本发明属于酵素生产技术领域，具体涉及一种猕猴桃益生菌酵素及其制备方法。
背景技术
酵素指通过微生物对水果蔬菜发酵，提取的一种含生物活性成分的液体。上述生物活性成分包括酶但是不限于酶，包括活性抗氧化成分、生物质化素等，来自发酵参与菌和用于发酵的食材。
合理制作的酵素，所萃取的植物活性物质都是来自于食材，且发酵参与菌更是人体微生态系统的组成部分。因此，酵素的副作用几乎为零，强大的功效，极小的副作用，近年来一直呈爆炸性增长趋势。
猕猴桃也称奇异果，其中含有含有猕猴桃碱、蛋白水解酶、单宁果胶和糖类等有机物，以及多种微量元素、氨基酸和维生素，还含有良好的可溶膳食纤维，其营养价值远超其他水果，但是猕猴桃的存储期不长，一旦出现产量过剩，就会产生浪费。猕猴桃现有的进一步开发有猕猴桃酒(cn105713764a)、猕猴桃果酱(cn100586313)但这些产品对原料中营养物质成分的提取不够充分。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种猕猴桃益生菌酵素及其制备方法，解决了传统猕猴桃应用途径窄的问题。
本发明所采用的技术方案为：
一种猕猴桃益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将猕猴桃600-800kg、芋头50-100kg、莴笋100-150kg、百合30-50kg、赤砂糖50kg加入发酵设备中；
s2向发酵设备中继续加入酵母菌1-5g和发酵乳杆菌10-15g进行初发酵，发酵时间为1-3个月；初发酵结束后加入副干酪乳杆菌1-5g、植物乳杆菌10-15g进行第二次发酵，发酵时间5-7个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌5-10g、醋酸菌1-5g继续第三次发酵3-5个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.9-3.6之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到猕猴桃益生菌桃酵素原液。
所述s2中初发酵时，发酵过程定期搅拌，需氧、常温发酵，第二次发酵和第三次发酵时，隔绝空气进行厌氧发酵。
发酵设备为发酵桶。
采用以上制备方法制得的猕猴桃益生菌酵素。
猕猴桃益生菌酵素原液进行灌装得到终产品。
灌装条件：控制室内洁净度达到10万级规定要求，车间工人进入车间前必须洗手、更衣、消毒，严格按灌装机及旋盖机的操作规程进行操作，在灌装进行中随时检查灌装量，封口质量等环节，确保产品符合标准技术要求。在灌装前后将设备及管道进行彻底清洗和消毒；灌装为瓶装，瓶及瓶盖清洗：瓶子先用纯净水翻转冲洗，再用洁净压缩空气吹干，盖子用消毒柜进行消毒处理，保证达到无菌要求。
优选以下技术方案：在s2中，专用发酵桶为850个，每个发酵桶容量1200升(每次加入原料总量1000kg左右)，电子称2台，每发酵桶装料量1吨，发酵温度为常温，车间密封，保持洁净，常温发酵，发酵时间为24个月。
在s5中，静置纯化罐为50个，每个静置纯化罐容量为30吨，使用材质为食品级塑料材质。
灌装时，灌装机的型号为td-8，灌装机的数量为2套；旋盖机的型号td-sp1，旋盖机的数量为2套，灌装速度为2000瓶/小时，瓶器为30ml玻璃瓶。
瓶及瓶盖清洗时，理瓶器2台；全自动翻转冲瓶机2台，全自动翻转冲瓶机的型号为cp-15；消毒柜1台，消毒柜的型号为ztp-390。
与现有技术相比，本发明的有益技术效果是：
本发明以猕猴桃、芋头、莴笋、百合为主要原料，原料的营养成分在科学合理的搭配上更加丰富，在益生菌的发酵作用下，同时严格控制益生菌的种类、用量以及发酵时长，保证原料的发酵更加充分，发酵过程分为三个阶段且根据不同阶段的特性分别加入不同的菌种，使发酵具有层次更加合理；特别是二次发酵阶段，自然发酵，不再增加糖源，最终使得原料中的营养物质、活性物质、抗氧化物质能够完全释放分解出来，最终得到一种营养丰富、可预防便秘的猕猴桃益生菌酵素，增加了猕猴桃益生菌桃酵素营养价值。
本发明制得的猕猴桃益生菌酵素不含任何食品添加剂，安全健康，无毒副作用，可放心享用，适宜于各类人群；解决了传统猕猴桃应用途径窄、产品形态单一问题。
具体实施方式
下面结合实施例来说明本发明的具体实施方式，但以下实施例只是用来详细说明本发明，并不以任何方式限制本发明的范围。
以下实施例中原料加入发酵桶之前经过清洗、吹干、紫外消毒、粉碎。
实施例1：一种猕猴桃益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将猕猴桃700kg、芋头50kg、莴笋150kg、百合50kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌5g和发酵乳杆菌15g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为2个月；初发酵结束后加入副干酪乳杆菌5g、植物乳杆菌15g进行第二次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间6个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌10g、醋酸菌5g继续第三次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间4个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.9-3.6之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到猕猴桃益生菌桃酵素原液。
实施例2：一种猕猴桃益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将猕猴桃800kg、芋头50kg、莴笋100kg、百合30kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌1g和发酵乳杆菌15g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为1个月；初发酵结束后加入副干酪乳杆菌1g、植物乳杆菌15g进行第二次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间7个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌5g、醋酸菌5g继续第三次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间3个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.9-3.6之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到猕猴桃益生菌桃酵素原液。
