本发明属于海水养殖技术领域，具体涉及一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂及其投喂方法。
背景技术：
鱼类在营养方面占重要地位，其富含不同维生素(d、a和b)以及矿物质(包括钙、碘、锌、铁和硒)，鱼是易于消化的富含所有必需氨基酸的高质量蛋白的来源，为人类提供丰富的动物营养蛋白。目前，海水养殖提高了水产品的产量，为经济增长贡献了力量，对天然渔业资源的捕捞压力有一定的缓解。自20世纪90年代，我国的海洋鱼、贝类等的产量大幅度增长，海水养殖产业的发展取得令人瞩目的成就，极大地提升了海洋渔业在国民经济中的地位。但病害、种质、养殖生态环境这三大问题已经成为制约我国海水养殖业健康发展的瓶颈，尤其是病害已成为当前最突出的问题，函待解决。在我国，政府对用来预防和治疗水产动物疾病的抗生素类药物有着严格的管理，而且抗生素的使用容易产生抗药性，易形成耐药菌株，对人类的食品安全造成威胁，同时药物在水中的积累会对养殖环境造成污染，进一步破坏养殖生态环境，形成恶性循环。加之欧美日本等主要水产品进口国对水产品的检验日趋严格，因此，提高鱼类自身的免疫力，减少或停止使用药物，提高养殖对象品质，成为当前水产养殖的研究热点。提高鱼类免疫力的饲料添加剂的使用有着巨大的开发潜力和市场前景，并且已有的研究表明，使用提高鱼类免疫力的饲料添加剂可增强鱼类的自身免疫力，提高疾病抵抗力。
近年来，随着免疫增强剂不断被市场认可和接受，提高鱼类免疫力的饲料添加剂开发也成为国内外学者的研究热点，种类也越来越多，其有效成分可以分为如下几类：多肽及蛋白质类，如白细胞介素、干扰素和乳铁蛋白等；多糖类，如葡聚糖，壳聚糖和脂多糖等；核苷酸类，如多聚核苷酸等；维生素类，如va、vd、ve等；微量元素类，如硒、锗、锂等；抗生素类，如伊维菌素。预防是提高鱼类免疫力的饲料添加剂的主要作用，在鱼类产生应激、生产性能受损或受病原菌侵害之前应用较好。此外，给药期的长短是其发挥作用的另一个关键因素。鱼类不同免疫指标在投喂提高鱼类免疫力的饲料添加剂后，达到峰值的时间不同，而且维持峰值的时间也不尽相同，长期口服使用提高鱼类免疫力的饲料添加剂，反而会降低免疫应答反应，这可能是鱼体中存在一种对免疫刺激剂的负反馈系统，使得免疫水平回到初始的状态。因此如何选择合适的提高鱼类免疫力的饲料添加剂及其投喂方法显得尤为重要。
技术实现要素：
本发明的一个目的在于提供一种结合功能性寡糖和有机铬配合物，在机体内可参与糖代谢的同时提高动物的免疫功能和抗应激能力的增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，其所用的有机铬配合物含有至少两种氨基酸，稳定性适中，利于储存和海水养殖鱼类吸收利用。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括功能性寡糖和至少一种含有至少两种氨基酸配位体的有机铬配合物，上述至少两种氨基酸配位体以配位键与有机铬配合物的中心离子相结合。本发明饲料添加剂结合功能性寡糖和有机铬配合物，一方面能够通过选择性的促进肠道内某一种或几种微生物的生长、增殖或増强某些特殊物质的活性，改善肠道环境和肠道组织形态，可激活吞噬细胞的吞噬活力，同时能增加海水养殖鱼类机体的免疫原性，提高机体的非特异性免疫应答反应和抗病的能力，最终达到提高海水养殖鱼类机体免疫力的作用；另一方面可以显著降低血清中皮质醇的含量，抑制蛋白质分解，阻碍糖异生使代谢向脂肪沉积和糖原合成的方向进行，增加血清中免疫球蛋白的数量，从而增强机体的免疫功能，且还能提高海水养殖鱼类对糖类的利用，改善了蛋白质消化率和饲料转化效率，提高海水养殖鱼类的生长。
