本发明属于葎草深加工领域，具体涉及一种提高动物抗性的葎草提取物制备方法。
背景技术：
葎草来源广，中国除新疆、青海外，其他各省区都有生长分布，常生于沟边、荒地、废墟、林缘边，收集方便。葎草又名拉拉秧、拉拉藤、割人藤，其茎、枝、叶柄均有倒钩刺，直接饲喂影响动物的适口性。每年葎草3-4月出芽，7-8月的花期，9-10月果期，停止生长。如果直接将葎草作为饲料：只有青饲、青贮或者晒制干草，这样葎草的用量大。通过对葎草进行深加工，能获得大量的葡萄糖苷、胆碱、葎草酮等生物活性成分，能提高动物机体免疫力，增强抗病能力和抗应激能力，减少抗生素的用量，提高畜禽产品的安全性，满足人们对高品质畜禽产品的需求；能提高动物的生产性能，提高畜禽产品产量和质量，增加经济效益。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种提高动物抗性的葎草提取物制备方法，其以葎草为原料，采用乙醇超声浸提，过滤，浓缩，离心，真空冷冻干燥后制得，所制备的葎草乙醇提取物有利于增加肠道黏膜免疫相关细胞的数量，保护肠道黏膜的完整性与稳定性；能提高血液淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬活性，提高机体免疫功能。作为畜禽饲料添加剂，无毒副作用，一方面可以预防畜禽多种疾病，增强畜禽体质。另一方面提高畜禽生长性能，提高饲料转化率。
为了达成上述目的，本发明采用的主要技术方案如下：
其具体步骤如下：
葎草原料：9～10月采集2～3年生，2～4米长的新鲜葎草，全草入药。新鲜葎草采集后，自然晾晒，铡刀切碎至1寸长，置于烘箱中50～60℃烘至茎叶变脆为止。采用植物粉碎机粉碎，过100目筛，收集备用。
葎草浸提：浸提3次，准确称取一定量的葎草粉末，置于蓝盖试剂瓶中，加入70～80%的乙醇，每次料液质量体积比分别为1g：10～20ml，浸泡24～48h后，超声温度50-60℃，功率360～480w，时间30～40min，合并浸提液，用一层中速滤纸在-0.08mpa下真空抽滤，功率370w。
浓缩：循环水真空泵空压-0.08mpa，旋转蒸发仪35-45℃，功率1.0kva浓缩，时间4～6h，获得浓缩液。
离心：用离心管，装同等浓缩液，对称放入离心机，3000r/min，离心10min，取上清液，弃掉底部沉淀。
干燥：取离心上清液于容器中，占容器量的1/5，容器口呈透气状态。先在常规冰箱-20℃冻存48h后，再放入超低温冰箱冻存24h，再迅速转移置真空冷冻干燥器的隔板上，冻干功率为1.84kva，冻干时间为3～4d，最后得提取物冻干粉末。
本发明的优点
本提取工艺是由传统的细粉、醇提结合超声波现代提取工艺，综合了传统与现代工艺的优点：提取时间短、成本低、杂质少、纯度高等。中药有效成分的溶出速度与药物粉碎度有关，100目属于细粉，细粉>粗粉>颗粒。采用了亲水性的有机溶剂：乙醇提取法，乙醇的溶解性能比较好，对中草药细胞的穿透能力较强，亲水性的成分和难溶于水的亲脂性成分，在乙醇中的溶解度都比较大。用乙醇提取用量少，提取时间短，溶解出的水溶性杂质也少。而且乙醇毒性小，价格便宜，来源方便，可回收反复使用，而且乙醇的提取液不易发霉变质，易于保存。超声波提取法能加速胞内有效物质的释放、扩散和溶解，提取效率高、时间短、温度低，范围广。
随着人们追求健康食品意识的增强，畜产品的安全问题备受关注。发展绿色健康养殖，生产无毒、无害的畜产品，解决肉类产品中抗生素、激素和药残等问题，天然药物的开发与研究，已成为现在及未来畜牧业发展的研究方向。葎草营养价值丰富，含有蛋白质，矿物质、微量元素、维生素、氨基酸等，具有平衡动物营养，加速动物生长和调节生理机能等作用，且含大量生物活性物质，如多糖、黄酮类化合物、生物碱类，具有天然药物功能，能增强机体的免疫功能，提高抗病力，增强抗应激能力。葎草乙醇提取物具有广泛的药理作用，如抗炎、抗氧化、消除自由基、抗微生物、促进消化、增强免疫等功能。葎草乙醇提取物按体重灌胃小鼠1次/d，连续30d，结果表明：葎草乙醇提取物能增加小鼠十二指肠黏膜上皮内淋巴细胞数量；能诱导小鼠十二指肠绒毛杯状细胞数量及分泌黏液增多；可增加十二指肠黏膜中的肥大细胞数量。葎草乙醇提取物能增加肠道黏膜免疫相关细胞的数量，保护肠道黏膜的完整性与稳定性，提高机体免疫力。同时，葎草乙醇提取物对小鼠淋巴细胞转化率有明显的促进作用；能明显提高小鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，对小鼠巨噬细胞的吞噬活性有促进作用，能提高小鼠的特异性免疫力和非特异性免疫功能，进而提高机体的免疫能力。
