一种增加骨量、抑制骨丢失的保健食品组合物及其应用的制作方法

本专利属于保健食品领域，具体涉及一种增加骨量、抑制骨丢失的保健食品组合物及其应用。

背景技术：

骨质疏松症(osteoporosis，op)是指由于骨量低下、骨微细结构破坏导致骨组织脆性增加、骨强度减低，骨折风险增高为特征的全身性骨病。骨质疏松已成为困扰老年人群的主要疾病，其发病率已经紧随糖尿病、老年痴呆，跃居老年疾病第三位。骨质疏松症对人体健康的危害是多方面的，如造成腰酸背痛、变矮和驼背，影响生活质量，但其最大的危害还是容易发生骨折，给家庭和社会带来沉重的负担。2018年10月19日，国家卫生健康委员会公开发布了首个中国骨质疏松症流行病学调查结果。结果显示：骨质疏松症已成为我国中老年人群的重要健康问题，50岁以上人群骨质疏松症患病率为19.2％，中老年女性骨质疏松问题尤甚，50岁以上女性患病率达32.1％，远高于同龄男性的6％，而65岁以上女性骨质疏松症患病率更是达到了51.6％。因此预防和治疗骨质疏松已经引起了全球的普遍关注和重视。

但目前很多人认为骨质疏松只会发生在老年人身上，跟年轻人关系不大。事实并非如此。现如今，骨质疏松症已不再是老年病，年轻人也容易中招。骨质疏松的危险在儿童时期就已存在了，预防骨质疏松应从儿童抓起，以防患于未然。老年人骨质疏松的发生与年轻时的骨量积累密切相关。年轻时能达到的最高骨量增加10％，可将骨质疏松发生时间延迟13年。因此，提早服用增骨产品、预防骨质疏松显得尤为重要，对后期骨骼状况、人体健康意义深远。

蓝莓(blueberry)属杜鹃花科(ericaceae)越橘属(vaccinium.spp),为多年生落叶或常绿灌木，果实呈深蓝色，外被一层白色果粉，近圆形。蓝莓果实中含有大量花青素、花色苷、酚酸等生物活性物质，以及氨基酸、蛋白质、脂肪、食用纤维、果糖、维生素、矿物质等营养物质。经研究发现，蓝莓不仅具有极高的营养价值，还具有防止脑神经老化、抗癌、抗炎、保护肝脏、提高机体免疫力、保护视力等多种功能。根据最新的研究成果表明蓝莓饮食具有促进成骨细胞增殖、抑制破骨细胞与脂肪细胞增殖，促进骨骼增长、抑制骨吸收，从而从病因处、从根本上发挥预防和治疗骨质疏松的作用。

技术实现要素：

本发明提供了一种增加骨量、抑制骨丢失的保健食品组合物及其应用。该保健食品组合物制备得到的保健食品具有增加成骨细胞数量、减少破骨细胞数量，增加骨密度，减少骨丢失的作用，具有便于吸收、见效快、从根本上治疗骨质疏松的特点。

本发明的技术方案如下：

一种增加骨量、抑制骨丢失的保健食品组合物，包括辅料和有效成分，所述的有效成分为蓝莓。

作为优选，针对不同的人群选取不同配方剂量的蓝莓添加。

该保健食品可以制成多种剂型，但是从便于携带和服用的角度考虑，作为优选，所述的保健食品为软糖或饼干等。

作为优选，所述的保健食品包括如下重量份的活性成分和辅料：

作为优选，所述的保健食品促进骨内部骨小梁增加。

作为优选，所述的保健食品增加骨体积、增加成骨细胞数量、减少破骨细胞数量。

作为优选，所述的保健食品增加骨密度(幼年动物模型)。

作为优选，所述的保健食品提升血清中骨钙素含量、显著降低骨吸收(幼年动物模型)。

作为优选，所述的保健食品显著抑制骨丢失、增加骨量(成年骨质疏松模型)。

同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

本产品从骨质疏松的发病机制出发，从增加成骨细胞活性、抑制破骨细胞活性出发，该产品可以增加骨密度(幼年动物模型)，提升血清中骨钙素含量、显著降低骨吸收(幼年动物模型)，显著抑制骨丢失、增加骨量(成年骨质疏松模型)，从而增加骨量积累。

附图说明

图1为实施例1中bb饮食组和对照组大鼠体重变化，两组体重变化无明显组间差异。

图2为实施例1中bb饮食组与对照组相比骨内部骨小梁量显著增加，骨体积、成骨细胞数量显著增加、破骨细胞数量显著降低。

图3为实施例1中bb饮食组和对照组动物骨密度(bmd)和骨矿物质含量(bmc)等的变化。

图4为实施例1中bb饮食组和对照组动物血清中骨转换标志物的检测数据。

图5为实施例2中bb饮食组和对照组动物骨骼组织形态学分析。

图6位实施例2中bb对细胞分化潜能的影响，促进细胞分化为成骨细胞，抑制破骨细胞。

图7为实施例3中蓝莓饮食在骨质疏松症动物模型中防止骨丢失和骨吸收效果明显。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实验动物和饮食

