本发明涉及饲料领域，更具体地，涉及一种鸡饲料及其制备方法。
背景技术
裂殖壶菌是一类属于真菌门、卵菌纲、水霉目、破囊壶菌科的类藻海洋单细胞球形真菌。胞内油脂占细胞干重的50％以上，其中dha占总脂肪酸的质量分数高达35％～50％。此外，该菌株细胞中还富蕃茄红素、虾青素、胡萝卜素等多种天然色素。裂殖壶菌油脂90％以上以甘油三酯的形式存在，少量以磷脂的形式存在，而以磷脂存在的油脂来源以细胞膜为主。
鸡蛋是仅次于母乳的营养来源之一，每百克鸡蛋约含蛋白质12.8g，其种含有人体必需的8种氨基酸，并与人体蛋白的组成极为近似，人体对鸡蛋蛋白质的吸收率可高达98％，每百克鸡蛋含脂肪11～15克，也极易被人体消化吸收，鸡蛋中还含有丰富的软磷脂、固醇类、蛋黄素以及钙、磷、铁、维生素a、维生素d及b族维生素，这些成分对增进神经系统的功能大有裨益。
在养殖条件下，通常是通过食物链途径，通过改善鸡的饲料配方，从而收获高营养价值的红心鸡蛋。在市场中，通常通过饲喂含色素饲料的方法来得到红心鸡蛋。其中，饲料中所含的色素通常由化工合成和植物提取两种方法制得。化工合成的色素工艺复杂、设备投资大，而且存在食品安全隐患；植物提取的色素受资源限制，远远不能满足需求。同时这两种方法生产的饲用色素加入鸡饲料中仅仅只能让鸡蛋看起来像红心鸡蛋，没有实质性营养价值，既不能提高动物生产性能，也不能提高鸡蛋的食用营养，并不能真正得到营养价值高的红心鸡蛋。
另外，现有技术为了提升鸡蛋营养往往都是直接在鸡饲料中添加藻油，或是将含油菌体加入饲料中。
现在缺乏一种制备工艺程序简单，通过一次发酵能够同时富含dha等营养物质和着色物质的鸡饲料。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种鸡饲料的制备方法，包括：
1)将dha发酵液干燥，得到dha菌粉；
2)向dha发酵液中加入酶使菌体的细胞壁和细胞膜水解，去除水解物中的油脂后干燥得到dha菌粕粉；
3)将所述dha菌粕粉与所述dha菌粉混合制得所述鸡饲料；
其中，所述dha发酵液由裂殖壶菌、破囊壶菌、吾肯氏壶菌或小球藻菌发酵制得。
其中，步骤1)和步骤2)中，制备dha菌粉和dha菌粕粉中的dha发酵液优选地均由裂殖壶菌发酵制得。
当使用上述微藻细胞发酵时，未提油的菌藻油粉由于有细胞壁和细胞膜的完整性对dha油有非常好的保护作用；提油后的菌藻粕粉，含有大量的蕃茄红素、虾青素、胡萝卜素等多种天然色素和pufa的磷脂及水溶性的肽类；发酵液中未代谢的培养基成分含有大量的矿物质、糖类、蛋白质等，带来丰富营养物质。这些成分综合可以有效的提高鸡饲料的功效，使得到的鸡蛋为红心鸡蛋的同时，其营养价值也得到显著的提高。
在一个优选实施方式中，所述dha发酵液为发酵24～72小时制得。所述发酵中发酵基质包括葡萄糖、酵母浸膏、谷氨酸钠、镁离子和钙离子。
其中，发酵时间优选为48～60小时。在上述时间内，微生物在进入大罐24-72小时为快速生长期，此时细胞体积相对较小，细胞壁和细胞膜所占干重的比例相对较高，相应的磷脂型的dha较高，天然色素含量更高。
在一个优选实施方式中，发酵基质包括葡萄糖、酵母浸膏、谷氨酸钠、镁离子、钙离子等其它矿物质。主要成分葡萄糖、酵母浸膏、谷氨酸钠、镁离子、钙离子重量百分比分别优选为4％～12％、0.4％～0.6％、2％～4％、0.5％～10％、0.05％～0.1％。
在一个优选实施方式中，发酵基质包括葡萄糖、酵母浸膏、谷氨酸钠、镁离子、钙离子等其它矿物质。优选地，以重量份计，发酵基质包括葡萄糖40-120g/l，酵母浸膏4-6g/l，谷氨酸钠20-40g/l，氯化钠1-5g/l，磷酸二氢钾1-5g/l，硫酸镁5-10g/l，氯化钙0.5-1g/l，碳酸氢钠0.5-1g/l，硫酸钠5-10g/l，硫酸铵5-20g/l，氯化钾0.5-1g/l，ph自然。进一步优选地，发酵基质为葡萄糖80-110g/l，酵母浸膏4-6g/l，谷氨酸钠20-30g/l，氯化钠1-3g/l，磷酸二氢钾1-2g/l，硫酸镁5-7g/l，氯化钙0.5-1g/l，碳酸氢钠0.5-1g/l，硫酸钠5-8g/l，硫酸铵5-10g/l，氯化钾0.5-0.8g/l，ph自然。
在本发明一个优选实施方式中，dha菌粉和dha菌粕粉的质量比为1～10，优选为1～3。
其中，步骤2)中，酶为纤维素酶和复合蛋白酶。
微藻细胞壁的结构骨架多由纤维素组成,以微纤丝的方式层状排列,含量占干重的30％-80％,其余部分为间质多糖所占。间质多糖主要是杂多糖,其成分随种类而异。纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称,由多个酶起协同作用的多酶体系。通过纤维素酶的降解，得到水溶性膳食纤维和释放出与结合的脂和蛋白等。
微藻细胞膜由磷脂、蛋白和多糖组成，加入复合蛋白酶后，得到含有pufa的磷脂、糖脂等水溶性好的酶解液。在酶解液提油的过程中，大量的色素的物质溶于两性的磷脂中而存在于在水溶性的酶解液中。
在一个优选实施方式中，纤维素酶和复合蛋白酶加入的重量比为0.2～5，优选为0.5。
在一个优选实施方式中，所述复合蛋白酶包括碱性蛋白酶和中性蛋白酶。
在一个优选实施方式中，所述步骤1)干燥优选为喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥，进一步优选地干燥方法为喷雾干燥，其中喷雾干燥中进风温度为150～300度，出风温度为50～100度。
其中，干燥可以优选为真空干燥，物料干燥温度为60～90度。更进一步优选地，真空干燥，进风温度为200～250度，出风温度为80～90度。
在一个优选实施方式中，所述步骤2)中将dha菌粕粉干燥，所述干燥方法优选为喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥，进一步优选地喷雾干燥，喷雾干燥进风温度为150～300度，出风温度为50～100度。
其中，干燥可以优选为真空干燥，物料干燥温度为60～90度。更进一步优选地，喷雾干燥地进风温度为200～250度，出风温度为80～90度。
在一个优选实施方式中，该鸡饲料的制备方法，包括：
1)将dha发酵液喷雾干燥，得到dha菌粉；
2)向dha发酵液中加入酶使菌体的细胞壁和细胞膜水解，去除水解物中的油脂后干燥得到dha菌粕粉；
3)将所述dha菌粕粉与所述dha菌粉混合制得所述鸡饲料；
其中，所述dha发酵液由裂殖壶菌发酵24-72小时制得；所述步骤2)中，所述酶为纤维素酶和复合蛋白酶。
使用上述制备方法得到的鸡饲料喂养鸡时，可以使得到鸡蛋的dha含量得到增加的同时，鸡蛋的蛋黄为红色，得到富集dha的红心鸡蛋。
本发明的另一个目的在于提供了上述制备方法制备得到的鸡饲料。
