本发明涉及鱼类养殖，特别是鲑科(鲑科物种，salmonidae)的鱼类养殖，更特别地涉及用于鲑科的银化(smoltification)和预防鲑科的脱银化(去银化，desmoltification)以及用于预防和治疗鲑科的出血性二龄鲑综合征(haemorrhagicsmoltsyndrome)(hss)的新型鱼饲料和方法。
背景技术：
鲑属(salmosp.)、钩吻属(onchorhynchussp.)和红点鲑属(salvelinussp.)是属于鲑科的品种，它们具有溯河产卵的生命周期。溯河产卵的生命周期是指鱼在其生命周期中留在淡水和海水中。
淡水中鲑鱼决定迁移到海水中时，经历称为银化的生理过程。
在自然界中，银化过程是由鱼内的内源过程操纵的，并且这些都与来自鱼环境(例子是黑暗、光、水温度等)的外部信号同步。二龄鲑是淡水中鲑鱼的名字，其准备迁移到海水中。银化过程包括几个内分泌信号的物质，如脑垂体释放的褪黑激素、甲状腺刺激激素(tsh)、催乳素(prl)、生长激素(gh)和促肾上腺皮质激素释放激素(acth)。这些物质对鱼体内的几个靶器官(例子是甲状腺和肾上腺)具有影响，这些靶器官分泌信号物质，所述信号物质再而改变外观、行为、生长和新陈代谢、身体组成和能力，以保持在海水中的渗透平衡。
在淡水中，鲑鱼从环境中将离子(cl-、na+、k+、ca2+)泵入到体内(例子是通过鳃)，从尿中重新吸收离子(例子是ca2+、mg2+)并同时强烈地排泄稀尿液，从而处理体内多余的水。当鱼适应海水时，这种生理活动转向相反的方向。通过银化过程，鲑鱼变得能够从体内泵出盐(例子通过鳃泵出na+和cl-)，通过浓尿分泌多余的离子(例子是ca2+、mg2+)并且在肾中从尿中重新吸收水。
时常观察到养殖的鲑鱼在淡水中经历银化，有昏昏欲睡的行为、突起皮肤鳞、鳃苍白和许多内脏器官(如心脏-和骨骼肌、肝脏和内脏脂肪组织)出血。鱼群可能具有适度增加的死亡率。这种病况称为出血性二龄鲑缩合征(hss)。这种疾病的病因尚不完全清楚。科学文献中建议的可能解释是营养不良、遗传性疾病以及组织中存在病毒颗粒。
二龄鲑在银化过程完全之后仍留在淡水中倾向于发育出松鳞皮(松鳞)。松鳞在鱼的处理和运输中是一个挑战，因为其会轻易地造成皮肤病变。在淡水和海水中，此种病变可能成为感染的入口(例子是水霉菌、moritellaviscosa、tenacibaculummaritimum)，并且引起溃疡和扰动的渗透平衡。
在达到二龄鲑状态的鱼仍保留在淡水中的情况下，银化过程将会逆转，并且鱼会尝试重新建立适合在淡水中生活的生理平衡。称为脱银化的该过程可能伴随着食欲降低、鳞屑松弛和时常的适度增加死亡率。
在鲑鱼二龄鲑生产中传统冬季信号(每日12小时光照、12小时黑暗的光操纵(photomanipulation))的使用遇到了多个挑战。冬季信号降低了30％的日进食和生长。提供冬季信号约7周，随后是夏季信号(每日24小时光照)直到已经达到了二龄鲑状态。另外，在具有集约化生产条件的孵化场观察到具有高密度鱼的池糖(例如>70kg/m3)导致鱼接收不同量的夏季信号，这再次导致鱼在不同的时间银化。生活在具有深色壁的池塘底部的鱼更易于接受不充分的夏季信号。
如果没有达到足够的水处理或水交换，池塘中太高的生物量可能不利地影响水质(例子是增加水平的co2，>15mg/l)。差的水质会不利地影响银化过程。
另外，大鱼在小鱼之前银化，这与脱银化类似。在集约化生产条件的孵化场，由于可用池塘数量有限，在每个池塘中保持大致相似尺寸的鱼是一个挑战。因此，鱼群经常有不同尺寸的鱼，由此在鱼群中会在不同的时间发生银化和脱银化。
随着银化过程的进行，因为鱼的生理适应于海水，鱼越来越不能留在淡水中。这种现象的出现可能使鱼群中的死亡率适度增加。在生产的这个阶段，经常发现具有hss的鱼以及观察到降低的食欲和生长。
总体而言，这些病况挑战淡水和海水生产。在淡水生产中，降低的生长和一些死亡率，而对于海水生产，二龄鲑群向海水中的转移具有不均匀的二龄鲑状态。这意味着海水中的一些鱼死于渗透调节问题，或者鱼可以存活但吃得很差且更容易受到长期压力，随后是继发性疾病。几年来，挪威鲑鱼生产的平均死亡率从转移时间到收获大约20％。挪威食品安全局(2013)进行的调查显示，约40％的死亡率是由于二龄鲑的质量下降引起的。
包括在银化过程中的器官(例如，松果体、下丘脑、垂体腺、肾、肠、鳃和皮肤)在细胞壁的外侧上具有称为钙感应受体(casr)的受体类型。casr可能受到不同调节剂的影响，包括离子(诸如ca2+、mg2+、cl-、na+、h+)和游离氨基酸(诸如色氨酸)。刺激casr提供细胞的细胞内活性多样性的上调或下调。casr的受控刺激可以提供对应于银化过程的响应。
此种受控刺激的一个例子是
在不使用冬季信号和夏季信号(黑暗/光照)而是使用连续光照(24小时/日)直到向海水转移的时间的条件下，
在淡水生产和海水生产中，
但是，
技术实现要素：
因此，根据一个方面，本发明的目的是提供一种鱼饲料和消除或减少了
根据一个方面，本发明提供了一种方法，其中鱼可以被保持在淡水中直到收获大小。
根据一个方面，本发明提供一种鱼饲料，其包含蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质和水、10-100g/kg的nacl，具有1-10g/kg添加的多价阳离子受体调节剂(pvcr)(例如，色氨酸或苯丙氨酸)，进一步具有0.1-100g/kg添加的镁盐(mg2+)诸如mgcl2和/或0.1-100g/kg的钙盐(ca2+)例如cacl2。
附图说明
图1是在
具体实施方式
根据一个方面，本发明提供一种鱼饲料，其添加有根据下表1的盐(离子)和pvcr调节剂(游离氨基酸)。所指定的所有数值范围应被认为包括各种中间范围，就像明确提及了这些中间范围一样，例如范围1-10应被认为还包括1-9、1-8、1-7(等)；2-10、3-10、4-10(等)；1-9、2-8(等)。
表1
pvcr调节剂包括此处所提及的游离氨基酸，不论是单独使用或组合使用：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、丙氨酸、精氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、苏氨酸、缬氨酸和半胱氨酸，其浓度是1-10g/kg鱼饲料。
根据另一方面，鱼饲料可以包含上述附加成分的各种组合。此种组合的非限制性例子是：
1.na、cl、ca和mg
2.cl、ca、mg，
3.ca、mg，
4.ca、na、cl
5.ca、na、mg
6.ca、na
7.ca、cl
8.ca
9.mg、na、cl
10.cl、mg
11.mg
12.一种或多种游离氨基酸、na、cl和ca
13.一种或多种游离氨基酸、na、cl和mg
14.一种或多种游离氨基酸、na、ca、mg
15.一种或多种游离氨基酸、na、ca
16.一种或多种游离氨基酸、na、mg
17.一种或多种游离氨基酸、cl、ca、mg
18.一种或多种游离氨基酸、cl、mg
19.一种或多种游离氨基酸、cl、ca
20.一种或多种游离氨基酸、ca、mg、cl
21.一种或多种游离氨基酸、ca、mg
22.一种或多种游离氨基酸、ca
“鱼饲料”在此应理解为由蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质、颜料和水组成的饲料，其适合于淡水中的鲑鱼的幼鲑和二龄鲑。用于生长的这种饲料的组合物可以含有这些或部分这些原料：
蛋白源：
大豆蛋白浓缩液(例如spc65)、大豆蛋白质(例如hiprosoy)、豌豆蛋白粉、向日葵粉、小麦麸质、玉米麸质、马豆/蚕豆、芜菁粉、羽扇豆、家禽粉、肉骨粉、血粉、瓜尔豆粉、微生物蛋白质(来自不同底物的发酵)、海藻蛋白、一般的壳动物粉、磷虾粉、磷虾水解物、鱼水解物、鱼粉(来自nvg青鱼、鲭鱼、马鲭鱼、玉筋鱼、毛鳞鱼、凤尾鱼、鲱鱼等)。
碳水化合物源：
小麦或本领域已知的其它合适的碳水化合物源。
脂肪源：
鱼油(来自nvg青鱼、鲭鱼、马鲭鱼、羚羊、毛鳞鱼、凤尾鱼、鲱鱼等)、油菜籽油、亚麻籽油。
矿物质和维生素：
遵循用于淡水中鲑鱼的幼鲑和二龄鲑的当前营养建议添加。
颜料：
虾青素或本领域已知的其它颜料。
本领域技术人员熟悉这样的饲料和必要的组成，从而计算提供淡水中鲑鱼的幼鲑和二龄鲑的生长。
根据本发明的鱼饲料令人惊讶地能够：
●生产用于转移到海水中的溯河产卵鲑鱼的二龄鲑(10-150g)
●在淡水中维持溯河产卵鲑鱼的正常离子平衡和渗透调节，包括但不限于
o在淡水中防止鲑鱼的脱银化，
o预防和/或治疗溯河产卵鲑鱼的病症出血性二龄鲑综合征(hss)，
o预防和/或治疗造成鳞损失的鳞水肿。
●在淡水中生产用于转移到海水中的溯河产卵鲑鱼的后二龄鲑(>150g)。
