本发明属于饲料
技术领域：
，具体涉及植物乳杆菌accc11016在提高苜蓿青贮粗脂肪含量中的应用。
背景技术：
：紫花苜蓿(medicagosativa)是奶牛养殖中应用广泛的优质蛋白类牧草，被誉为牧草之王。我国气候属雨热同季，在夏季降水较多的区域苜蓿收获常与雨季重合，损失较大。青贮作为提升牧草饲用价值的有效手段之一，是解决苜蓿雨季收贮困难的优选方法。苜蓿青贮(alfalfasilage)，柔软多汁、适口性好且消化率高，便于长期保存。粗脂肪在牛的消化道内被分解成甘油和脂肪酸，由小肠吸收，再转化为牛体脂肪和乳脂肪。牛饲料中脂溶性维生素也靠它溶解吸收，因此牛的饲料中必须含有适量的脂肪。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了植物乳杆菌accc11016在提高苜蓿青贮粗脂肪含量中的应用，在制备苜蓿青贮时添加植物乳杆菌accc11016，能够有效地提高苜蓿青贮中粗脂肪的含量，提高苜蓿青贮的饲用品质。为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：本发明提供了植物乳杆菌accc11016在提高苜蓿青贮粗脂肪含量中的应用。优选的，将所述植物乳杆菌accc11016进行发酵后，将得到的发酵液添加到苜蓿中制备苜蓿青贮。优选的，所述植物乳杆菌accc11016发酵液的制备方法包括：将植物乳杆菌accc11016菌液接种到液态发酵培养基中，在30～40℃，80～120rpm的条件下发酵20～28h，得到植物乳杆菌accc11016发酵液；所述液态发酵培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：蛋白胨12g/l，牛肉粉12g/l，酵母粉6g/l，葡萄糖24g/l，磷酸氢二钾2g/l，柠檬酸氢二铵2g/l，乙酸钠5g/l，硫酸镁0.58g/l，硫酸锰0.25g/l和吐温5ml/l，所述液态发酵培养基的ph值为5.8～6.0。优选的，所述植物乳杆菌accc11016菌液的活菌数为1.0×108～1.0×1010cfu/g。优选的，所述接种量为液态发酵培养基总重量的5％～15％。优选的，所述苜蓿青贮的制备方法，包括如下步骤：1)将植物乳杆菌accc11016进行发酵，得到植物乳杆菌accc11016发酵液；2)将苜蓿与所述步骤1)的植物乳杆菌accc11016发酵液混合，得到总混物；3)将所述步骤2)的总混物进行密封发酵40～50d，得到苜蓿青贮。优选的，所述步骤2)中苜蓿与植物乳杆菌accc11016发酵液的质量体积比为1kg∶1.4～1.6ml。优选的，步骤2)中所述混合前还包括将植物乳杆菌accc11016发酵液进行稀释；所述稀释的倍数为3～5倍。优选的，步骤2)中所述混合前还包括将苜蓿切割成2～5cm的苜蓿段。优选的，所述步骤3)中密封发酵的温度为20～30℃。本发明提供了植物乳杆菌accc11016在提高苜蓿青贮粗脂肪含量中的应用。本发明中，在青贮饲料中添加植物乳杆菌accc11016发酵液，可以提高苜蓿青贮中粗脂肪的含量。实施例结果表明在制备苜蓿青贮过程中添加植物乳杆菌accc11016发酵液可以显著提高苜蓿青贮中粗脂肪的含量，相对于对照组1～4提高0.64％～7.6％。具体实施方式本发明提供了植物乳杆菌accc11016在提高苜蓿青贮粗脂肪含量中的应用。在本发明中，所述植物乳杆菌accc11016购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心。在本发明中，优选将所述植物乳杆菌accc11016进行发酵后，将得到的发酵液添加到苜蓿中制备苜蓿青贮。在本发明中，所述植物乳杆菌accc11016发酵液的制备方法优选包括：将植物乳杆菌accc11016菌液接种到液态发酵培养基中，在30～40℃，80～120rpm的条件下发酵20～28h，得到植物乳杆菌accc11016发酵液；所述液态发酵培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：蛋白胨12g/l，牛肉粉12g/l，酵母粉6g/l，葡萄糖24g/l，磷酸氢二钾2g/l，柠檬酸氢二铵2g/l，乙酸钠5g/l，硫酸镁0.58g/l，硫酸锰0.25g/l和吐温5ml/l。