本发明涉及保健食品
技术领域：
，尤其涉及一种健骨食品。
背景技术：
：骨关节炎是一种全身代谢性骨病，表现在软骨下骨骨矿代谢异常。骨关节炎的发生机制十分复杂，至今尚无明确的定论，但骨关节炎和骨质疏松一样，均系骨矿代谢异常诱发的骨骼疾病，骨关节炎的发生包涵了许多机制，包括生长因子和细胞因子对软骨细胞的作用与对软骨基质合成的影响，以及骨基质的酶性降解、骨的修复等等。骨关节炎的发病人群集中在50岁以上，导致长期残疾的风险仅次于心血管疾病。骨关节炎的骨形态学特征在于进行性关节软骨丧失，新骨形成、软骨下骨小梁与生长板硬化、骨赘形成、基质降解使软骨丢失和基质修复间失去平衡。骨关节炎的主要临床表现为僵硬、持续性疼痛、甚至关节变形肿大。目前，骨关节炎尚缺乏有效的治愈手段，治疗的最主要目的是控制疼痛。非甾体类药物如布洛芬、双氯芬酸、美洛昔康、奈丁美酮等在临床上是最常用的，但它们的副作用也比较明显，比如消化道不良反应、肾功能损害等。这类的药物在疾病末期能较大的缓解病人的痛苦，但其仍属于一种治标不治本型药物，市场上更需要一种能在疾病的初期进行调整、改善骨的骨矿成分代谢平衡关系，有效调节与干预、改善及恢复关节功能的骨关节炎预防或治疗的药物或保健食品。因此，市场更需要一种安全，能对骨关节炎的形成过程进行，而不仅仅是关节炎出现显著疼痛症状时强制镇痛和/或延缓关节炎病情的进一步加重的药物。硫酸软骨素是形成软骨基质的主要生物高分子。通常硫酸软骨素作为软骨结构的成分之一，可以加速关节的修复、保留水分、使营养成分快速渗透至软骨中。而软骨组织的II型骨胶原蛋白肽，是软骨再生的重要成分。人类骨关节炎的病理生理主要是影响软骨基质中II型骨胶原蛋白肽和硫酸软骨素这两种成分，以关节软骨胶原纤维断裂、蛋白多糖进行性耗损为特征。因此，硫酸软骨素通常作为治疗骨性关节炎的保健食品和药品应用广泛。目前将鱼和禽骨作为硫酸软骨素的来源方面有较多的研究。如专利申请一种鱼软骨提取物的制备方法及所得的产品(200810200881.6)，通过酶解鱼软骨的方法制备得到含分子量为5000-15000道尔顿硫酸软骨素鱼软骨提取物。一种鱼软骨生产硫酸软骨素联产水解骨胶原蛋白肽的方法(201310262059.3)，实现硫酸软骨素和水解骨胶原蛋白肽的同步生产。但是上述专利所得产物均未解决硫酸软骨素分子量过大临床生物利用率较低的问题。对鸡软骨的深加工也研究很多:一种透明质酸接枝小分子硫酸软骨素复合(201610469291.8)，一种从鸡软骨中提取纯净Ⅱ型胶原的方法(201510568186.5)。而畜牧业的骨的利用方面还存在较大的空白。还需说明的是，虽然硫酸软骨素在治疗骨性关节炎方面应用广泛，但近年来研究发现，硫酸软骨素的相对分子量大，它的大体积往往妨碍其顺利的穿越细胞膜，因而不能在机体内良好地发挥其多种药理功能，而低分子量的硫酸软骨素具有粘度小、溶解性好、易吸收及生物利用度高等特点。近年来，低分子硫酸软骨素在防治冠心病、关节炎以及抗肿瘤等方面正日益受到广泛重视。因此，含低分子量硫酸软骨素的保健食品和药品的开发具有重要的现实意义。技术实现要素：为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种有效成分易于被人体吸收、有效缓解骨关节炎的健骨食品。本发明的目的采用如下技术方案实现：一种健骨食品，包括牲畜软骨提取物、维生素K2、维生素D3和辅料，所述牲畜软骨提取物由耗牛软骨、羊类软骨和鹿类软骨按(1-5):(1-5):1的重量比为软骨原料经过以下步骤制得：1)将软骨原料加6-10倍重量的水，加碳酸钠调节pH至7.5-8.5熬煮1-2h，剔除杂组织、冲洗，破碎，得骨浆浆体；2)向步骤1)得到的骨浆浆体加入2-5倍骨浆浆体重量的水，将pH调节至5.0-6.0，按1000FU-2000FU/kg混合蛋白酶，于30-40℃酶解；3)升温至80-100℃进行灭酶；4)降温至50-70℃离心，使用100-200目布滤袋过滤得上清液；5)上清液用分子量1000-2000的超滤膜截留，收集膜透过液冷冻干燥得到软骨提取物。