本发明所提供的制备方法可以得到含有甘油三酯型dha和磷脂型dha的鸡饲料，该饲料可使鸡蛋dha含量增加，蛋黄着色变红。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将裂殖壶菌在发酵基质中发酵60小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖100g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠3g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠7g/l，硫酸铵8g/l，氯化钾0.6g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接喷雾干燥，在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粉；
(3)将步骤1)中另一部分dha发酵液加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解裂殖壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粕粉；
(4)将步骤(2)中的dha菌粉和步骤(3)中的dha菌粕粉按重量比1:1混合得到鸡饲料。
实施例2
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将破囊壶菌在发酵基质中发酵60小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖120g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠5g/l，磷酸二氢钾5g/l，硫酸镁10g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠1g/l，硫酸钠10g/l，硫酸铵20g/l，氯化钾1g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接真空干燥，在温度为60～90度条件下进行真空干燥，得到dha菌粉；
(3)将步骤1)中另一部分dha发酵液加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解破囊壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后，在温度为60～90度条件下进行真空干燥，得到dha菌粕粉；
(4)将步骤(2)中的dha菌粉和步骤(3)中的dha菌粕粉按重量比3:1混合得到鸡饲料。
实施例3
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将吾肯氏壶菌在发酵基质中发酵60小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖100g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠3g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠7g/l，硫酸铵8g/l，氯化钾0.6g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接喷雾干燥，在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粉；
(3)将步骤1)中另一部分dha发酵液加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解吾肯氏壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粕粉；
(4)将步骤(2)中的dha菌粉和步骤(3)中的dha菌粕粉按重量比8:1混合得到鸡饲料。
实施例4
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将裂殖壶菌在发酵基质中发酵48小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖100g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠3g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠7g/l，硫酸铵8g/l，氯化钾0.6g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接喷雾干燥，在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粉；
(3)将步骤1)中另一部分dha发酵液加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解裂殖壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粕粉；
(4)将步骤(2)中的dha菌粉和步骤(3)中的dha菌粕粉按重量比3:1混合得到鸡饲料。
实施例5
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将裂殖壶菌在发酵基质中发酵24小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖40g/l，酵母浸膏4g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠1g/l，磷酸二氢钾1g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙0.5g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠5g/l，硫酸铵55g/l，氯化钾0.5g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接喷雾干燥，在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粉；
(3)将步骤1)中另一部分dha发酵液加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解裂殖壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粕粉；