作为优选，至少两种氨基酸选自蛋氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸或组氨酸。目前有机铬上含有的氨基酸主要有一种，而含有至少两种氨基酸的有机铬未曾报道，本发明的有机铬配合物含有至少两种氨基酸，具有较高的吸收利用率，被摄取后能够为海水养殖鱼类提供铬(ⅲ)的同时补充对机体起不同作用的氨基酸，能形成一些含有金属元素的酶参与了激素的形成，促进饲料中营养成分的消化代谢，协助提高海水养殖鱼类的机体免疫力，从而促进海水养殖鱼类的生长和改善饲料利用率。
作为优选，有机铬配合物的配位体还包括烟酸类或羧酸类或单糖类。铬(ⅲ)的氧化态稳定性较强，和有机配位体的结合能力强，可根据需要选择性地结合不同的配位体，使得结合形成的有机铬配合物具有不同配位体的生物活性，不同配位体间能够发挥协同作用，在海水养殖鱼类机体内可发挥与gtf相似的生物学效应，处于gft活性中心的铬(ⅲ)离子周围有6个空轨道，可以形成6个共价结合位点，在机体内可参与糖代谢的同时提高动物的免疫功能和抗应激能力。
作为优选，有机铬配合物的配位体的制备方法为：将配位体和crcl3·6h2o混合后加入超纯水，微波加热固相合成反应完成后，抽滤，烘干，即得机铬配合物的配位体。该制备方法采用微波加热固相合成技术，比传统加热快数倍乃至数千倍，微波加热能增加反应物分子的活性，提高反应分子的碰撞频率，提高了反应的平均能量，减少反应所需要的活化能，显著加快化学反应速率；同时微波加热对有机配位体和铬离子的氧化和破坏作用小，对物质结构稳定性起到了保护，提高有机铬配合物的产率。
进一步优选，微波加热固相合成反应中加入柠檬酸钠和d-丙氨酸。机铬配合物合成过程中反应溶液的ph值较低时，h+与铬(ⅲ)离子会竞争供电基团，不利于螯合物的生成，同时h+还与供电基团争夺铬(ⅲ)离子生成羟基化合物cr(oh)3，反应溶液的ph值较高时，铬(ⅲ)离子发生水解，形成氢氧化物沉淀，而柠檬酸钠和d-丙氨酸的存在能够保持反应溶液的ph维持在5.0-6.0，使有机铬配合物有最大的产率，同时能协助得到的有机铬配合物的稳定性适中，利于储存和海水养殖鱼类吸收利用，提高增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的利用率。
作为优选，功能性寡糖选自果寡糖、壳聚寡糖、半乳糖、或异麦芽低聚糖葡萄糖。据功能的不同寡糖又可分为普通寡糖和功能性寡糖，例如像海藻糖和麦芽糖能被机体消化吸收并为机体提供能量的一类物质被称为普通型寡糖，而功能性寡糖是一些不能完全被动物消化但可在肠道内起特殊作用的一类物质，功能性寡糖是通过选择性的促进肠道内某一种或几种微生物的生长、增殖或増强某些特殊物质的活性，比如促进双歧杆苗、乳酸菌等的增殖，最终达到促进机体健康的作用。
作为优选，功能性寡糖和有机铬配合物的重量比为100:0.2-0.4。
进一步优选，功能性寡糖和有机铬配合物的重量比为1:0.25-0.35，或者1:0.28-0.33。
作为优选，饲料添加剂还包含一种或多种添加剂，添加剂选自多肽、蛋白质、维生素、多糖、微量元素、抗生素及它们中的两种或更多种的组合。