实施例3：一种猕猴桃益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将猕猴桃600kg、芋头100kg、莴笋150kg、百合50kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌5g和发酵乳杆菌10g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为3个月；初发酵结束后加入副干酪乳杆菌5g、植物乳杆菌10g进行第二次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间5个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌10g、醋酸菌1g继续第三次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间5个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.9-3.6之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到猕猴桃益生菌桃酵素原液。
实施例4：一种猕猴桃益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：
s1将猕猴桃700kg、芋头80kg、莴笋120kg、百合40kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；
s2向发酵桶中继续加入酵母菌3g和发酵乳杆菌12g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为2个月；初发酵结束后加入副干酪乳杆菌3g、植物乳杆菌12g进行第二次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间6个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌8g、醋酸菌3g继续第三次发酵，发酵桶覆膜密封，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间4个月；
s3三阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.9-3.6之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；
s4将发酵完成的发酵液进行过滤；
s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到猕猴桃益生菌桃酵素原液。
实施例1-4得到猕猴桃益生菌酵素原液后，需按国标gb/t31121检测微生物指标、重金属指标达标，其他指标达到行业标准t/cbfia08003-2016，然后猕猴桃益生菌酵素原液经专用管道输送至灌装车间，灌装得到猕猴桃益生菌酵素成品。
效果实验：实施例1-2中所制得的猕猴桃益生菌酵素排便功效验证
实验对象健康成年大鼠40只，雌雄各半，体重178-210g。标准饲料适应性饲养7d后开始实验。
实验试剂与仪器
番泻叶浸剂制备：称取番泻叶5.0g，加100ml沸水浸泡25min，冷却后以纱布过滤药液，弃药渣不用，将滤液定量至1000ml，得到含生药质量浓度为5mg/ml的番泻叶浸液，115℃15min灭菌后放置4℃冰箱备用。
盐酸洛哌丁胺
sw-cj-ⅱ型双人净化工作台，全自动高压灭菌锅，恒温培养箱，电热鼓风干燥箱，台式冷冻离心机。
大鼠便秘模型的制作
将20只雄性大鼠称重，随机将其中4只作为正常对照组给予生理盐水，其余16只每天灌胃1ml盐酸洛哌丁胺生理盐水溶液(按3.0mg/kg体质量将盐酸洛哌丁胺溶于1ml质量分数为0.9％生理盐水)5d制造便秘大鼠模型。雌性大鼠的造模方法同雄性。
实验大鼠的分组及处理
将造模成功的16只雄性大鼠随机平均分为4组：模型对照组(便秘组)、阳性对照组(番泻叶组)、实验组1-2组，正常对照组大鼠不变，总共5组。其中正常对照组和模型对照组按2.0ml/(kg.d)的剂量持续灌胃质量分数为0.9％生理盐水9d，阳性对照组相同剂量给予番泻叶浸剂，实验组1-2组以相同剂量给予实施例1-2中制得的猕猴桃酵素样品。雌性大鼠分组及处理方法同雄性。
实验数据的记录
记录大鼠各实验阶段的每日粪便粒数、粪便鲜重与干重，并计算粪便含水量，按下式计算
式中：mf为粪便鲜重；md为粪便干重。
数据统计与处理
所有计量数据均以
各实验组大鼠每日排便粒数和粪便含水量的影响(
注：a为与正常对照组比较，p＜0.05；b为与模型对照组比较，p＜0.05；
c为与阳性对照组比较，p＜0.05；d为雌性与雄性比较，p＜0.05.结果与讨论
便秘时排便量减少、粪便干硬，因此可用大鼠每日排便粒数和粪便含水量作为便秘情况的评价指标。盐酸洛哌丁胺主要通过抑制肠道蠕动来抑制排便，使排便量减少，可用于便秘模型的制造。由表可知，模型组雌、雄大鼠的每日排便粒数均显著少于正常对照组(p＜0.05)，说明造模成功。实验组1(实施例1样品)雄性大鼠的每日排便粒数比模型对照组、正常对照组显著增高(p＜0.05)，并与阳性对照组效果相当(p＞0.05)；雌性大鼠实验组2排便粒数与实验组1一致(p＞0.05)，均显著高于模型对照组、正常对照组和阳性对照组(p＜0.05)。说明实验组1-2能显著增加便秘大鼠的每日排便量，且优于阳性对照药番泻叶。粪便含水量的结果显示，与正常对照组相比，其它各组的粪便含水量均显著增加(p＜0.05)，实验组1-2组未显示出明显优势，说明粪便含水量的增加与盐酸洛哌丁胺的作用有关，而与实验组1-2组样品无关。
综上说明，实施例1-2所制得的猕猴桃益生菌酵素能够显著改善便秘大鼠排便情况，能显著增加便秘大鼠的每日排便量，且以实施例1所制得的猕猴桃益生菌酵素效果最为显著。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。