具体实施方式
采用本制备方法，能提高提取率及纯度，缩短提取时间，提取温度更低，对遇热不稳定的有效成分具有保护作用，同时大大节能耗能。本法应用范围广、操作简单易行、运行成本低，杂质少，纯度高。
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例一
葎草原料：9月采集2年生，2.5米长的新鲜葎草，全草入药。新鲜葎草采集后，自然晾晒，铡刀切碎至1寸长左右，置于烘箱中50℃烘至茎叶变脆为止。采用植物粉碎机粉碎，过100目筛，收集备用。
葎草浸提：浸提3次，准确称量20g葎草粉末，置于蓝盖试剂瓶中采用70%乙醇，料液质量体积比分别为1：20、1：15、1：10，浸泡24h后，超声波55℃，功率360w，时间30min，用20克料得浸提液约900ml。
过滤：合并3次浸提液，用一层中速滤纸置于布氏漏斗(100ml)内，-0.08mpa真空泵抽滤，功率370w，期间更换1次滤纸，抽滤时间为1h，过滤得到720ml溶液。
浓缩：循环水真空泵空压-0.08mpa,旋转蒸发仪45℃，功率1.0kva浓缩回收乙醇，浓缩6h，720ml浓缩到80ml；
离心:用10ml的玻璃离心管，装液8ml，对称放入离心机，3000r/min，离心10min，取上清液5ml，弃掉底部沉淀3ml，得澄清液48ml。
干燥：取2ml上清液于西林瓶中，塑料瓶盖呈半盖状态，先在常规冰箱-20℃冻存48h，冻成冰块后，再放超低温冰箱-80℃冻存24h。打开真空冷冻干燥器（alphr2-4ldplus,真空泵re-6）暖泵30min后，迅速将预冻的西林瓶放置在隔板上，罩上有机玻璃罩，选择mode-maindrying(主加热)，关闭所有阀门（包括橡胶阀和放气阀），冻干功率为1.84kva，时间3d，最后得到提取物干粉4.2克，提取率为21%。
实施例二
葎草原料：10月采集3年生，3.5米长的新鲜葎草，全草入药。新鲜葎草采集后，自然晾晒，铡刀切碎至1寸长左右，置于烘箱中60℃烘至茎叶变脆为止。采用植物粉碎机粉碎，过100目筛，收集备用。
葎草浸提：浸提3次，准确称量20g葎草粉末，置于蓝盖试剂瓶中采用80%乙醇，料液质量体积比分别为1：20、1：15、1：10，浸泡48h后，超声波60℃，功率480w，时间40min，用20克料得浸提液约900ml。
过滤：合并3次浸提液，用一层中速滤纸置于布氏漏斗(100ml)内，-0.08mpa真空泵抽滤，功率370w，期间更换1次滤纸，抽滤时间为1h，过滤得到660ml溶液。
浓缩：循环水真空泵空压-0.08mpa,旋转蒸发仪45℃，功率1.0kva浓缩回收乙醇，浓缩5h，660ml浓缩到45ml；
离心:用10ml的玻璃离心管，装液9ml，对称放入离心机，3000r/min，离心10min，取上清液5.5ml，弃掉底部沉淀3.5ml，得澄清液26ml。
干燥：取2ml上清液于西林瓶中，塑料瓶盖呈半盖状态，先在常规冰箱-20℃，冻存48h，冻成冰块后，再放超低温冰箱-80℃冻存24h。打开真空冷冻干燥器（alphr2-4ldplus,真空泵re-6）暖泵30min后，迅速将预冻的西林瓶放置在隔板上，罩上有机玻璃罩，选择mode-maindrying(主加热)，关闭所有阀门（包括橡胶阀和放气阀），冻干功率为1.84kva，时间4d，最后得到提取物干粉约4克，提取率为20%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。