本发明的另一个目的在于针对现有技术提供一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的投喂方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的投喂方法，将饲料添加剂添加至饵料中进行投喂，饲料添加剂在饵料中的添加量为：有机铬配合物含量至0.05-0.15mg/kg。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明饲料添加剂结合功能性寡糖和有机铬配合物，能增加海水养殖鱼类机体的免疫原性，提高机体的非特异性免疫应答反应和抗病的能力，最终达到提高海水养殖鱼类机体免疫力的作用，且还能提高海水养殖鱼类对糖类的利用，改善了蛋白质消化率和饲料转化效率，提高海水养殖鱼类的生长；本发明饲料添加剂用有机铬配合物稳定性适中，利于储存和海水养殖鱼类吸收利用，提高增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的利用率，含有至少两种氨基酸，具有较高的吸收利用率，被摄取后能够为海水养殖鱼类提供铬(ⅲ)的同时补充对机体起不同作用的氨基酸，能形成一些含有金属元素的酶参与了激素的形成，协助提高海水养殖鱼类的机体免疫力。
本发明采用了上述技术方案提供一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂及其投喂方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
本文中所用的术语“包括”、“包含”、“具有”、“有”、“含有”或其任何其他变体意在涵盖非排它性的包括。例如，包含一系列要素的组合物、工艺、方法、制品或设备并不一定只限于那些要素，而是还可以包含这些组合物、工艺、方法、制品或设备所未明确列举的要素或所固有的其他要素。
术语“包含”旨在包括术语“基本上由...组成”和“由...组成”所涵盖的实施方案。类似地，术语“基本上由...组成”旨在包括术语“由...组成”所涵盖的实施方案。
除非另有指示，全部的百分比、份数、比率等是按重量计的。
当以范围、优选范围或一系列上限优选值和下限优选值给出数量、浓度或其他数值或参数时，应理解其具体公开了由任何较大的范围限值或优选值和任何较小的范围限值或优选值的任何一对数值所形成的所有范围，而无论这些范围是否分别被公开。例如，当描述“1至5”的范围时，所描述的范围应解释为包括“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等范围。除非另有说明，在本文描述数值范围之处，所述的范围意图包括范围端值和范围内的所有整数和分数。
此外，除非明确表示相反含义，“或”是指包容性的“或”而非排它性的“或”。例如，以下任一条件都适用条件a“或”b：a为真(或存在)且b为假(或不存在)，a为假(或不存在)且b为真(或存在)，以及a和b都为真(或存在)。
另外，在本发明的要素或组分之前的词语“一”和“一种”意图表示对于该要素或组分的出现(即发生)次数没有限制性。因此，“一”或“一种”应理解为包括一种或至少一种，除非明确表示数量为单数，否则单数形式的所述要素或组分也包括复数的情况。
体现发明特征与优点的典型实施例将在以下的说明中详细叙述。应理解的是本发明能够在不同的实施例上具有各种的变化，其皆不脱离本发明的范围，且其中的描述在本质上是当作说明之用，而非用以限制本发明。
在饲料中添加无机铬的金属矿物质的时候，由于其饲养条件变异较大，温度、湿度、病原应急等因素，会使无机矿物质吸收效率低下，并且大量排泄，不仅危害机体，还破坏了环境。主要问题如下：稳定性差：当在饲料中添加的无机金属矿物质的时候，金属矿物质直接会相互反应，破坏饲料中的维生素等物质。一些高价态的元素会氧化不饱和的脂肪，使脂肪酸败，动物采食后刺激胃肠道，造成动物肠道有害菌数量增加，生长被抑。并且饲料中的草酸根、植酸根等分子或者羟基等阴性离子也会和金属离子形成难溶物，对动物体肠道造成破坏，使动物生长受阻；动物吸收率低：无机金属矿无元素进入小肠后，需要用特殊的载体运输到体内，不同的金属元素之间会竞争载体，抑制元素的有效吸收和利用。无机铬的吸收率仅有0.3％～4％，而有机铬的吸收率可以高达25％-30％。由于无机矿物元素添加剂的种种弊端，使得有机矿物元素添加剂越来越受到养殖户的欢迎。