·在淡水中生产溯河产卵鲑鱼直到用于消费的市场尺寸(>100克，最经常为5000g)
●在淡水中生产溯河产卵鲑鱼的亲本，相对于培养卵/鱼子。
根据一个方面，本发明包含在饲料中将饲料当量的
根据另一方面，本发明提供一种方法以：
●生产用于转移到海水中的溯河产卵鲑鱼的二龄鲑(10-150g)
●在淡水中维持溯河产卵鲑鱼的正常离子平衡和渗透调节，从而实现包括但不限于
o在淡水中防止鲑鱼的脱银化，
o预防、治愈或治疗溯河产卵鲑鱼的病症出血性二龄鲑综合征(hss)，
o预防、治愈或治疗造成壳损失的壳水肿。
●在淡水中生产用于转移到海水中的溯河产卵鲑鱼的后二龄鲑(>150g)。
●在淡水中生产溯河产卵鲑鱼直到用于消费的市场尺寸(>100克，最经常为5000g)
●在淡水中生产溯河产卵鲑鱼的亲本，相对于培养卵/鱼子。该方法包含实施下列步骤：
a.提供幼鲑或二龄鲑的鱼饲料，其包含蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质和水、10-100g/kg的nacl，具有1-10g/kg添加的多价阳离子受体调节剂(pvcr)(例如，色氨酸或苯丙氨酸)和0.1-100g/kg添加的钙盐(ca2+)例如cacl2和/或0.1-100g/kg的镁盐(mg2+)诸如mgcl2，
b.在处于淡水中或微咸水中时，根据食欲将饲料给予鱼直到发生银化，
c.在银化之后将鱼转移到海水中。
或者，在银化之后，可以将鱼保持在淡水中，在这种情况下所述方法在步骤a和b之后包含：：
d.在发生银化之后，将鱼保持在淡水中，
e.继续向鱼施用鱼饲料直到其在淡水中达到所需的重量并且适合于人类消费，或者直到其已经达到适合于引进性成熟的龄期/重量，这可以提供用于产生新鱼或用于消费的鱼卵。
将参照以下实施例进一步详细地描述本发明。
材料和方法
生物材料、环境条件和实验装置
利用大西洋鲑鱼(salmosalar)和虹鳟鱼(onchorhynchusmykiss)的物种进行了六场实地试验。这些鱼在开始时用油基疫苗接种，并在接种后恢复食欲。鱼在开始时的平均重量至少为40克，且最后在淡水中最多为180克。在2012和2013年在挪威和智利，试验饮食在正常生产条件下使用。仅在淡水中时，将试验饮食喂养至鱼，至少3周，最多11周。表2和表3显示了关于物种、阶段、照明条件、水温、鱼数、鱼的大小、试验饲料和实验装置的信息。
表2：实地试验(fieldtrial)、照明条件、水温和试验饮食类型的概述
表3：实地试验、照明条件、水温和试验饮食类型的概述
试验饮食的组成
鱼饲料在此理解为由蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质组成的饲料，其适合于淡水中鲑鱼的幼鲑和二龄鲑。
试验饮食1(相对于
a.添加了7％nacl的鱼饲料
b.添加了0,4％l-色氨酸的鱼饲料
试验饮食2(相应于根据本发明的鱼饲料的一个实施方式)：
a.添加了6％nacl的鱼饲料
b.添加了0,75％cacl2的鱼饲料
c.添加了0,25％mgcl2的鱼饲料
d.添加了0,4％l-色氨酸的鱼饲料
对照饮食：
a.由skrettingas生产的用于幼鲑和二龄鲑的生长饲料
b.由ewosas生产的用于幼鲑和二龄鲑的生长饲料
监测试验和对照饮食的效果的参数
在鱼接受试验饮食/对照饮食之前及紧接在将鱼转移到海水之前进行采样。另外，在初始采样和终点采样之间进行采样。
鳃组织中na+-k+-atpase酶活性
在鱼喂养试验饮食之前和在将鱼转移到海水之前进行取样。在初始样和终点采样之间也进行不同程度的采样。
在银化的过程中，观察到鳃组织中na+-k+-atpase酶的量增加是正常的。这种酶的主要功能是从鱼体内泵出盐，这是在海水中维持渗透平衡所必需的。将来自第二鳃弓的鳃组织转移到管中，然后立即在液氮中冷冻(-180℃)，以便随后在fishguardas,leknes(以前的multilabas)根据mcgormick(1993)描述的方法分析鳃酶的量。
α1amrna(淡水atpase)的拷贝数：
在鱼喂养试验饮食之前和在将鱼转移到海水之前进行取样。在初始样和终点采样之间也进行不同程度的采样。
α1amrna编码的酶的主要功能是从淡水中将盐泵入到鱼体内。适应海水中的生活意味着该酶活性必须降低，并且对于基因表达是类似的。在银化过程期间，鱼鳃中α1amrna的拷贝数减少。将来自第三鳃弓的鳃组织转移到具有mrna的管中，以便根据由fishguardas(2013)开发的方法分析α1amrna的拷贝数。
二龄鲑指数
通过银化过程，观察到鱼外观的改变(形态学变化)。这种变化是在二龄鲑指数评分的帮助下测量的并且基于每个参数(皮肤中的银色、幼鲑标记和黑鳍边缘)的1-4的视觉评分，参见表4。二龄鲑指数评分是所有这些三个参数的评分的平均值。在采用用于分析na+-k+-atpase酶的鳃组织的同时记录二龄鲑指数。
表4.二龄鲑指数评分的概述
海水试验中鱼血浆中的氯化物
当有机会进行海水试验时，鱼被取样转移到34‰海水中，并在银化过程期间在其中保持96小时。从鱼中采集血样并且根据挪威兽医科学学院中央实验室(2012)采用的方法分析氯离子(cl-)的含量。这是一种用于确定淡水中的鲑鱼是否银化的方法。如果鱼在海水中(在34‰海水中96小时后)具有正常的渗透压调节(血浆中的氯水平为120-150mmol/l)，这是鱼处于二龄鲑窗口中的标志。
淡水中鱼的血浆中的离子
通过两个实地试验，从淡水中的鱼中采集了血样以用于分析血浆中的ca、mg和cl。挪威兽医学院的中央实验室(2012)进行分析。
淡水和海水中的死亡率
在淡水中，记录在使用试验饲料和对照饲料期间的死亡百分比，直到鱼转移到海水中。观察在淡水中给予对照饲料的组相对于给予试验饲料的组在海水中的死亡率。登记30、60和90天后的死亡率，以及收获时的总死亡率(一个海农场)。
统计
部分材料被统计处理，以确定试验组中两个测量点之间的变化是否具有统计学显着性(p＝0.05和p＝0.01)。对对照组进行类似的检查。
结果
实地试验1
鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性
图表1示出了实地试验1中鳃组织中的na+-k+-atpase酶的发展，其中使用试验饮食1与对照饮食a进行比较，对照饮食a为由skrettingas生产的幼鱼用的生长饲料。结果是4个试验池塘(n＝24/采样)和4对照池塘(n＝24/采样)的采样结果的平均值。
图表1：在冬季信号后，喂养试验饮食1和对照饲料a的大西洋鲑鱼的鳃组织中平均na+-k+-atpase酶活性的发展(每组中n＝24/采样)
在19.03.12和12.04.12之间，对照组中的atpase(atp酶)具有显著变化(p＝0.05)，而试验组中的atpase没有显著变化(p＝0.05)。在26.04.12和09.05.12之间，对照组中在99％的置信水平内atpase有显著变化(p＝0.05和p＝0.01)，而试验组仅在95％的置信水平内atpase有显著变化(p＝0.05)。表5提供了该主题的概览。
表5：一个组中两个样品点之间的atpase变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在观察到的显著性方面没有此种差异。
α1amrna的拷贝数(淡水atpase)
没有带出用于分析α1amrna的拷贝数，淡水atp酶的样品。
二龄鲑指数
图表2显示了实地试验1中的二龄鲑指数的发展，其中将试验饮食1与对照饮食a进行比较，对照饮食a是由skrettingas生产的用于幼鱼的生长饲料。结果是从4个试验池塘(n＝24/采样)和4个对照池塘(n＝24/采样)取出的样品的平均值。在19.03.12和26.04.12之间，对照组中二龄鲑指数具有显著变化(p＝0.01)，而试验组的二龄鲑指数没有显著变化(p＝0.01)。在12.04.12和26.04.12之间，对照组中二龄鲑指数具有显著变化(p＝0.05和0.01)，而试验组的二龄鲑指数没有显著变化(p＝0.05和0.01)。表6提供了该主题的概览。
图表2：冬季信号后，喂养试验饮食1和对照饲料a的大西洋鲑鱼中二龄鲑指数的发展(每组中n＝24/采样)。
表6：一个组中两个样品点之间二龄鲑指数的变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在观察到的显著性方面没有这种差异。
海水挑战试验中鱼的血浆中的氯化物
图表3显示了在使用试验饮食1时实地试验1中血浆氯化物的发展，并且与对照饮食a进行比较，对照饮食a是由skrettingas生产的幼鱼用生长饲料。结果是取自2个试验池塘(n＝15/采样)和2个对照池塘(n＝15/采样)的样品的平均值。
图表3：冬季信号后在海水(34‰,96小时)中，喂养试验饮食1和对照饮食a的鱼中平均血浆氯化物的发展(各组中n＝15/采样)