进一步地，所述辅料为乳糖。进一步地，每20g的软骨提取物加乳糖制成100g的制剂，包含1-2mg的维生素K2和1-2mg的维生素D3。进一步地，步骤1)中，加入软骨原料0.5-2wt％的NaCl。进一步地，步骤2)中，采用乳酸或磷酸调节pH。进一步地，所述混合蛋白酶由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和软骨素酶组成。进一步地，所述混合蛋白酶由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和软骨素酶按组成1:(4-6):(6-10)的重量比组成。进一步地，所述混合蛋白酶由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和软骨素酶按组成1:5:8的重量比组成。进一步地，步骤4)中，离心速率为7000-10000r/min。进一步地，步骤5)中，于-10--20℃真空冷冻干燥。相比现有技术，本发明的有益效果在于：1)本发明提供的健骨食品，能有效利用畜牧业难以利用、难以保存的软骨，能有效提取对人骨关节炎具有较佳调养效果的硫酸软骨素、粘多糖、蛋白质和无机盐，具有利于吸收的钙、磷、硫配比；2)本发明提供的健骨食品，通过向软骨提取物中加入维生素K2和维生素D3，以协同性地促进机体对钙、磷和硫的吸收能力以及体内的矿物质平衡。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。本发明提供一种健骨食品，包括牲畜软骨提取物、维生素K2、维生素D3和辅料，牲畜软骨提取物由耗牛软骨、羊类软骨和鹿类软骨按(1-5):(1-5):1的重量比为软骨原料经过以下步骤制得：1)将软骨原料加6-10倍重量的水，加碳酸钠调节pH至7.5-8.5熬煮1-2h，剔除杂组织、冲洗，破碎，得骨浆浆体；2)向步骤1)得到的骨浆浆体加入2-5倍重量的水，将pH调节至5.0-6.0，按1000FU-2000FU/kg混合蛋白酶，于30-40℃酶解；3)升温至80-100℃进行灭酶；4)降温至50-70℃离心，使用100-200目布滤袋过滤得上清液；5)上清液用分子量1000-2000的超滤膜截留，收集膜透过冷冻干燥得到软骨提取物。该健骨食品能有效利用畜牧业难以利用、难以保存的软骨。因其较松散的软骨结构，在提取过程中，硫酸软骨素、粘多糖、蛋白质和无机盐等较易溶出。软骨提取物作为天然的钙、磷、硫等矿物质的来源，健骨养骨。本发明采用耗牛软骨、羊类软骨和鹿类软骨三种软骨作为来源，具有较佳的钙、磷、硫配比。本发明提供的健骨食品，其中软骨提取物中低分子量硫酸软骨素含量为20-40％，分子量小于500道尔顿的低分子量硫酸软骨素占总软骨素含量的95％以上。胶原蛋白肽含量为20-80％，其中羟脯氨酸、甘氨酸和脯氨酸含量占蛋白肽含量的35％以上。本发明中，向软骨提取物中添加维生素K2和维生素D3，能显著提高人体对有软骨提取物中钙、磷、硫矿物元素的吸收水平。其中，维生素K2能通过显著促进人体骨骼形成中重要的钙结合蛋白—骨钙素的羧化，显著提升钙成骨的速度与水平，促进骨形成与骨矿化，同时显著抑制骨吸收。维生素D3影响骨细胞的分化及活性，促进骨健康，具有显著促进肠道钙的吸收及肾钙的再吸收功能，对于人体摄入钙的有效吸收与利用，以及血钙的平衡具有重要作用。该软骨提取物的制备步骤中，采用复合酶水解技术，实现硫酸软骨素和骨胶原蛋白肽的同步水解，实现了畜类软骨的综合利用。低分子量硫酸软骨素，解决了硫酸软骨素临床应用生物利用率低的问题，具有对受损软骨的修复作用，具有良好的保健功效。