gtf是铬(ⅲ)离子的活性形式，通过增强胰岛素的作用来发挥其生物学功能。到目前为止，gtf与铬(ⅲ)离子形成的化学物还没与很明确的结构，分析其成分主要是含有铬(ⅲ)离子、烟酸、谷氨酸、甘氨酸、半胖氨酸，并由此推测gtf可能是以烟酸-铬(ⅲ)离子-烟酸为中心，以三种氨基酸为配体形成的螯合物。与几种有机铬化合物的结构相比较可发现，铬(ⅲ)离子都是处于中心位置，因此有机铬化合物在机体内可发挥与gtf相似的生物学效应。处于
gft活性中心的铬(ⅲ)离子离子周围有6个空轨道，可以形成6个共价结合位点。当胰岛素与靶细胞结合时，其中铬(ⅲ)离子的2个结合位点与靶细胞膜上的巯基形成共价键，胰岛素a链上的二硫键则与另外2个结合位点形成共价键，将胰岛素与靶细胞紧密地连接在一起，使得胰岛素与靶细胞膜表面受体的结合，从而将胰岛素信号向下游传递。因此，可以认为gtf是胰岛素向靶细胞之间传递信号的桥梁，即胰岛素必须通过gtf来对靶细胞发挥作用。
本申请公开的一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括功能性寡糖和至少一种含有至少两种氨基酸配位体的有机铬配合物，其中，至少两种氨基酸配位体以配位键与有机铬配合物的中心离子相结合。该饲料添加剂结合功能性寡糖和有机铬配合物，一方面能够通过选择性的促进肠道内某一种或几种微生物的生长、增殖或増强某些特殊物质的活性，改善肠道环境和肠道组织形态，可激活吞噬细胞的吞噬活力，同时能增加海水养殖鱼类机体的免疫原性，提高机体的非特异性免疫应答反应和抗病的能力，最终达到提高海水养殖鱼类机体免疫力的作用；另一方面可以显著降低血清中皮质醇的含量，抑制蛋白质分解，阻碍糖异生使代谢向脂肪沉积和糖原合成的方向进行，增加血清中免疫球蛋白的数量，从而增强机体的免疫功能，且还能提高海水养殖鱼类对糖类的利用，改善了蛋白质消化率和饲料转化效率，提高海水养殖鱼类的生长。
上述至少两种氨基酸选自蛋氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸或组氨酸。目前有机铬上含有的氨基酸主要有一种，而含有至少两种氨基酸的有机铬未曾报道，该有机铬配合物含有至少两种氨基酸，具有较高的吸收利用率，被摄取后能够为海水养殖鱼类提供铬(ⅲ)的同时补充对机体起不同作用的氨基酸，能形成一些含有金属元素的酶参与了激素的形成，促进饲料中营养成分的消化代谢，协助提高海水养殖鱼类的机体免疫力，从而促进海水养殖鱼类的生长和改善饲料利用率。
上述有机铬配合物的配位体还包括烟酸类或羧酸类或单糖类。铬(ⅲ)的氧化态稳定性较强，和有机配位体的结合能力强，可根据需要选择性地结合不同的配位体，使得结合形成的有机铬配合物具有不同配位体的生物活性，不同配位体间能够发挥协同作用，在海水养殖鱼类机体内可发挥与gtf相似的生物学效应，处于gft活性中心的铬(ⅲ)离子周围有6个空轨道，可以形成6个共价结合位点，在机体内可参与糖代谢的同时提高动物的免疫功能和抗应激能力。
上述有机铬配合物的配位体的制备方法为：将配位体和crcl3·6h2o混合后加入超纯水，微波加热固相合成反应完成后，抽滤，烘干，即得机铬配合物的配位体。该制备方法采用微波加热固相合成技术，比传统加热快数倍乃至数千倍，微波加热能增加反应物分子的活性，提高反应分子的碰撞频率，提高了反应的平均能量，减少反应所需要的活化能，显著加快化学反应速率；同时微波加热对有机配位体和铬离子的氧化和破坏作用小，对物质结构稳定性起到了保护，提高有机铬配合物的产率。在此公开的将配位体和crcl3·6h2o混合可通过任何合适的混合方法，如超声或机械搅拌进行混合。