淡水中鱼血浆中的离子
图表4和5显示了单一点测量11。2012年4月，在实地试验1中在淡水中的血浆镁、血浆钙和血浆氯化物，其中使用试验饮食1并且与对照饮食a进行比较。结果是试验池塘(n＝6)和对照池塘(n＝6)中患有出血性二龄鲑综合征(hss)的鱼的平均值。将其与来自对照组中的正常鱼的平均值(n＝6)、来自实地实验3的淡水中的正常鱼的平均值(n＝19)和来自文献(jakobsen,2013)的参考值进行比较。在文献中没有成功找到大西洋鲑鱼中正常血浆钙的参考值。
图表4：点测量11。2012年4月，在实地试验1中使用试验饮食1时的血浆镁和血浆钙，并且与对照饮食a比较。结果是试验池塘(n＝6)和对照池塘(n＝6)中患有出血性二龄鲑综合征(hss)的鱼的平均值。将这些值与来自对照组中的正常鱼的平均值(n＝6)、来自实地试验3的淡水中的正常鱼的平均值(n＝19)和来自文献(jakobsen,2013)的参考值进行比较。
图表5：点测量11。2012年4月，在实地试验1中使用试验饮食1时的血浆氯化物，并且与对照饮食a比较。结果是试验池塘(n＝6)和对照池塘(n＝6)中患有出血性二龄鲑综合征(hss)的鱼的平均值。将这些值与来自对照组中的正常鱼的平均值(n＝6)、来自实地试验3的淡水中的正常鱼的平均值(n＝19)和来自文献(jakobsen,2013)的参考值进行比较。
淡水死亡率
在淡水中实验期间的死亡率如图表6所示。2012年4月的最高死亡率约为10。鱼有经典的authposy发现，其与出血性二龄鲑综合征(hss)相容，包括苍白的鳃和苍白的内脏、在肌肉、腹部脂肪组织和内脏中的多种瘀斑出血(halse,2012)。
图表6：接受试验饮食1的组在淡水中的死亡率，与接受对照饮食a的组进行比较。增加的死亡率是由出血性二龄鲑综合征引起的(halse,2012)。
实地试验2
鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性
图表7显示了实地试验2中使用试验饮食2时鳃组织中na+-k+-atpase酶的发展，与由skrettingas生产的幼鱼用生长饲料的对照饮食a进行比较。结果是来自4笼在淡水中的测试组(n＝25/采样)和4笼淡水中的对照组(n＝25/采样)的采样的平均值。
图表7：冬季信号(12小时光照/12小时黑暗)后，接受试验饮食2和对照饮食a的虹鳟鱼鳃组织中平均na+-k+-atpase酶活性的发展(每组中n＝25/采样)。试验来自智利淡水湖中的笼子(4试验笼和4对照笼)。2012年9月12日至20日之间通过分级除去分娩前最小的鱼。
在采样点30.08.12和06.09.12之间，30.08.12和20.09.12之间、30.08.12和27.09.12之间，试验组中的atpase具有显著增加(p＝0.01)，而对照组在99％或95％置信区间，atpase不具有显著变化(p＝0.01和p＝0.05)。在06.09.12和12.09.12之间，与试验组相比晚一周，观察到了对照组在99％置区间内atpase上有显著增加(p＝0.01)。在12.09.12和20.09.12之间，对照组中atpase在99％置信区间内发生了显著下降，而试验组的atpase没有显著变化。表7提供了所述主题的概览。
表7：一个组中两个样品点之间的atpase变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后在对照组和试验组之间对它们进行比较。对照组和试验组中的采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面没有这种差异。
α1amrna的拷贝数(淡水atpase)
没有带出用于分析α1amrna，淡水atpase的拷贝数的样品。
二龄鲑指数
本试验中没有用于二龄鲑指数检查的采样。
海水挑战试验中鱼的血浆的氯化物
二龄鲑孵化场没有机会进行海水试验，没有取出样品。
淡水中鱼血浆中的离子
没有淡水中鱼血浆中的离子的样品
淡水和海水中的死亡率
淡水相中的死亡率正常。在海洋中60天后，在淡水中给予试验饮食2的鱼的死亡率为0.62％并且给予对照饮食a的鱼的死亡率为0.71％。
实地试验3
鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性
图表8显示了实地试验3中相比于对照饮食a使用试验饮食2时，鳃组织中na+-k+-atpase酶的平均发展。结果是来自3个试验组淡水池塘(n＝30/采样)和3个对照组淡水池塘(n＝30/采样)的采样的平均值。
图表8：当使用连续光照，接受试验饮食2和对照饮食a的大西洋鲑鱼的鳃组织中平均na+-k+-atpase酶活性的发展(每组中n＝30/采样)。试验来自淡水池塘，进行一式三份实验设置。
在采样点11.09.12和12.10.12之间，11.09.12和05.11.12之间，试验组中的atpase存在显著提高(p＝0.05)，而对照组中atpase在95％的置信区间内没有显著变化(p＝0.05)。在12.10.12和05.11.12之间，对照组中atpase在95％的置信区间内显著下降(p＝0.05)，而试验组不具有显著变化。表8提供了该主题的概览。
表8：在一个组内两个样品点之间的atpase变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。在对照组和试验组之间对这些进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面未显示出任何差异。
α1amrna(淡水atpase)的拷贝数
在平行测定1和平行测定2中，部分进行取样以分析α1amrna，淡水atp酶的拷贝数。图表9和10中显示了结果。平行测定1显示，试验饮食2在使用两周后得到441000-501000个α-1amrna(淡水atpase)拷贝。这明显低于极限值1186000个拷贝。对于对照饮食a，我们看到鱼表达了大量的α1amrna拷贝12.10.12，在此之后将表达下调到与试验饮食2相同的水平。
图表9：使用试验饮食2和对照饮食a在使用连续光照时，大西洋鲑鱼的鳃组织中平均α1amrna表达的发展(在每组中n＝30/采样)。丢失了第一次采样。第二次采样是01.10.2012。
在采样点01.10.12和12.10.12之间，对照组中所表达的α1amrna有显著增加(p＝0.05)，而试验组的α1amrna在95％的置信区间内没有显著变化(p＝0.05)。在01.10.12和06.12.12之间，对照组中α1amrna拷贝数在99％的置信区间内有显著下降(p＝0.01)，而试验组没有显著变化。在12.10.12和05.11.12之间(在95％的置信区间内)、在12.10.12和06.12.12之间以及在05.11.12和06.12.12之间，这同样适用。试验组在采样点之间未显示出任何类似的变化。表9提供了该主题的概览。
表9：在一个组内的α1amrna拷贝数在两个样品点之间变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后在对照组和试验组之间对这些进行比较。对照组和试验组中的采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面未显示出任何差异。
平行测定2显示，从使用的第二周(01.10.12)开始，对照饲料给出了1517000至786000个α1amrna(淡水atpase)拷贝。对于前三个采样，这高于海水耐受性的极限值(设置为1186000个拷贝)，而最后的采样低于该极限值。对于试验饮食2，我们看到鱼表达低拷贝数的α1amrna，05.11.12和06.12.12，在413000和396000个拷贝之间。图表10提供了所述结果的概览。
图表10：使用连续光照且喂养试验饮食2和对照饮食a的大西洋鲑鱼鳃组织中平均α1amrna表达的发展(每组中n＝30/采样)。两个组都缺失了第一采样点，并且试验组缺失了第二和第三采样点。
在采样点12.10.12和06.12.12之间，对照组中的α1amrna拷贝数的表达存在显著下降(p＝0.01)。在05.11.12和06.12.12之间，对照组中的α1amrna拷贝数在95％的置信区间内没有显著下降(p＝0.01)，试验组中也没有显著下降。表10提供了该主题的概览。
表10：一个组中两个样品点的α1amrna的拷贝数变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后在对照组和试验组之间对这些进行比较。
与水温相关的α1amrna(淡水atpase)的拷贝数