实施例1：一种健骨食品，由20g的软骨提取物加乳糖制成100g的制剂，含0.15mg的维生素K2和0.15mg的维生素D3，牲畜软骨提取物由耗牛软骨、羊类软骨和鹿类软骨按3:3:1的重量比为软骨原料经过以下步骤制得：1)将10kg的软骨原料加80kg的水，加碳酸钠调节pH至8.0熬煮2h，剔除杂组织、冲洗，破碎，得骨浆浆体；2)向步骤1)得到的骨浆浆体加入270kg的水，采用磷酸将pH调节至5.5，按1500FU/kg的量加入混合蛋白酶，于35℃酶解；其中，混合蛋白酶由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和软骨素酶按组成1:5:8的重量比组成；3)升温至90℃进行灭酶15min；4)降温至60℃后，于8000r/min离心，使用200目布滤袋过滤得上清液；5)上清液用分子量1000的超滤膜截留，收集膜透过液于-10℃真空冷冻干燥得到380g软骨提取物；6)将20g的软骨提取物、加0.15mg的维生素K2和0.15mg的维生素D3和余量的乳糖，压制成片剂，每0.5g/片。实施例2：一种健骨食品，由20g的软骨提取物加乳糖制成100g的制剂，并含0.10mg的维生素K2和0.20mg的维生素D3，牲畜软骨提取物由耗牛软骨、羊类软骨和鹿类软骨按3:3:1的重量比为软骨原料经过以下步骤制得：1)将每10kg的软骨原料加100kg的水，加碳酸钠调节pH至7.5熬煮2h，剔除杂组织、冲洗，破碎，得骨浆浆体；2)向步骤1)得到的骨浆浆体加入430kg的水，采用乳酸将pH调节至5.5，按1500FU/kg的量加入混合蛋白酶，于37℃酶解；其中，混合蛋白酶由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和软骨素酶按组成1:4:6的重量比组成；3)升温至95℃进行灭酶20min；4)降温至50℃后，于10000r/min离心，使用150目布滤袋过滤得上清液；5)上清液用分子量1500的超滤膜截留，收集膜透过液于-15℃真空冷冻干燥得到372g软骨提取物；6)将每20g的软骨提取物、加0.10mg的维生素K2和0.20mg的维生素D3和余量的乳糖，压制成片剂，每0.5g/片。实施例3：一种健骨食品，由20g的软骨提取物加乳糖制成100g的制剂，并含0.10mg的维生素K2和0.20mg的维生素D3，牲畜软骨提取物由耗牛软骨、羊类软骨和鹿类软骨按3:3:1的重量比为软骨原料经过以下步骤制得：1)将每10kg的软骨原料加60kg的水，加100g的NaCl，加碳酸钠调节pH至7.5熬煮2h，剔除杂组织、冲洗，破碎，得骨浆浆体；2)向步骤1)得到的骨浆浆体加入300kg的水，采用乳酸将pH调节至6.0，按2000FU/kg的量加入混合蛋白酶，于37℃酶解；其中，混合蛋白酶由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和软骨素酶按组成1:6:9的重量比组成；3)升温至95℃进行灭酶20min；4)降温至50℃后，于7000r/min离心，使用150目布滤袋过滤得上清液；5)上清液用分子量1000的超滤膜截留，收集膜透过液于-20℃真空冷冻干燥得到395g软骨提取物；6)将每20g的软骨提取物、加0.10mg的维生素K2和0.20mg的维生素D3和余量的乳糖，压制成片剂，每0.5g/片。性能检测与效果评价1.有效成分含量测定实施例1-3中，通过氨基酸分析法检测软骨提取物中，骨胶原蛋白肽肽纯度(总氨基酸含量)及羟脯氨酸、甘氨酸和脯氨酸的含量(指定氨基酸含量占比)；通过咔唑—硫酸法测得硫酸软骨素含量，薄层层析法测定分子量，结果如下表所示。表1有效成分含量测定实施例1实施例2实施例3总氨基酸含量42.6％47.1％48.3％指定氨基酸含量占比53.4％54.6％53.9％硫酸软骨素含量31.7％32.4％33.5％<1KDa占比98.3％98.1％98.7％由表1可知，本申请提供的健骨食品，制得的软骨提取物，同步水解蛋白质和硫酸软骨素效率高，总氨基酸含量达42-48％，硫酸软骨素含量达31-34％；且兽骨氨基酸中可有效被身体吸收的成分含量高，即羟脯氨酸、甘氨酸和脯氨酸的含量占53-55％，<1KDa占比大于95％。