上述微波加热固相合成反应中加入柠檬酸钠和d-丙氨酸。机铬配合物合成过程中反应溶液的ph值较低时，h+与铬(ⅲ)离子会竞争供电基团，不利于螯合物的生成，同时h+还与供电基团争夺铬(ⅲ)离子生成羟基化合物cr(oh)3，反应溶液的ph值较高时，铬(ⅲ)离子发生水解，形成氢氧化物沉淀，而柠檬酸钠和d-丙氨酸的存在能够保持反应溶液的ph维持在5.0-6.0，使有机铬配合物有最大的产率，同时能协助得到的有机铬配合物的稳定性适中，利于储存和海水养殖鱼类吸收利用，提高增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的利用率。
上述功能性寡糖选自果寡糖、壳聚寡糖、半乳糖、或异麦芽低聚糖葡萄糖。据功能的不同寡糖又可分为普通寡糖和功能性寡糖，例如像海藻糖和麦芽糖能被机体消化吸收并为机体提供能量的一类物质被称为普通型寡糖，而功能性寡糖是一些不能完全被动物消化但可在肠道内起特殊作用的一类物质，功能性寡糖是通过选择性的促进肠道内某一种或几种微生物的生长、增殖或増强某些特殊物质的活性，比如促进双歧杆苗、乳酸菌等的增殖，最终达到促进机体健康的作用。
上述功能性寡糖和有机铬配合物的重量比为100:0.2-0.4，作为实施方案，功能性寡糖和有机铬配合物的重量比为1:0.25-0.35，或者1:0.28-0.33。
此外，功能性寡糖和至少一种含有至少两种氨基酸配位体的有机铬配合物，该饲料添加剂还包含一种或多种添加剂，其中添加剂选自多肽、蛋白质、维生素、多糖、微量元素、抗生素及它们中的两种或更多种的组合。例如多肽及蛋白质类可以为白细胞介素、干扰素和乳铁蛋白等；维生素类可以为va、vd、ve等；多糖类可以为葡聚糖，壳聚糖和脂多糖等；微量元素类可以为硒、锗、锂等；抗生素类可以为伊维菌素。
本申请还公开了一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的投喂方法，其特征在于：将饲料添加剂添加至饵料中进行投喂，饲料添加剂在饵料中的添加量为：有机铬配合物含量至0.05-0.15mg/kg。
下面，结合具体实施例对本发明一实施方式的一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂及其投喂方法作进一步说明。
实施例1：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括功能性寡糖，含有蛋氨酸和半胱氨酸配位体的有机铬配合物，上述两种氨基酸配位体以配位键与有机铬配合物的中心离子相结合。
上述有机铬配合物的配位体还包括烟酸，其中有机铬配合物的配位体的制备方法为：称取2.1g甘氨酸、1.4g脯氨酸、2.2g柠檬酸和1.5gcrcl3·6h2o，混合后加入60ml超纯水，在微波功率580w下微波加热固相合成反应180s，反应完成后，加入适量蒸馏水，抽滤，滤渣于100℃烘箱中烘干，即得机铬配合物的配位体，其中反映过程中加入柠檬酸钠和d-丙氨酸，使得反应体系的ph维持在5.0-6.0。
上述功能性寡糖为果寡糖。
上述饲料添加剂中功能性寡糖和有机铬配合物的1:0.33。
上述饲料添加剂还包含va、ve、葡聚糖，其原料的重量份为：功能性寡糖10份、有机铬配合物0.33份、va2份、ve0.5份、葡聚糖6份。