起因于试验组和对照组的α1amrna与淡水温度相关。图表11显示了低于海水耐受性的极限值(1186000个α1amrna拷贝)的这些样品所占的百分比。该图表还示出了在同一时期的水温。在8.1和8.9℃之间的水温下，试验组中样品值的90和100％低于海水耐受性的极限值。在整个银化过程中这一占比是稳定的，与水温稳定的方式一样。对照组中相应的值在20％和100％之间，并且在观察期的起始观察到了最低的占比。
图表11：使用连续光照时鳃组织中低于α1amrna表达拷贝值低于1186000的样品的比例。该图表与水温相关，并且其是喂养试验饮食2和对照饮食a的大西洋鲑鱼(每个组中n＝8-10/采样，两个试验组/对照组)。
二龄鲑指数
图表12显示了在实地试验3中与对照饮食a相比使用试验饮食2时二龄鲑指数的发展，对照饮食a是skrettingas生产的幼鱼用的生长饲料。结果是来自试验组中3个池塘(n＝30/采样)和对照组中的3个池塘(n＝30/采样)的采样的平均值。
图表12：通过连续光照，接受试验饮食2和对照饮食a的鱼中平均二龄鲑指数的发展(每组/样品点中，n＝30/采样)。该试验来自于淡水中的池塘，一式三份实验装置。
在11.09.12和01.10.12之间，试验组中的二龄鲑指数增加显著(p＝0.01)，而对照组的二龄鲑指数不存在显著变化(p＝0.05)。在01.10.12和12.10.12之间，对照组中的二龄鲑指数增加显著(p＝0.05)，而试验组的二龄鲑指数具有显著地强劲增加(p＝0.01)。在12.10.12和06.12.12之间，对照组中的二龄鲑指数增加显著(p＝0.01)，而试验组中的二龄鲑指数不具有显著变化(p＝0.05)。表11提供了该主题的概览。
表11：一个组两个样品点之间的二龄鲑指数变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后在对照组和试验组之间对这些进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面没有这种差异。
海水挑战试验中鱼中的血浆氯化物
图表13和14显示了在海水暴露之前的11周中使用试验饮食2时，实地试验3中将鱼暴露于34‰海水中144小时之后血浆氯化物的状态，其与对照饮食a进行比较。结果是来自试验组中3个池塘(n＝30/采样)和对照组中3个池塘(n＝20/采样)的采样的平均值。对照组中血浆氯化物的平均值为139.6mmol/l，而试验组的血浆氯化物的平均值为139.0mmol/l。
图表13：大西洋鲑鱼的散点图，其显示了在11周内接受试验饮食2和对照饮食a的鱼暴露于海水(34‰,144小时)后的血浆氯化物(mmol/l)，其与重量(g)相关。采样材料对于试验组是n＝30，且对于对照组为n＝20。
图表14：在淡水中以试验饮食2和对照饮食a喂养11周的大西洋鲑鱼暴露于海水中(34‰,144小时)之后，鱼中的血浆氯化物(mmol/l)。采样材料对于试验组为n＝30，且对于对照组n＝20。显示了淡水血浆氯化物的参考值(n＝17/试验且n＝19/对照)。
淡水和海水中鱼血浆中的其它离子
在实地试验3中未观察到出血性二龄鲑。图表15显示了淡水和海水中鲑鱼血浆中镁和钙的平均水平。
图表15：在淡水中喂养11周试验饮食2和对照饮食a的大西洋鲑鱼在暴露于海水(34‰,144小时)后，鱼血浆中的镁和钙(mmol/l)。采样材料对于试验组为n＝30，并且对于对照组为n＝20。还显示了淡水的值(n＝17/试验和n＝19/对照)。
淡水和海水中的死亡率
没有观察到异常死亡率。在海水中144个小时后，鱼被摧毁。
实地试验4
鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性
图表16显示了实地试验4中鳃组织中的na+-k+-atpase酶的发展，其中使用试验饮食2与由ewosas生产的作为幼鱼用生长饲料的对照饮食b进行比较。结果是来自试验组淡水笼(n＝20/采样)以及对照组淡水笼(n＝20/采样)的采样材料的平均值。该实验是在自然光条件下进行的，主要是秋分之后。
图表16：相对于对照饮食b，在自然光条件下，以试验饮食2喂养的大西洋鲑鱼的鳃组织中平均na+-k+-atpase酶活性的发展(每组中n＝20/采样点)。
在10.09.12和01.10.12之间，试验组中了在atpase的显著变化(p＝0.01)，而对照组的atpase在同一期间没有显著变化(p＝0.05)。在10.09.12和15.10.12之间，试验组中的atpase在99％的置信区间存在显著变化(p＝0.01)，而对照组的atpase在95％的置信区间不具有显著变化(p＝0.05)。表12提供了该主题的概览。
表12：一个组中两个样品点之间的atpase变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中的采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面不具有这种差异。
α1amrna(淡水atpase)的拷贝数
进行采样以用于分析α1amrna，淡水atpase的拷贝数。结果示于图表17中。其显示，与对照饮食b相比，试验饮食2得到了降低表达的淡水atpase。对于试验饮食2，我们看到α1amrna的拷贝数从259万减少到了67万，明显低于1186000个拷贝的极限值。采样点之间的差异在99％的置信区间内是显著的(p＝0.01)。对照饮食b的使用稍微降低了拷贝数，从259成降低到最后采样点的257万。采样点之间的下降不显著。表13提供了该主题的概览。
图表17：相对于对照饮食b，在自然光条件下，以试验饮食2喂养的大西洋鲑鱼的鳃组织中的平均α1amrna表达的发展(每组中n＝14/采样点)。
表13：一个组中的α1amrna的拷贝数在两个样品点之间变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。
二龄鲑指数
图表18显示了与对照饮食b相比，使用试验饮食2时实地试验4中二龄鲑指数的发展。结果是来自试验组中的笼(n＝20/采样)和对照组中笼(n＝20/采样)的采样材料的平均值。
图表18：相对于对照饮食b，在自然光条件下，以试验饮食2喂养的大西洋鲑鱼的平均二龄鲑指数的发展(每组中n＝20/采样点)。
在10.09.12和15.10.12之间，试验组中的二龄鲑指数存在显著增加(p＝0.05)，而对照组的二龄鲑指数在同一期间不存在显著变化(p＝0.05)。表14提供了该主题的概览。
表14：一个组中的二龄鲑指数在两个样点之间变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中的采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面不存在这种差异。
海水挑战试验中鱼血浆中的氯化物
在本实地试验中未进行任何海水挑战试验。
淡水中鱼血浆中的离子
没有带来用于分析血浆中离子的任何样品，同时鱼留在淡水中。
淡水和海水中的死亡率
未观察到淡水中的异常死亡率。已经接受了试验饮食2的鱼先前通过剪切的脂肪鳍进行了标记。这种鱼被转移到海中的同一个笼子中，作为一个光操纵组(不同于淡水对照组)。从鱼的宰杀中观察到了0.08％的死亡率。在暴露于海水后立即发生死亡率。
实地试验5
鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性
图表19显示了实地试验5中使用试验饮食2时鳃组织中na+-k+-atpase酶的发展，与由ewosas生产的幼鱼用的生长饲料对照饮食b进行比较。结果是来自试验组中的3个池塘和对照组中2个池塘的采样材料的平均值。表15中可以看到每次采样的池塘数和鱼数。
图表19：在冬季信号，喂养试验饮食2和对照饮食b的大西洋鲑鱼鳃组织中na+-k+-atpase酶的平均发展。每个采样点的样品数列于表14中。
表15：实地试验5中，每个采样点的池塘数和鱼数的概览。
在09.10.12和31.10.12之间，试验组中的atpase的增加显著性更高(p＝0.01)，而对照组的atpase的增加显著性较低(p＝0.05)。采样点20.11.12和04.12.12之间也是类似的。在20.11.12和04.12.12之间，对照组中的atpase在95％的置信区间内存在显著增加(p＝0.05)，而试验组的atpase在95％的置信区间内不存在显著增加(p＝0.05)。在04.12.12和18.12.12之间，两个组具有十分相似的p值(p＝0.01)，但是仅对照组在99％的置信区间内存在atpase的显著增加。试验组的两个采样点之间在95％的置信区间内具有显著增加(p＝0.05)。另外，我们看到试验组的atpase在12.12.12和18.12.12之间具有显著增加(p＝0.01)，而对照组在95及99％的置信区间内均不存在显著增加(p＝0.05和0.01)。表16提供了该主题的概览。