在本发明中，所述液态发酵培养基的ph值优选为5.8～6.0，更优选为5.9。本发明对所述液态发酵培养基中各组分的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。在本发明中，所述植物乳杆菌accc11016菌液的活菌数优选为1.0×108～×1.0×1010cfu/g，更优选为1.0×109cfu/g。在本发明中，所述植物乳杆菌accc11016菌液的接种的量优选为液态发酵培养基总重量的5％～15％，更优选为10％。在本发明中，所述植物乳杆菌accc11016菌液的制备方法优选包括将植物乳杆菌accc11016依次进行活化和扩大培养得到。在本发明中，所述活化的方式优选为将植物乳杆菌accc11016在mrs固体斜面培养基上划线，将划线后的培养基在35℃培养至长出菌落。在本发明中，所述活化的次数优选为2次。在本发明中，所述扩大培养的方式优选为将活化后的单菌落接种于mrs液体培养基中，在35℃，120rpm培养过夜，得到植物乳杆菌accc11016菌液。在本发明中，所述发酵的温度优选为30～40℃，更优选为35℃；所述发酵的搅拌速度优选为80～120rpm，更优选为100rpm；所述发酵的时间优选为20～28h，更优选为24h。在本发明中，所述苜蓿青贮的制备方法，优选包括如下步骤：1)将植物乳杆菌accc11016进行发酵，得到植物乳杆菌accc11016发酵液；2)将苜蓿与所述步骤1)的植物乳杆菌accc11016发酵液混合，得到总混物；3)将所述步骤2)的总混物进行密封发酵40～50d，得到苜蓿青贮。本发明将植物乳杆菌accc11016进行发酵，得到植物乳杆菌accc11016发酵液。在本发明中，所述植物乳杆菌accc11016发酵的方法优选采用上述方案所述植物乳杆菌accc11016发酵液的制备方法。得到植物乳杆菌accc11016发酵液后，本发明优选将苜蓿与植物乳杆菌accc11016发酵液混合，得到总混物。在本发明中，所述混合前优选将苜蓿切割成2～5cm的苜蓿段，更优选为4cm。在本发明中，所述苜蓿与植物乳杆菌accc11016发酵液的质量体积比优选为1kg∶1.4～1.6ml，更优选为1kg∶1.5ml。本发明对苜蓿的来源没有特殊限定，采用本领域常规苜蓿即可。本发明实施例中用丹农种子公司提供的北极熊品种，在天津农业资源与环境研究所的“海滨盐碱地绿化土壤改良科研试验基地”种植得到。在本发明中，所述混合前优选将苜蓿青贮发酵剂进行稀释；所述稀释的倍数优选为3～5倍，更优选为4倍。所述稀释用稀释液优选为水。在本发明中，所述混合的方式优选为将苜蓿青贮发酵剂喷洒在苜蓿上。得到总混物后，本发明优选将所述总混物进行密封发酵40～50d，得到苜蓿青贮。在本发明中，所述密封的方式优选为采用聚乙烯塑料进行密封。在密封前优选排出空气。在本发明中，所述密封发酵的温度优选为20～30℃，更优选为25℃。所述密封发酵的时间优选为45d。为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。实施例1用已灭菌的接种环从冻存管中取出植物乳杆菌accc11016，于mrs固体斜面上划线，将划线后的mrs固体培养基置于35℃培养箱中培养出菌落，活化2次后挑取单菌落接于mrs液体培养基中于35℃，120rpm过夜，得到植物乳杆菌accc11016菌液备用。将得到的植物乳杆菌accc11016菌液调整至菌浓度为1.0×109cfu/g后，接种(接种量为液体培养基重量的10％)到液体培养基中(蛋白胨12g/l，牛肉粉12g/l，酵母粉6g/l，葡萄糖24g/l，磷酸氢二钾2g/l，柠檬酸氢二铵2g/l，乙酸钠5g/l，硫酸镁0.58g/l，硫酸锰0.25g/l，吐温5ml，蒸馏水定容到1l；按上述配方配制好液态培养基后，调节ph值至5.9)，在35℃，100rpm的条件下培养24h，得到植物乳杆菌accc11016发酵液。试验用苜蓿为丹农种子公司提供的北极熊品种，种植区域为天津市农业资源与环境研究所的“滨海盐碱地绿化土壤改良科研试验基地”，亩播种量1.2kg。苜蓿于第一茬初花期刈割苜蓿，晾晒24h后(干物质含量29.13±0.75％)，用铡草机将其切割成2～5cm的苜蓿段，用于制作苜蓿青贮。