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的投喂方法，将饲料添加剂添加至饵料中进行投喂，饲料添加剂在饵料中的添加量为：有机铬配合物含量至0.15mg/kg。
实施例2：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括如下成分及其重量份：功能性寡糖10份、有机铬配合物0.3份。其中功能性寡糖为重量比为1:0.37的果寡糖和壳聚寡糖。
其中有机铬配合物的配位体的制备方法为：称取蛋氨酸、半胱氨酸、烟酸和crcl3·6h2o，使其摩尔比为2:2:2:1，混合后按料液比为1:6(g/ml)加入超纯水，在微波功率600w下微波加热固相合成反应160s，反应完成后，加入适量蒸馏水，抽滤，滤渣于100℃烘箱中烘干，即得机铬配合物的配位体，其中反映过程中加入柠檬酸钠和d-丙氨酸，使得反应体系的ph维持在5.5。
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂的投喂方法，将饲料添加剂添加至饵料中进行投喂，饲料添加剂在饵料中的添加量为：有机铬配合物含量至0.1mg/kg。
实施例3：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括如下成分及其重量份：功能性寡糖10份、烟酸铬配合物0.33份、va2份、ve0.5份、葡聚糖6份。其中功能性寡糖为重量比为1:0.37的果寡糖和壳聚寡糖。
实施例4：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括如下成分及其重量份：功能性寡糖10份、柠檬酸铬配合物0.33份、va2份、ve0.5份、葡聚糖6份。其中功能性寡糖为重量比为1:0.37的果寡糖和壳聚寡糖。
实施例5：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括如下成分及其重量份：功能性寡糖10份、蛋氨酸铬配合物0.33份、va2份、ve0.5份、葡聚糖6份。其中功能性寡糖为重量比为1:0.37的果寡糖和壳聚寡糖。
实施例6：
一种增强海水养殖鱼类免疫力的饲料添加剂，包括如下成分及其重量份：功能性寡糖10份、谷氨酸铬配合物0.33份、va2份、ve0.5份、葡聚糖6份。
实施例7：
饲料添加剂对大菱鲆的海水养殖试验，试验共进行60d，具体操作及要求如下。
1)养殖品种：1克左右的大菱鲆稚鱼4200条，随机分配为五组：网箱1、网箱2、网箱3、网箱4、网箱5、网箱6、网箱7，各组总重相当，每组网箱总放养大菱鲆稚鱼600条；
2)养殖条件：环境因素、化学因素和生物因素基本相同的同一水域的网箱；
3)养殖管理：其它条件基本相同，所不同的是网箱1每天投喂的饲料中添加有实施例1产品；网箱2每天投喂的饲料中添加有实施例2产品；网箱3每天投喂的饲料中添加有实施例3产品；网箱4每天投喂的饲料中添加有实施例4产品；网箱5每天投喂的饲料中添加有实施例5产品；网箱6每天投喂的饲料中添加有实施例6产品；网箱7(对照组)每天投喂的饲料中未添加添加剂；
4)结果比较：养殖实验持续3个月，然后计算大菱鲆的成活条数、成活率，实验结果如表1所示。
表1饲料添加剂对大菱鲆的海水养殖试验结果
由表1可知，网箱1和网箱2的大菱鲆的成活率远远高于网箱3、网箱4、网箱5、网箱6、网箱7，表明饲喂实施例1和实施例2饲料添加剂的免疫效果好，在增强海水养殖鱼类免疫力方面起到了较好的作用，说明本发明实施例得到的有机铬配合物在增强海水养殖鱼类免疫力方面的效果。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。