一种低温超声萃取辣木多酚的方法与流程

本发明涉及有机物萃取领域，具体涉及一种低温超声萃取辣木多酚的方法。

背景技术：

植物多酚类物质经典的提取方法主要有机溶剂提取法、索氏提取法等。浸提法操作简单，但耗时长，不仅产品安全性不够，而且提取率较低，且提取后的提取液不能被相关食品所利用。

辣木的水提物或醇提物含有香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、原儿茶酸、肉桂酸、槲皮素、绿原酸等多酚类物质，此类化合物具有显著地抗氧化性、抑菌性、预防溃疡性结肠炎、免疫调节、抑制人体癌细胞增殖并促进其凋亡、清除危害人体健康的自由基、减轻γ射线辐照对小鼠引起的氧化损伤等活性。在世界各国科研院校的推动下辣木多酚类物质逐渐被开发成为一种功能性食品，并广泛的应用在食品、医药、化妆品、工业等多个领域。

但采用有机溶剂提取法会使食品工业附带危害及污染产品；利用高压热水法提取辣木中的黄酮和多酚类化合物，不仅优化了提取工艺，而且有效地避免有机溶剂残留所引起的产品损害，但是多酚类物质见光易分解，高温高压条件下多酚提取率较低且结构易破坏，且成本较高，工业流程较为麻烦。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种低温超声萃取辣木多酚的方法，该方法所用的原材料廉价易得，且操作方法简便，成本低，效率高，适合工业化生产。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种低温超声萃取辣木多酚的方法，其包括以下步骤：

s1、确定没食子酸标准曲线；

s2、粗提取辣木叶多酚，得到辣木叶多酚粗提物溶液；

s3、对辣木叶多酚粗提物溶液进行纯化提取，得到辣木多酚纯化物；

s4、冷冻干燥辣木多酚纯化物使之成粉末状，并低温保存；

s5、检测辣木多酚纯化物的吸光度值，并计算得率。

进一步地，所述步骤s1具体为：用超纯水配制浓度为50μg/ml的没食子酸标准液，常温下分别移取0、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml没食子酸标准溶液至10ml比色管中，每管加1ml蒸馏水，加入1.5ml浓度为50％的福林酚试剂，反应3min后加入3ml质量分数为12％碳酸钠溶液，加水定容至10ml比色管，在暗处反应2h，762nm测吸光度，记录数据，并绘制没食子酸标准曲线。

进一步地，所述步骤s2中的粗提取辣木叶多酚的方法为：

s21、采摘辣木叶，于80℃烘至水分含量为6％，过磁力搅拌器磨成粉，过80目筛，得到辣木叶粉，低温干燥保存待用；

s22、称量1g辣木叶粉，按料液比1:20(m/v)加入20ml乙醇，静置30min后进行超声；

s23、超声完后用滤纸进行过滤并保存。

进一步地，所述步骤s22中的乙醇体积分数为40％、50％、60％、70％或80％。

进一步地，所述步骤s22中的超声时间为10min、20min、30min、40min或50min。

进一步地，所述步骤s22中的超声功率为210w、255w、300w、345w或405w。

进一步地，所述步骤s22中的超声温度为0℃、20℃、40℃、60℃或80℃。

进一步地，所述步骤s3中的对辣木叶多酚粗提物溶液进行纯化提取的方法为：

将辣木叶多酚粗提物溶液用25％的乙醇溶解，过d101大孔树脂柱，再经75％乙醇洗脱，以4ml/管收集洗脱液，置于旋转蒸发仪(转速6，水温37℃，旋蒸40min)蒸发，得到辣木多酚纯化物。

进一步地，所述步骤s5中的检测辣木多酚纯化物的吸光度值的方法为：

取步骤s3中的洗脱液0.02ml置于比色管，并加入1ml水、1.5ml浓度为50％的福林酚，反应3min后加入3ml质量分数为12％碳酸钠溶液，加水定容至10ml，在暗处反应2h，762nm测吸光度，并计算得到辣木多酚纯化物溶液的浓度。

进一步地，所述步骤s5中的计算得率的公式为：其中v表示辣木多酚纯化物溶液的浓度。

采用上述技术方案后，本发明与背景技术相比，具有如下优点：

1、产品无污染物残留。本发明所述的辣木多酚萃取方法中仅采用水和乙醇，而乙醇可挥发去除，因此值得的辣木多酚粉末不会因萃取过程而引入其他有机污染物，避免了有机溶剂残留所引起的产品损害，制得的辣木多酚粉末产品可以用于食品行业。

2、提取得率高。本发明的萃取温度相对传统的高压热水法低，且在常压下进行，避免了萃取过程中辣木多酚因高温高压而导致结构破坏，提高了提取得率。

3、成本低，操作简单。本发明所述的萃取方法在常压下进行，所用的试剂廉价且容易获得，且操作方法简单，大大降低了生产成本，适合工业推广。

附图说明

图1本发明没食子酸的标准曲线；

图2本发明乙醇体积分数对辣木叶多酚提取得率的影响；

图3本发明超声功率对辣木叶多酚提取得率的影响；

图4本发明超声时间对辣木叶多酚提取得率的影响；

图5本发明超声温度对辣木叶多酚提取得率的影响。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1辣木多酚的萃取