(4)将步骤(2)中的dha菌粉和步骤(3)中的dha菌粕粉按重量比1:1混合得到鸡饲料。
对比例1
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将裂殖壶菌在发酵基质中发酵60小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖100g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠3g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠7g/l，硫酸铵8g/l，氯化钾0.6g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接喷雾干燥，在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粉，即得到鸡饲料。
对比例2
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将裂殖壶菌在发酵基质中发酵20小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖100g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠3g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠7g/l，硫酸铵8g/l，氯化钾0.6g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接喷雾干燥，在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粉；
(3)将步骤1)中另一部分dha发酵液加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解裂殖壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粕粉；
(4)将步骤(2)中的dha菌粉和步骤(3)中的dha菌粕粉按重量比1:1混合得到鸡饲料。
对比例3
本实施例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将裂殖壶菌在发酵基质中发酵80小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖100g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠3g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠7g/l，硫酸铵8g/l，氯化钾0.6g/l，ph自然；
(2)取步骤1)中的一部分dha发酵液直接喷雾干燥，在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粉；
(3)将步骤1)中另一部分dha发酵液加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解裂殖壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粕粉；
(4)将步骤(2)中的dha菌粉和步骤(3)中的dha菌粕粉按重量比1:1混合得到鸡饲料。
对比例4
本对比例提供了一种鸡饲料，该鸡饲料的制备方法包括：
(1)将裂殖壶菌在发酵基质中发酵60小时，停止营养供养，得到dha发酵液；所述发酵基质为以重量份计，葡萄糖100g/l，酵母浸膏6g/l，谷氨酸钠20g/l，氯化钠3g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁5g/l，氯化钙1g/l，碳酸氢钠0.5g/l，硫酸钠7g/l，硫酸铵8g/l，氯化钾0.6g/l，ph自然；
(2)向步骤1)中dha发酵液中加入重量比0.1％纤维素酶和0.2％复合蛋白酶，水解裂殖壶菌的细胞壁和细胞膜，将酶解液离心后去除油脂后在进风温度200度，出风温度80度下进行喷雾干燥，得到dha菌粕粉，即得到鸡饲料。
试验例1
一、试验动物与试验材料
试验选择30-40周龄体况良好、体重相近的京粉1号商品蛋鸡300只，随机分为10个组，每组5个重复，每个重复6只鸡。a组为基础日粮对照组，在处理组b、c、d、e、f、g、h、i、j使用实施例1、2、3、4、5和对比例1、2、3、4得到的藻粉鸡饲料。试验周期为28d，期间检测蛋鸡的生产性能。
二、生产性能
每天以重复为单位准确记录产蛋数、总蛋重和采食量，计算全期的平均日采食量、料蛋比、产蛋率和平均蛋重等生产性能指标。分别于试验第1、2、3和4周末，从每重复中随机选取6个鸡蛋，其中3个鸡蛋用于检测蛋黄颜色。另外3个鸡蛋用于检测鸡蛋中脂肪酸和dha含量，参照ny/t2068-2011的方法进行鸡蛋油脂提取，并经低压蒸馏去除溶剂，恒重，得到粗油含量，进一步甲酯化后检测脂肪酸和dha含量，方法参照gb/t17377-2000。
三、实验结果：
不同实施例和对比例得到的藻粉鸡饲料(以下均称裂殖壶藻粉组)对蛋黄颜色的影响，试验结果见表1，实施例1-5从第一周开始与对照组之间呈显著差异，对比例1-3从第一周开始与对照组之间差异不大。试验第二周时，实施例1-5与对照组之间呈显著差异，对比例1-4差异不明显。试验第三周时，各实施例组及对比例4与对照组之间呈显著差异。对比例2有一定差异，对比例1、3不明显。试验第四周时，各试验组及对比例4与对照组之间呈显著差异，对比例2有一定差异，对比例1、3不明显。
结果表明：实施例的藻粉、对比例4对蛋黄颜色有显著影响，其次是对比例组2裂殖壶藻粉组，最不显著的是对比例组1、3裂殖壶藻粉组。
表1不同实验案例的藻粉对蛋黄颜色的影响
注：同列数据肩标不同字母表示差异显著(p<0.05)
表2不同实验案例的藻粉饲料对鸡蛋中dha(g/100g鸡蛋)的影响
实施例中，随着饲料中dha含量的提高，和喂养时间的增加，鸡蛋中的dha含量增加明显，最高可达1克以上。对比例1、3虽dha含量高但颜色提升不明显，对比例2dha含量和颜色都不明显，对比例4与对照组比颜色变化明显，但鸡蛋中dha含量与对照组比较基本没有变化。
最后，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。