怀胎时间确定的雌性斯普拉格-道利大鼠(n＝6；哈兰工业公司，印第安纳波利斯，美国)于妊娠第4天进入实验室，单独安置在湿度恒定，光照时间为早6:00-18:00，温度为22℃的环境中。实验条件经过阿肯色儿童医院研究所的动物护理实验室评估和认证。所有的动物实验都经过阿肯色大学医学科学机构动物护理和使用委员会(uams)批准。用ain-93g饲料(harlanteklad,madison,wi,usa)喂养怀孕大鼠，以酪蛋白为唯一蛋白来源。在幼崽出生后第20天，幼崽被随机分配(每组10只)到有或没有bb补充的ain-93g饲料的饲养组(配方表见表1)。bb饮食由ain-93g半纯化饲料和10％全bb粉组成。全野生bb冻干粉由vdf/futureceuticals(momence,il,usa)提供。含10％bb冻干粉(10％bb)的ain-93g饲料由harlanteklad(madison,wi,usa)生产。为了消除热量密度作为混杂变量，所有的饮食都被制定为等热量和等氮的。两种饮食都含有20％的酪蛋白作为蛋白质来源，不同组的饮食含有相同水平的蛋白质、热量、维生素和矿物质。饮食配方见下表。这些饮食含有美国国家研究委员会(nationalresearchcouncil)的建议营养素和相同的钙磷水平。在每一种饮食中添加氨基酸，以平衡必需氨基酸。动物每隔一天称重一次。随机喂养14、34天后处死雄性和雌性大鼠，收集血液和其它组织进行分析。

表1动物饮食配方表

注:数值代表饮食中各成分的组成(g/kg)。

实施例1

为了研究bb饮食对骨形成的影响，我们给21天的雄性和雌性sprague-dawley大鼠分别喂食含或不含10％bb粉的ain-93g饮食，持续14天或40天，然后评估身体生长情况和骨骼变化情况。监测结果表明各组间体重增加无显著差异(图1)，说明bb饮食对体重并没有影响。

为了评估各组间的骨量差异，在实施安乐死后立即用pqct扫描左侧胫骨。研究发现bb饮食34天后骨内部骨小梁量显著增加，并且骨体积和成骨细胞数量与对照组相比，显著增加。然而破骨细胞的数量与对照组相比，破骨细胞分化增殖被显著抑制(图2)。

进一步研究表明，在两种性别中，断奶大鼠bb饮食34天都表现出骨量的增加，包括骨密度(bmd)和骨矿物质含量(bmc)(p<0.05；图3)。总骨密度和骨小梁骨密度均增加约30％。尽管34天龄大鼠的骨骼尚未完全矿化(基于我们的pqct测量)，但与对照组相比，bb饮食动物的皮质骨密度和骨矿物质含量也增加了10％(p<0.05；图3)。在大鼠达到生长相对成熟的61天时，bb饮食的总骨密度和骨小梁骨密度的增加与34日龄时的增长相似，差异有统计学意义(p<0.05)。有趣的是，这个年龄段的皮质骨密度没有显著差异(图3)。

为了检测血清中骨转换标志物是否能反映bb饮食动物骨量的增加，测量了血清骨形成标志物骨特异性alp和ocn以及骨吸收标志物前胶原交联蛋白(ratlaps)。我们发现bb饮食喂养的动物在34天时ocn和alp均明显高于对照组(图4)。然而，骨吸收标记物ratlaps并无差异(图4)。与此相反，在连续饲喂日粮至61天时，bb饮食的动物骨吸收标记物ratlaps与对照组相比较低，而在34天时观察到的骨形成标志物的增加是持续的(p<0.05；图4)，表示破骨细胞活性和分化在一定程度上受到成骨细胞分化持续增加的影响。有趣的是，在第34天和第61天，各组igf1水平都没有组间差异(图4)，说明bb饮食没有改变骨骼生长的关键内分泌系统。

实施例2

为了确定bb饮食是否对影响骨骼细胞水平的生理状态，我们对34和61天龄的雄性和雌性大鼠的骨骼进行了组织形态学分析。两组骨骼的总体发育均未见明显差异。长骨切片显示生长板无明显改变。与对照组相比，在34天龄时，bb饮食喂养的雌性大鼠小梁骨体积增加30％，而bb饮食喂养的雄性大鼠小梁骨体积增加50％(p<0.05；图5a)。在61天时，雄性和雌性小梁骨体积都增加了50％(p<0.05；图5a)。小梁数目的增加与骨体积的增加规律相似。补充bb饮食与成骨细胞数量的增加、骨形成率(bfr)的增加和矿物质附着率增加有关(p<0.05；图5a)。bb补充饮食的大鼠在61天时破骨细胞数量有所下降(p<0.05；图5)。这些变化是bb饮食后骨形成不耦合的迹象，与雌激素等抗重塑剂的作用明显不同。

为了解释bb饮食的大鼠与对照组相比骨量增加的细胞机制，我们检测了骨髓中是否含有相同数量的骨祖细胞。各组股骨骨髓细胞总数无明显差异。提取34天大鼠骨髓细胞铺在一个六孔板，来评估成骨细胞形成。bb饮食的大鼠的alp染色集落单位(cfu-fs)和vonkossa染色集落单位(cfuobs)均较对照组大鼠升高(图5b,c)，说明bb饮食显著改变了间充质细胞向成骨细胞分化的潜能。

当骨髓细胞培养在48孔板在10^-81,25-二羟基维生素d3(1,25(oh)2d3]刺激下10天,这种条件下易诱导破骨细胞的形成。tracp⁺破骨样细胞的数量与对照组相比,bb饮食的大鼠也低于对照组动物在34和61天的状态(p<0.05),表明破骨细胞分化受损(图6)。

实施例3

利用骨质疏松动物模型，大鼠从断奶后的第20天至产后第34天，短期蓝莓饮食组为14天，然后切换到控制饮食和卵巢切除。长期蓝莓饮食组整个实验过程采用蓝莓饮食。采用盲法对各大鼠胫骨连续切片进行扫描。数据分析取自切片3和切片4(平均)，参数来自pqct分析。采集雌性大鼠ovx后的静态和动态组织形态学参数。胫骨近端组织切片用vonkossa染色，各组各1张，vonkossa染色显示骨钙素双重标记。结果系显示持续的、早期的、短期的蓝莓饮食可以防止骨质流失。