表16：一个组中两个样品点之间的atpase变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面不存在此种差异。
每个平行测定中鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性
图表20显示了与对照饮食b相比，平行测定1在使用试验饮食2时鳃组织中na+-k+-atpase酶活性的发展。
图表20：在冬季信号后，喂养试验饮食2和对照饮食b的大西洋鲑鱼鳃组织中的平均na+-k+-atpase酶活性的发展。
在09.10.12和31.10.12之间，试验组中的atpase存在显著增加(p＝0.01)，而对照组中的atpase仅在95％的置信区间内存在显著增加(p＝0.05)。在采样点31.10.12和27.11.12之间以及在20.11.12和27.11.12之间，试验组中在99％的置信区间内存在显著增加，而对照组不存在任何显著增加。表17提供了该主题的概览。
表17：atpase在一个组中两个样品点之间的变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较不存在此种显著性。
图表21显示了与对照饮食b相比，平行测定2a中在使用试验饮食2时鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性的发展。
图表21：在冬季信号后，喂养试验饮食2和对照饮食b的大西洋鲑鱼的鳃组织中的平均na+-k+-atpase酶活性的发展。
在09.10.12和31.10.12之间，试验组中的atpase存在显著增加(p＝0.05)，而对照组的atpase不具有显著增加(p＝0.05)。采样点20.11.12和04.12.12之间也类似。表18提供了该主题的概览。
表18：atpase在一个组中两个样品点之间的变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面没有显示出此种差异。
图表22显示了与对照饮食b相比，平行测定2b在使用试验饮食2时鳃组织中na+-k+-atpase酶活性的发展。
图表22：冬季信号后，喂养试验饮食2和对照饮食b的大西洋鲑鱼中鳃组织中的平均na+-k+-atpase酶活性的发展。
在20.11.12和18.12.12之间，试验组中的atpase在99％的置信区间内具有显著增加(p＝0.01)，而对照组中的atpase在95％的置信区间内具有显著增加(p＝0.05)。对于采样点12.12.12和18.12.12，试验组在95％的置信区间内具有显著增加(p＝0.05)，而对照组不具有显著增加(p＝0.05)。表19提供了该主题的概览。
表19：atpase在一个组中两个样品点之间的变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面没有显示出此种差异。
与水温相关的α1amrna(淡水atpase)的拷贝数
仅在接受了试验饮食2的试验组中进行采样。分析α1amrna(淡水atpase)的拷贝数。图表23显示了低于海水耐受性的极限值(1186000个α1amrna拷贝)的样品点比。图表还显示了同一时期的水温。在头两周，水温高于6℃。喂养2周后，83和100％的样品低于海水耐受性的极限。通过银化过程进一步降低了这一占比，与降低的水温一致。
图表23：在冬季信号后，鳃组织中的表达值低于1186000个α1amrna拷贝的观察的占比。该图表与水温相关，其是喂养了试验饮食2和对照饮食b的大西洋鲑鱼(三个试验组中的每个组中n＝6-10/采样)。
二龄鲑指数
图表24显示了实地试验5中使用试验饮食2时二龄鲑指数的发展，将其与对照饮食b进行比较。结果是试验组中的3个池塘和对照组中的2个池塘的采样的平均值。表14给出了每个采样点的池塘数和鱼数的概览。
图表24：冬季信号后，使用试验饮食2和对照饮食b时大西洋鲑鱼的平均二龄鲑指数的发展。参照表14，其给出了每个采样点的样品数。
在20.11.12和12.12.12之间，对照组中的二龄鲑指数在99％的置信区间内具有显著增加(p＝0.01)，而试验组的二龄鲑指数在同一期间在95％的置信区间内具有显著增加(p＝0.05)。在04.12.12和12.12.12之间，对照组中的二龄鲑指数在99％的置信区间内具有显著增加(p＝0.01)，而试验组的二龄鲑指数在95％的置信区间内不具有显著增加(p＝0.05)。表20提供了该主题的概览。
表20：在一个组中的二龄鲑指数在两个样品点之间的变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。然后将它们在对照组和试验组之间进行比较。对照组和试验组中采样点之间的其它比较在所观察到的显著性方面没有显示出此种差异。
海水挑战试验中鱼血浆的氯化物
在这一试验中，未进行海水挑战试验。
淡水中鱼血浆中的离子
在这一试验中，不存在用于分析血浆中离子的有样。
淡水和海水中的死亡率
在淡水中没有观察到任何异常死亡率。同时，未观察到患有疾病hss的鱼。对于可以追溯到海水中试验饮食和对照饮食的池塘，表21中列出了海水生产的死亡率概览。
表21：对于大淡水中的部分试验材料，在转移后在海水中的死亡率概览
实地试验6
鳃组织中的na+-k+-atpase酶活性
图表25显示了与对照饮食b相比，实地试验6中使用试验饮食2时鳃组织中na+-k+-atpase酶的发展，对照饮食b是ewosas生产的幼鳃用生长饲料。结果是来自试验组淡水中一个笼(n＝20/采样)及对照组淡水中一个笼(n＝20/采样)的采样的平均值。该试验是两种生产方法的比较，试验组中的鱼连接接受光照和试验饮食2，而对照组中的鱼接受经典光操纵(首先冬季信号，随后夏季信号)与对照饮食b(常规生长饮料)的组合。
图表25：大西洋鲑鱼的鳃组织中的平均na+-k+-atpase酶活性的比较。试验组连接的接受光照和试验饮食2，而对照组接受经典的光操纵和对照饮食b(每组中n＝20/采样点)。
试验组中最高测量的平均atpase值比对照组提前约5周到来。试验组在接受试验饮食2两周之后，得到atpase的显著增加(p＝0.01)。对照组在接受夏季信号6周后，以atpase6的显著增加(p＝0.01)进行回应。表22提供了概览。
表22：在一个组中两个样品点之间的atpase的变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。
α1amrna(淡水atpase)的拷贝数
进行用于分析α1amrna(淡水atpase)的拷贝数的采样。结果显示于图表26中。其显示，与对照饮食b和经典光操纵相比，试验饮食2与连续光照的组合提供了淡水atpase的更低表达。对于试验饮食2，我们看到α1amrna的拷贝数从初次采样的607万降低至了最后一次采样的75万，明显的低于海水耐受性的极限值1186万个拷贝。试验组中采样点之间的差异在99％的置信区间内是显著的(p＝0.01)，并且与atpase酶活性的增加一致。
对照饮食b的使用使得拷贝数从初次采样的249万提高到了最后一次采样的298万。最低的平均值记载在23.10.13，为176万个拷贝，与atpase酶活性的显著增加一致。26.08.13和23.10.13之间的下降处于99％的置信区间内(p＝0.01)，而从12.09.13(其为夏季信号的开始)于23.10.13的下降不显著(p＝0.05)。表23提供了该主题的概览。
图表26：大西洋鲑鱼的鳃组织中的平均α1amrna表达的发展。试验组连续地接受光照和试验饮食2，而对照组接受经典光操纵和对照饮食b。对照组从12.09.13开始接受夏季信号(每组中n＝20/采样点)。
表23：一个组中在两个样点之间的α1amrna拷贝数变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。
二龄鲑指数
图表27显示了实地试验6中二龄鲑指数的发展。结果是来自试验组淡水中的一个笼(n＝20/采样)与对照组淡水中一个笼(n＝20/采样)的采样的平均值。
图表27：大西洋鲑鱼中平均二龄鲑指数的比较。试验组接受连续光照和试验饮食2，而对照组接受经典光操纵和对照饮食b(每组中n＝20/采样点)。
试验组和对照组中的二龄鲑指数采样点26.08.13和23.09.13之间在99％的置信区间内具有显著增加(p＝0.01)。在23.09.13之后将试验组转移到海水中，而对照组在试验组之后的五周被转移到海水中。在此期间，在对照组中的多个采样点之间观察到了二龄鲑指数的多个显著增加。表24提供了该主题的概览。
表24：在一个组中的二龄鲑指数在两个样品点之间的变化显著(p＝0.05或p＝0.01)。