1、没食子酸标准曲线的确定。

用超纯水配制浓度为50μg/ml的没食子酸标准液，常温下分别移取0、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml没食子酸标准溶液至10ml比色管中，每管加1ml蒸馏水，加入1.5ml浓度为50％的福林酚试剂，反应3min后加入3ml质量分数为12％碳酸钠溶液，加水定容至10ml比色管，在暗处反应2h，762nm测吸光度，记录数据，并绘制没食子酸标准曲线，所得的没食子酸标准曲线如图1所示。

当没食子酸质量浓度在0-50μg·ml^-1时，吸光值a762与标准液浓度有良好的线性关系。没食子酸标准工作曲线的线性回归方程为y＝1.8151x+0.0158，相关系数r²＝0.9989(y为吸光值，x为没食酸浓度)。因此，可以根据没食子酸的标准工作曲线公式和螺旋藻溶液在762nm波长下的吸光值，得出辣木提取物中的多酚含量。

2、辣木叶多酚的粗提取。

采摘辣木叶，于80℃烘至水分含量为6％，过磁力搅拌器磨成粉，过80目筛，得到辣木叶粉，低温干燥保存待用。正确称量1g辣木粉，按料液比1:20(m/v)加入乙醇20ml(乙醇浓度40％、50％、60％、70％、80％)静置30min(室温放置15min，经搅拌放入水槽15min)而后进行超声，超声时间分别为10min、20min、30min、40min，50min，水槽温度0℃、20℃、40℃、60℃、80℃，超声功率210w、255w、300w、345w、405w。超声完后用滤纸进行过滤，过滤液编号保存。

3、辣木多酚的纯化。

将辣木叶多酚粗提物溶液用25％的乙醇溶解，过d101大孔树脂柱，再经75％乙醇洗脱，以4ml/管收集洗脱液，置于旋转蒸发仪(转速6，水温37℃，旋蒸40min)蒸发，得到辣木多酚纯化物。

4、冷冻干燥辣木多酚纯化物使之成粉末状，并低温保存。

5、检测辣木多酚纯化物的吸光度值，并计算得率。

取步骤s3中的洗脱液0.02ml置于比色管，并加入1ml水、1.5ml浓度为50％的福林酚，反应3min后加入3ml质量分数为12％碳酸钠溶液，加水定容至10ml，在暗处反应2h，762nm测吸光度，并计算得到辣木多酚纯化物溶液的浓度和得率。

其中，辣木多酚纯化物溶液浓度的计算方法为：

式中a0为吸光度值,

计算得率的公式如下：

式中v表示辣木多酚纯化物溶液的体积。

实施例2乙醇体积分数对辣木多酚提取得率的影响

用电子天平准确称取1g辣木叶粉，分别加入40％、50％、60％、70％、80％体积分数的乙醇，使其料液比为1:20(m/v)，微波辅助提取10min，超声温度40℃，超声功率345w，平行实验3次，测定辣木多酚的含量。

结果如图2所示，从图中可以看出，当乙醇的体积分数为60％时，辣木多酚得率最高，为3.234μg/mg。

实施例3超声条件对辣木多酚提取得率的影响

(1)超声功率对辣木叶多酚提取得率的影响

用电子天平准确称取1g辣木叶粉，超声功率分别为210w、255w、300w、345w、405w，分别加入60％体积分数的乙醇，使其料液比为1:20(m/v)，微波辅助提取10min，超声温度40℃，平行实验3次，测定辣木多酚含量，得到如图3所示的结果。

从图3中可以看出，辣木叶多酚在超声功率为345w时，多酚得率最高，为2.743μg/mg。

(2)超声时间对辣木叶多酚提取得率的影响

用电子天平准确称取1g辣木叶粉，按料液比1:20(m/v)加入20ml体积分数为60％的乙醇，选取345w的超声功率，分别提取10min、20min、30min、40min，50min，平行实验3次，测定辣木多酚含量，得到如图4所示的结果。

从图4中可以看出，辣木叶多酚在超声时间为30min时，多酚得率最高，为2.885μg/mg。

(3)超声温度对辣木叶多酚提取得率的影响

用电子天平准确称取1g辣木叶粉，按料液比1:20(m/v)加入20ml体积分数为60％的乙醇，选取345w的超声功率，超声时间10min，分别于0℃、20℃、40℃、60℃、80℃温度下萃取，平行实验3次，测定辣木多酚含量，得到如图5所示的结果。

从图3中可以看出，辣木叶多酚在超声温度为40℃时，多酚得率最高，为3.712μg/mg。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。