本发明提供的健骨食品，推荐使用剂量为成人每天6片，成人以60kg重量计，折合剂量为0.05g/kg.bw。2.毒理性评价取实施例1-3的样品进行安全性毒理学评价，结果如下：表2安全性毒性学评价由上表可知，实施例1-3得到的健骨食品的急性经口毒性均属于无毒类；无无致突变作用，即均无遗传毒性；未引起大鼠整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学各重要指标的异常变化，最大无作用剂量大于推荐剂量的100倍。3、关节功能试验关于有改善关节功能的作用，目前国家尚没有相应的标准试验和评价方法，如下发明人根据关节疾病的相关症状和不良反应，有针对性的设计了一套试验，功能评价试验主要从膝关节休息痛等七方面进行试验实验人群共132例，按年年龄性别病程和关节炎情况分配再抽签分为4组，每组33人，前三组为试验组，每天3次，每次2片，每组使用实施例1-3得到的健骨食品；另一组对对照例，食用同等大小的乳糖压片，双向盲测进行试验。服用时间60天，受试者在服用前和服用过程中未使用其他口服或外用的改善骨关节炎的药物。参与试验的志愿者的基本情况如下表所示:表3志愿者病理情况组别N年龄性别(男/女)病程(年)膝关节(双膝/单膝)实施例13351‐5917/161.4‐3.517例/16例实施例23352‐5916/171.5‐3.216例/17例实施例33351‐5817/161.6‐3.616例/17例对比例13351‐5917/161.5‐3.617例/16例主要观察指标：关节功能改善实验。功能测评：以下述7项为症状积分。膝关节休息痛：正常0分，轻度疼痛、不影响工作1分，较重度疼痛、不影响睡眠2分，重度疼痛、影响睡眠3分。膝关节运动痛：正常0分，上下楼有症状、屈伸无影响1分，上下楼有症状、下蹲有影响2分，行走时疼痛3分。压痛：正常0分，重度压时疼痛1分，中度压时疼痛2分，轻度压时疼痛3分。肿胀：正常0分，稍肿、膝眼清楚1分，软组织肿胀、膝眼不清楚2分，膝眼不清楚、浮髌实验(+)3分。晨僵：正常0分，屈伸僵硬但很快恢复(小于10分钟)1分，僵硬、短时间可恢复(10-20分钟)2分，僵硬、较长时间才恢复(大于20分钟)3分。膝关节屈曲：正常0分，膝关节活动角度0-125度，膝关节屈曲角度可达90-119度为1分，膝关节屈曲只达到20-89度为2分，膝关节屈曲角度小于20度为3分。行走能力：最大步行距离没有限制0分，超过1km、但受限制1分，大约1km或步行16分钟受限制2分，500-900m或步行8-15分钟受限制3分，300-500m受限制4分，100-300m受限制5分，小于100m受限制6分。随访时间：随访时间为60天。统计按规服用率大于95％的参与者作为统计对象，每组随机取25例有效志愿者的数值，计算平均值。统计学分析：采用SPSS方差分析。结果：按意向处理分析，病例均进入结果分析。表4体验试验结果对照组试用前症状积分为7.53，试验组试用前症状积分为7.93、8.12、8.32，差异不显著性。经过60天的试验后，两组的症状积分降低程度不同。对照组为6.96，试验实施例1的产品的试验组积分为3.26，试验实施例2的产品的试验组积分为2.92，试验实施例3的产品的试验组积分为2.90，与对照组相比，差异较显著，所有受试者在60天地试食过程中均未发生不良反应和副作用。上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。当前第1页1 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