海水挑战试验中鱼血浆中的氯化物
在本试验中，未进行海水挑战试验。
淡水中鱼血浆中的离子
在本试验中，不存在用于分析血浆中离子的采样。
淡水和海水中的死亡率
在淡水中没有观察到任何异常死亡率。也没有观察到患有疾病hss的鱼。表25给出了海水生产的死亡率概览。
表25：从淡水转移到海水中的死亡率概览。
讨论
银化过程的方法选择和评价
在评估本发明的鱼饲料和方法的有效性方面，已经应用了一种与用来评价
在所述六个实地试验的三个中，将试验饲料与传统光操纵组合使用。在这些情况下，我们必须假设鱼具有对应于正常银化过程的内分泌活性。对于其余的试验，在秋季昼夜之后使用连续光照或自然光照，两种条件均代表了获得令人满意的银化过程的挑战以及转移到海水后的正常渗透调节、存活和生长的能力。
涉及使用试验饮食2使用术语“银化”时，这意味着在实验材料中的内分泌活动没有检查，但倾向于传统的二龄鲑参数的变化。因此，该工作的性质对于二龄鲑生产中的银化是一种实用的方法，而不只在于完整调查与实际银化过程相关的生理因素。
与经典光操纵相比，试验饮食1和2对银化过程的影响
在实地试验1中，使用了试验饮食1与普通照片操作的组合，而在实地试验2和5中，使用试验饮食2与普通光操纵的组合。
实地试验1：
试验饮食1未得到na+-k+-atpase酶活性的显著增加，并且对照组中类似。对于二龄鲑指数的增加也观察到了相似的结果。在35‰的海水中进行96小时的海水挑战试验后，没有观察到血浆氯化物的显着变化。对照组和试验组均在血浆氯化物的正常范围120-150mmol/l内。然而，与对照组相比，观察到接受试验饮食1的鱼在银化期间与疾病hss相关的死亡率平均而言高出20倍。对于这一尺寸的鱼，在水温3-5℃下进行的试验应当提供每日0.2-0.4％的平均膳食摄入量(skretting饲料表，2009)。
然而，饲料摄入量足够大以观察试验组中死亡率的增加，并且随着水温的升高，饲料摄入的增加应该不太可能有益于试验组的存活。总的来说，这些观察结果为论证单独的测试饲料1不是用于刺激鲑鱼中银化过程的合适饮食提供了基础。试验饮食1是用于
实地试验5：
试验饮食2用于实地试验5中。在这一实验中，在银化过程的前两周的水温为8-6℃(在给予夏季信号后)，然后水温首先降低到4℃，再3℃。温度下降被被认为是环境信号，这阻碍了银化过程。降低水温导致了饲料摄入的下降，但看起来，具有最高水温和相对较高试验饮食2摄入的前两周对于银化过程如何运行十分关键。在银化过程的早期，与对照组(显著性处于95％的置信区间内)相比，在接受试验饮食2(显著性处于99％的置信区间内)的鱼中，采样点之间的atpase酶活性的增加明显更强。二龄鲑指数未显示出有利于试验饮食2的相应增加。二龄鲑指数评分在某种程度上是主观评价的，并且可能包括在主要孵化场的不同采样者之间的评分的变化。每组中银化期间后期的样品材料也是有限的(n＝10)。很少将二龄鲑指数用来决定向海水中转移的时间，而更多是银化过程中的附加参数。
由于接受试验饮食2的鱼满足二龄鲑状态，平行测定1和2a中的试验组比对照组分别早3周和2周转移到海水中。平行测定2b中的试验组与对照组同时转移。但是，基于atpase值，试验组向海水中的转移可以比对照鱼早4周。
值低于1186万拷贝的试验组中α1amrna(淡水atpase)的占比百分比从开始到第二采样点增加显著(约2周)(图表23)。这期间的水温为6℃。随着水温的降低，α1amrna(淡水atpase)低于1186万拷贝的鱼的占比百分比也下降。这种观察可与鱼的饲料摄入直接相关，因为降低的水温将降低饲料摄入量。同时，我们看到，与对照组相比，试验饮食2在测试组中给出了鱼的额外刺激，显示为atpase酶生产中的额外促进。
在实际养殖中，相对于在冬季之前在海中达到令人满意的鱼大小而言，晚秋季转移可能是有问题的。这种鱼比秋季早期来到海里的鱼更容易出现冬季伤口。早秋转移允许在更大程度上在秋季早期利用更高的海水温度，以及获得更高的生长速率和减少从转移到屠宰的生产时间。与下降的淡水温度和银化过程中的困难相关的晚秋转移在二龄鲑生产中很常见。在秋季中下降低的水温上，试验饮食2是实现较早转移时间的工具。
分别在转移后30、60和90天的海水中的死亡率对于试验组和对照组都是令人满意的。然而，已经在淡水中给予试验饮食2的鱼比对照组具有更低的死亡率。在海水中的时间越长，发生的死亡率百分比差越大。二龄鲑状态对于海水中的生存有影响，并且存在增加的与不良的渗透调节能力相关的次生问题的风险。另外，这些结果支持了试验饮食2使用安全，不会对生产造成负面干扰。
实地试验2:
实地试验2在虹鳟上进行。这种鱼在冬季在南半球(春季之前)使用自然光接收冬季信号。此后接受充当夏季信号的额外光照。试验饮食2在夏季信号期间被用作额外的刺激。在虹鳟鱼中谈论银化过程并不常见，但事实是，虹鳟鱼在转移到海水中时必须以与鲑鱼相同的生理反应做出反应。在将鱼转移到海水之前在淡水中的预适应，似乎是一个用以减少虹鳟的渗透压调节的明智策略。与对照组相比，试验组显示了atpase酶活性的更早的显著增加。
孵化场有一个程序，其在交付到海之前分级出一个鱼群中最小的鱼。这种做法强调鱼并导致atpase酶活性下降，从而确认了以前的经验。试验组和对照组都在应激后以atp酶量的数值减少作出反应。然而，只有对照组具有atpase的下降，其在99％的置信区间内是显著的。测试组中atpase酶活性的下降不显著。在转移到海水之前的最后一周，对照组中的atpase的增加不显著，但可以考虑为应激后的可能恢复。
虹鳟鱼在转移到大海之后的第一时间进行消瘦(针头)。这种鱼可以在海水中长期存活，但吃得不好且不能正常生长。它们不容易从笼子中取出；通常他们随着生产一路到收获时间。然后所有的鱼被计数，并且显示出针头问题的实数。这种疾病状况尚未完全了解。然而，假定在海水中的差的渗透调节是主要因素。在该实地试验中，转移到海水中60天后的死亡率在试验组和对照组中都是令人满意的，但是在试验组中观察到了最低的死亡率。
与传统的生产方法相比，实验试验2表明，试验饮食2是一种用于更好地便虹鳟鱼预适应在海水中的生活的工具。
未使用光操纵时试验饮食2对银化过程的影响以及试验饮食2对脱银化的影响
实地试验3、4和6是在银化过程中未使用光操纵时进行的实验。
实地试验3
在实地试验3中，将置于在孵化场外面的洔中的鱼连续暴露于人工光照中。然后将鱼移动到室内，并继续接受人工光照24小时/天。当鱼在室内时进行实验。连续光通常不足以实现令人满意的银化过程，但已知这种条件结合高水温(>8℃)能够在鳃中给鱼提供高的atpase酶活性。这样的鱼可以在海水中可以进行正常的渗透调节。然而，这些鱼群通常在群体内表现出不均匀的二龄鲑状况，不适合转移到海中。
可能很重要的一个方面是，鱼在八月和九月在黑暗的夜空下引人注目。这可能被认为是一个冬季信号，尽管与夜空的黑暗相比，在池塘中供应了相对适量的来自人工添加的光的光照。当转移到室内孵化场并连续供给没有变化的稳定的光条件时，已经感知的刺激被认为是鱼的夏季信号。同样地，其有助于银化过程。无论光照条件如何，合理确定的是，与二龄鲑的光管理的标准相比，这种鱼已经得到了一个次优的光管理方案。
与对照组相比，试验饮食2提供了更早且更高的atpase酶活性。这在整个11周的实验期间是有效的。在银化过程早期(第一和第三采样点之间)测试组有显著增加，而对照组中唯一显著的变化是第三和第四采样点之间的atpase的下降。对于试验饮食2，有相应的atpase反应作为在实地试验2和5中观察到的反应。
另外，我们看到了试验组中的二龄鲑指数在第一和第二采样点之间的显著增加，而对照组不具有任何显著变化。在第二和第三采样点之间，与对照组(在95％的置信区间内)，试验组中具有更强烈的显著增加(在99％的置信区间内)。在这种情况下，试验组中的二龄鲑指数的增加比对照组出现的更早并且与atpase酶活性的增加一致。在每个采样时间(除了第一次采样外)由同一人进行二龄鲑指数的评估，并且数据材料比实地试验5中的大3倍(n＝30相比于n＝10)。当与缺失有效的试验饮食2相比，这强调了试验饮食2显著对实地试验5中的二龄鲑指数具有明显的影响。
在用于分析α1amrna(淡水atpase)的拷贝数的材料中，我们看到了与对照组相比，数量低于1186万拷贝的试验占比在整个11周的实验期间几乎是稳定的(图表11)。不幸的是，在实验中没有启动采样，但平行测定2的第二次采样表明了在试验开始之前的拷贝数量很高。与水温降低到低于6℃的实地试验5相比，此处我们使水温保持稳定在8.3-8.9℃。水温对于饲料摄入量具有影响，并且在8℃的饲料摄入量是稳定的，这在实地试验5中并未实现。有理由假设，具有值低于1186万个α1amrna拷贝(海水耐受性的极限值)的样品的稳定百分比占比具有重要意义。这个结果似乎与试验饮食2的摄入量直接相关，并且不能通过使用常见的生长饲料来实现。这说明其可以将鱼保持在二龄鲑窗口，同时在淡水中保持较长的时间。这实际的二龄鲑生产中具有具体应用，其事实是鱼不脱银化，随后是池塘中整个鱼群中同步的二龄鲑状态。这方面对海水中的生长和生存有重要意义，但也提供了二龄鲑向海水中的灵活转移时间。给定适合的水温、水环境和良好的鱼健康，其在淡水中可能提供后二龄鲑(1-2kg)以用于递送到海洋设施中或用于在淡水中生产鲑鱼直到收获大小(>2kg)。