实施例2取实施例1的苜蓿段，将实施例1制备得到的植物乳杆菌accc11016发酵液喷洒在苜蓿段上(苜蓿段与植物乳杆菌accc11016发酵液的质量体积比为1kg∶1.6ml，为保证苜蓿青贮添加的均一性，先将植物乳杆菌accc11016发酵液稀释3倍后再喷洒到苜蓿段上)，装入聚乙烯塑料袋(25cm×35cm)中，每袋300g，设置3个重复，用封口机同时进行抽气和封口，在20℃发酵50d后开袋，分析苜蓿青贮成分。实施例3取实施例1的苜蓿段，将实施例1制备得到的植物乳杆菌accc11016发酵液喷洒在苜蓿段上(苜蓿段与苜蓿青贮发酵剂的质量体积比为1kg∶1.4ml，为保证苜蓿青贮添加的均一性，先将植物乳杆菌accc11016发酵液稀释5倍后再喷洒到苜蓿小段上)，装入聚乙烯塑料袋(25cm×35cm)中，每袋300g，设置3个重复，用封口机同时进行抽气和封口，在30℃发酵40d后开袋，分析苜蓿青贮成分。实施例4取实施例1的苜蓿段，将实施例1制备得到的植物乳杆菌accc11016发酵液喷洒在苜蓿段上(苜蓿段与苜蓿青贮发酵剂的质量体积比为1kg∶1.5ml，为保证苜蓿青贮添加的均一性，先将植物乳杆菌accc11016发酵液稀释4倍后再喷洒到苜蓿段上)，装入聚乙烯塑料袋(25cm×35cm)中，每袋300g，设置3个重复，用封口机同时进行抽气和封口，在25℃发酵45d后开袋，分析苜蓿青贮成分。对比例1除不添加发酵液外，其他操作步骤与实施例4完全相同，制备苜蓿青贮，作为对照组1。采用实施例1的活化、扩大培养及发酵方法制备凝结芽孢杆菌accc10229(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心)发酵液，将制备得到的凝结芽孢杆菌accc10229发酵液和实施例1制备得到的植物乳杆菌accc11016发酵液按照1∶1的质量比混合后，添加到苜蓿中，除发酵液不同外，其他操作步骤与实施例4完全相同，制备苜蓿青贮，作为对照组2。采用实施例1的活化、扩大培养及发酵方法制备凝结芽孢杆菌accc10229(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心)发酵液、植物乳杆菌cicc20765(购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心)发酵液和戊糖片球菌cicc22737(购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心)发酵液，将制备得到的凝结芽孢杆菌accc10229、植物乳杆菌cicc20765发酵液和戊糖片球菌cicc22737发酵液按照1∶1∶1的质量比混合后添加到苜蓿中，除发酵液不同外，其他操作步骤与实施例4完全相同，制备苜蓿青贮，作为对照组3。采用实施例1的活化、扩大培养及发酵方法制备乳酸片球菌cgmcc1.4(购买自中国普通微生物菌种保藏管理中心)发酵液，将上述乳酸片球菌cgmcc1.4发酵液添加到苜蓿中，除发酵液不同外，其他操作步骤与实施例4完全相同，制备苜蓿青贮，作为对照组4。实施例5由cvas饲料分析中国服务中心通过近红外光谱(nearinfrared，nir)对实施例4及对比例1中对照组1～4制备得到的苜蓿青贮的粗脂肪、干物质和灰分含量进行分析，具体测定结果如表1所示。表1不同发酵剂对苜蓿青贮中粗脂肪、干物质和灰分含量的影响组别干物质(％)粗脂肪(％dm)灰分(％dm)实施例429.07±0.383.1533±0.025179.8133±0.05686对照组127.7±0.12.93±0.1410.86±0.09165对照组228.7±0.173.1333±0.020829.9667±0.31501对照组329.1±0.793.0033±0.015289.6967±0.64127对照组429.73±0.92.95±0.0110.8967±0.28113由表1可以看出，植物乳杆菌accc11016发酵液可以显著提高苜蓿青贮中粗脂肪的含量，相对于对照组1～4提高0.64％～7.6％。在提高粗脂肪含量的同时，干物质含量也相对较高，并能够降低灰分。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12