碎：将干燥后的产品粉碎过80目筛，即得石斑鱼用发酵中草药免疫增强剂。
为验证本发明免疫增强剂的效果，通过以下试验进行验证。
试验条件及管理：选取健康的石斑鱼480尾，体重为55±5g，暂养14d后，随机分为四组，即对照组，试验1组，试验2组，试验3组，每组3个重复，每组40尾。对照组饲喂基础饲料；试验1组饲喂添加实施例1免疫增强剂的基础饲料，添加量为0.5％；试验2组饲喂添加有本发明实施例2免疫增强剂的基础饲料，添加量为0.5％；试验3组饲喂添加有本发明实施例3免疫增强剂的基础饲料，添加量为0.5％。连续投喂42天，每天投料3次，投饵率为2％。试验结束后，尾静脉采血，测定血清生化指标，结果见表1。
试验期间的水温在26.5～28.4℃,有循环滤泵和充气泵，定期换水和清洗滤棉，维持溶解氧在5.8～7.6mg/L，pH值在6.3～7.8，控制氨(NH3)的浓度小于0.02mg/L,控制亚硝酸盐(NO2-)的含量小于0.20mg/L。
表1 发酵中草药免疫增强剂对石斑鱼血清生化指标的影响
由表1可知，发酵中草药添加剂组的溶菌酶活力和碱性磷酸酶均高于对照组；发酵中草药添加剂组的ALT、AST、GRE的含量均低于对照组。可降低鱼体内。说明饲料中添加发酵中草药免疫增强剂对谷丙转氨酶、谷草转氨酶的活性有很好的降低诱导作用，还可刺激机体免疫 功能，提高溶菌酶活力，增强石斑鱼的免疫力。