我们看到通过实验期间的对照组在淡水atpase具有显着增加和减少，而试验组不具有任何显著变化。这可以是由于以下事实引起的，即平行测定1和2中缺失用于这种分析类型的第一采样点，并且试验饮食2将鱼保持在较低水平的淡水atpase(图表9和10)下。然而，对照组在实验的第11周后，对照组中的淡水atpase的水平被降低到与试验组相同的水平。这可能是因为鱼已经进入了银化过程，银化过程从鱼被移入到孵化场室入时起(假设的夏季信号开始)约654天。正常地，鱼在夏季信号的350天后达到二龄鲑窗口。将atpase酶活性与同一时期的淡水atpase进行比较，我们看到对照组中的atpase酶活性为7.7，而试验组在最后一样采样时为9.2。对照组的水平指示了脱银化，或者鱼被暴露于负面环境影响并且在这种情况下，atpase酶活性的显著下降是觉常见的。相反，淡水atpase水平不支持脱银化。atpase酶活性下降的最可能的原因是应激子。此种应激子在小的试验池塘中可能具有高密度。这与实地试验2分级虹鳟鱼时观察到的类似，其中鱼被喂养试验饮食2，与对照组相比，尽管添加了应激子，仍维持了更高的atpase。
在实地试验3中，鱼未被转移到海水中以进行进一步生产。然而，在鱼群破坏前进行海水挑战试验。这一试验显示了对照组和试验组中令人满意的血浆氯化物水平(120-150mmol/l)(图表14)。我们看到，来自对照组的材料中的趋势在很大程度上表明，鱼的大小积极地影响血浆中的氯化物的水平，与在试验组中观察到的形成对比(图表13)。这个观察支持了试验饮食2增强了鱼在海水中的渗透调节能力。
实地试验4
实地试验4在秋季后下降的水温和下降的日长下进行。鱼在一天中接受比光照暴露更长的黑暗，并明在试验期间每天的黑暗比例在增加。水温和降低的日长对于银化过程均是负面信号。在喂养试验饮食2的鱼中的atpase酶活性在99％的置信区间内具有显著增加，而对照组的atpase酶活性不具有任何显著变化。对于试验饮食2，这些发现与实地试验3中观察到的类似。
喂养试验饮食2的鱼的二龄鲑指数在第一采样和最后一次采样之间具有显著增加，而对照鱼在同一期间的二龄鲑指数未改变。对于试验饮食2，实地试验3中观察到了类似的响应。
对于试验饮食2，α1amrna(淡水atpase)的样品分析显示，在采样点之间在99％的置信区间具有显著增加。在对照组中观察到了这种下降。试验组中的第二采样(起始后的约2周)低于海水耐水性的极限值(为1186万个淡水atpase拷贝)。在实地试验3以及实地试验5中观察到了这种响应。
当转移到海水中时，整个生产的死亡率非常低，直到收获。
总的来说，这个实验表明，试验饮食2在普通生产中使用是安全的，并且其显示了对银化的作用，尽管没有常见的银化信号。在实际的养殖中，鱼将接受时常不完整的银化信号(缺少/不完整的冬季信号和夏季信号)，并且在这种情形下，试验饮食2可以用来补偿这一点。
实地试验6:
现场试验6是针对比较两种不同的生产方法进行的，连续光与试验饮食2的组合相比于传统照相操作和普通生长饲料。这种生产发生在露天，在在淡水中笼子中。测试组中的鱼连续接收光照。此外，银化过程是在秋分之前结束。因此，鱼获得比夜晚更长的白天。对照组中的鱼接受自然光条件直到2012年9月12日，并且期间的夜间黑暗充当冬季信号。当暴露于人工光照时，这在鱼中将被感知为夏季信号。这个实验的主要目的是评估，与可能的照片操作相比，是否可能在较早阶段将鱼转移到海水中。此外，检测试验饮食2对银化的影响以及鱼在转移到海水中之后的存活。
实验显示，试验饮食2在这种情况下能够执行二龄鲑向海水中的转移，比光操纵的二龄鲑生产提供5周。其主要原因是鱼不会得到冬季信号，因此可以保持正常的饲料摄入量。因此，鱼比接收冬季信号的鱼更早达到接种疫苗大小。这个二龄鲑厂不能给予人工冬季信号，因为它在淡水湖外面的笼子里。二龄鲑厂必须等待足够的天数以在夜间给予黑暗(在八月和九月)，并且在冬季信号后，银化过程中的人工夏季信号将被调整。在试验组中的第一和第二采样之间，atpase酶活性在99％的置信区间内具有显著增加，而对照组的atpase在同一期间不具有任何显著变化(图表25)。对于试验包含2，这是在实地试验3和4中观察到的类似响应。
二龄鲑指数在本实验的试验组和对照组中具有相同的发展。这可以是由于试验组和对照组接受了比实地试验3、4和5中更比的自然日光引起的。已知光强度影响二龄鲑指数的程度。明亮的光比昏暗的光导致更高的二龄鲑指数。
对于试验包含2，α1amrna(淡水atpase)的样品分析显示，在采样点之间在99％的置信区间内具有显著增加。这种下降在对照组中也发生在第一次和第二次取样之间，但是测试组的下降在数值上大于对照组。试验组中第一采样和第二采样之间的这种下降从607万个拷贝到148万个拷贝。可比较的，对照组从250万降低到223万个拷贝。在第二和第三采样点之间，对照组中不具有显著改变，但是试验组继续降低到75万个拷贝。试验组中的这种改变与实地试验3、4和5中观察到的相对应，但是与其它相比有些稍微延迟。这可以是由于试验组中开始时观察到的高数量的α1amrna拷贝引起的，其需要更长的时间来下调这种表达。当转移至海水中时，对照组未达到海水耐受极限值(1186万个α1amrna拷贝)之下。已知的是，光操纵鱼中atpase酶活性和α1amrna之间的相关性开成u形曲线。从atpase1-9，mrna拷贝数减少，而从atpase9-22，出现越来越多的mrna拷贝数。可能的是，鱼在atpase的9-20之间的区域中以双重策略操作，并且管理淡水中的脱银化和在海水中的生活。这些导致在取样时难以找到淡水atpase的底部水平并且在本实验中也可能是这种情况。同时，我们看到，鱼的atpase酶水平不超过8,29，并且这表明在转移时其还没有准备好接近海水。然而，对照组在海水中显示出良好的存活和生长。然后，能够相信的是，atpase酶活性被应激子抑制并且当转移到海水中时被“释放”。
喂养试验饮食2的鱼在海水中的前8个月的死亡率非常低，死亡率为0.36％。
总体而言，这一实验显示，试验饮食2在正常生产中使用是安全的，并且鱼可以在不使用照片操作而只借助试验饮食2的情况下银化。然而，与组合使用了连续光照的
大西洋鲑鱼中与出血性二龄鲑综合征(hss)相关的生理评估、以及试验饮食2针对hss的使用
hss是大西洋鲑鱼中银化阶段期间相对常见的病症。nylundetal.(2003)将这种疾病与病毒感染相关联，但没有证明病原体。还建议营养不良或遗传病可能是可能的原因(rodgers和richards,1998)。典型地，其是在鱼群在患有hss的最大的鱼，并且其是在银化过程中进行的最远的鱼。
生理学上，二龄鲑在淡水中将通过鳃主动地泵出na+和cl-并且通过肾排泄mg2+和ca2+。如果鲑鱼处于细鲑阶段，其将从环境中吸收na+、cl-、ca2+和mg2+。当鱼是适应于海水的二龄鲑时会产生hss问题，但仍处于淡水中并且当鱼被喂养吸收率的衬料时得到进一步增强。试验饮食1通过提供比接受普通生长饲料高20倍的死亡率而导致了增加的hss发病率。试验饮食1仅包括na+和cl-而不包括游离mg2+和ca2+。很可能假定饲料中7％的nacl含量使鱼增加了淡水的饮水率，并且增强了鱼群中已经建立的增加的饮水率。例如，我们看到，来自喂养试验饮食1的实地试验1的hss鱼具有90,5mmol/l的血浆氯化物，而喂养对照饮食的hss鱼具有102.8mmol/l的血浆氯化物。健康鱼在淡水中的血浆氯化物的正常值为120-135mmol/l。这表明，相对于喂养生长饲料的患有hss的鱼，喂养试验饮食1的患有hss的鱼的血浆氯化物的分泌被放大。与正常鱼相比，hss鱼中的血浆氯化物明显更低，表明增加cl-的分泌的是病理模式的一部分。可能是由于这个原因，na+-k+-atpase酶活性通过提供氯离子而刺激了鱼，这种鱼获得了在饲料中额外添加的氯离子。具有atpase酶值的患有hss的鱼与二龄鲑状态相容(atpase为约10或以上)，与将盐从体内泵出的良好能力相匹配(multilab,2012)。
同时，随着鱼主动在肾脏和鳃上从身体分泌出盐，鱼和水之间的渗透梯度运转，使水流入鱼中并且盐从鱼中流出。通过渗透梯度的盐损失在鱼中靠前，鱼甚至积极地泵出盐。在肾脏中，鱼高利尿以分离出多余的水，同时再吸收离子诸如ca2+和mg2+的能力较低，与鲑鱼在海水中的行为相对应。因这，这些离子被损失，当鱼在淡水中是，这是一个缺点。因此，鱼进入低钙血症和低镁血症的状态。这示出于图表4和图表15中。患有hss的鱼(试验组和对照组)分别具有1.04和1.08mmol/l的血浆镁。文献中，淡水鱼的正常值为2mmol/l(jakobsen,2013)，而实地试验3中的鱼显示为1.44mmol/l。
类似地，对于血浆钙，来自实地试验3的健康鱼的参考值为3.8mmol/l，而hss鱼(试验鱼和对照组)分别为2.42和2.2mmol/l。ca2+和mg2+是鱼执行正常肌肉收缩的能力的一部分。对于其它物种诸如牛，我们知道低钙血/低镁血症会导致肌肉无力、心率降低和嗜睡。静脉内供应钙和镁可以修复这种疾病。查看hss的鱼的临床图片，你可以观察到嗜睡为典型的发现。鱼游泳缓慢，这可以解释为因为低钙血/低镁血症而导致肌肉无力(在心脏和骨骼肌肉中)。实证经验表明，增加海水到淡水中，减少或消除了这种类型的死亡。海水具有非常丰富的镁。
在hss中的另一重要的尸检发现是腹水(腹腔中的液体)。如果心肌不能执行正常收缩并且心率下降，则血液流体在血管系统中被阻塞。这可能在鱼的腹腔中导致渗出液，我们认为是腹水。在鱼缺少盐的情况下，生理上适应于在海水中的生活，但是在淡水中，它将开始饮水以补偿盐的损失。这可应用于ca2+、mg2+以及na+或cl-。被认为是海水(由于其为二龄鲑)的是不具有盐的淡水。这使得饮水不可阻挡，并且其逐渐发展为血容量过多。通常，观察患有hss的鱼的尸体解剖，骨骼肌水肿，表明外周循环中的流体过量。临床上，你可以看到鱼突出的鳞片，这可能是由于由高血容量引起的皮肤/水垢腔水肿导致的。
在患有该病症的鱼的尸体解剖中的另一个重要发现是在内脏和肌肉中的多发性瘀血。血管具有平滑肌，其依赖于ca2+和mg2+以使正常收缩。缺乏这些离子导致收缩能力降低，并且在血容量过多的情况下，这可能导致血管破裂和出血。在海水中的虹鳟鱼中，幽门括约肌功能的损伤(阻塞)可导致渗透调节的不平衡，因为肠不能从胃接收足够的水。这个条件触发了对水的需要，并且为了防止干燥，它开始饮用海水。它将以引起称为“水腹”的病症的量饮用。这是一个异常放大的充满了海水的胃。该病症可以达到腹部肌肉撕裂这样的范围，而鱼仍活着。这类似于hss，其中鲑鱼饮用淡水以获得盐，达到产生高血容量的程度，其导致血管破裂和在各种器官中的广泛出血。通过hss可以发现的渗出物(腹水)，其显然是由于心脏对输入血液的泵送能力降低引起的，可以通过具有血容量过多症状的鱼来增强。
根据本发明的鱼饲料含有na+、cl-、ca2+和mg2+，并且可以连同银化来使用，hss最常见发生于银化期间。根据本发明的鱼饲料可能用于预防和治疗鲑鱼中的hss状况。通过喂养根据本发明所述的鱼饲料，鱼不需要喝淡水以替代此处提及的这些离子，因此不会出现高血容量、出血、腹水、肌肉无力或壳水肿，并且避免作为生产问题的hss。这也将适用于在淡水中生产大鲑鱼(直到收获大小)，在淡水中丧失食欲、hss、壳水肿和壳损失为常规生产障碍。
supersmolt方法和根据本发明的鱼饲料之间的差异
根据
与
另外，我们看到，在饲料中仅使用调节剂na+、cl-和色氨酸(如在根据
根据本发明的鱼饲料的应用领域
根据本发明的鱼饲料可以用作：
1.与鲑鱼中传统照操纵相结合的银化的附加信号。
2.与银化中的连续光照、自然光或不完整的光操纵结合的银化的方法。
3.淡水中同步二龄鲑组。
4.预防淡水中鲑鱼的脱银化。
5.预防和治疗hss、水肿和鳞损失。
6.饲料组合物，关于防止上文第4和第5点提到的疾病的发生、以及维持类似于在海水中所见的正常生长方面，其用于以各种鲑鱼物种在淡水中生产后二龄鲑和收获大小的鱼。
7.饲料组合物，其用于以鲑鱼的各种物种在淡不中生产亲本，直到期望/可能给予性成熟信号并收获供消费的或用于进一步生产鱼的鱼卵的大小，以及用于防止上述第4点和第5点提到的疾病的发生和维持类似于海水中所见的正常生长。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种鱼饲料，包含蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质和水，其特征在于所述鱼饲料进一步包含按重量计10-100g/kg的钠盐(na+)、按重量计1-10g/kg的多价阳离子受体调节剂(pvcr)、按重量计0.1-100g/kg的镁盐(mg2+)以及按重量计0.1-100g/kg的钙盐(ca2+)。
2.根据权利要求1所述的鱼饲料，其中所述多价阳离子受体调节剂包括游离氨基酸。
3.根据权利要求1所述的鱼饲料，其中所述多价阳离子受体调节剂包括色氨酸或苯丙氨酸。
4.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述钠盐是nacl。
5.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述鱼饲料包含按重量计3.934–39.340g/kg的na+。
6.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述镁盐是mgcl2。
7.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述钙盐是cacl2。
8.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述鱼饲料包含按重量计6.202–199.020g/kg的cl-。
9.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述鱼饲料包含按重量计0.036–36.110g/kg的ca2+。
10.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述鱼饲料包含按重量计0.026–25.530g/kg的mg2+。
11.根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，包含按重量计6％的nacl、按重量计0,75％的cacl2、按重量计0,25％的mgcl2以及按重量计0,4％的l-色氨酸。
12.(新)根据前述权利要求中一项所述的鱼饲料，其中所述鱼饲料适用于诱导鲑科的银化和/或防止鲑科的银化。
13.一种用于鲑科的银化和防止鲑科的脱银化的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：
a.提供根据权利要求1-12中一项所述的鱼饲料，
b.在淡水中将所述鱼饲料给予鲑科群，所述群包括幼鲑、银化的或脱银化的鱼，直到所述鱼达到银化的状态或者另外实现或维持先前建立的海水耐受性。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于将所述鱼饲料给予幼鲑直到发生银化，所述饲料是在不存在向所述淡水中添加另外的离子的情况下给予的，所述离子由mg2+和ca2+组成。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于将所述鱼饲料给予幼鲑直到发生银化，所述饲料是在不存在光操纵的情况下给予的，所述光操纵是包括出于诱导银化的目的而使鱼群经受人工安排的光照和黑暗的类型。
16.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于结合安排的连续光照条件将所述鱼饲料给予幼鲑直到银化发生。
17.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于所述方法进一步包括保持所述鱼在淡水中进行所述鱼饲料的喂食直到所述鱼达到收获大小。
18.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于所述方法进一步包括保持所述鱼在淡水中进行所述鱼饲料的喂食，诱导所述鱼的性成熟，以及收获用于新生产鱼或用于消费的卵。
19.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于结合安排的光操纵将所述鱼饲料给予幼鲑，所述光操纵是包括出于诱导银化的目的而使鱼群经受人工安排的光照和黑暗的类型。
20.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于所述鱼饲料根据所述鱼的食欲来给予并且作为其它鱼饲料的完全替代。
21.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于将所述鱼饲料给予已经处于二龄鲑阶段的鱼，以防止所述鱼的脱银化。
22.一种包含根据权利要求1-12中一项所述的鱼饲料的组合物，用作药物。
23.根据权利要求22所述的组合物，用于预防性和/或治疗性治疗鲑科的出血性二龄鲑综合征(hss)。