本发明涉及功能性食品领域，具体涉及一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物及制备方法。
背景技术：
糖尿病是一种以慢性血葡萄糖(简称血糖)水平增高为特征的代谢疾病群，其患病率随着人民生活水平的提高，生活方式的改变迅速增加，已成为发达国家中继心血管病和肿瘤之后的第三大非传染性疾病，它可引起多系统损害，导致眼、肾、神经、心脏和血管等组织的慢性进行性改变，引起功能缺陷及衰竭，严重威胁着人类健康。糖尿病根据发病原因不同，可分为1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病和其他类型糖尿病。
糖耐量受损(igt)属于正常糖代谢和糖尿病之间的中间状态，被称为糖尿病前期。任何一个糖尿病患者在发病过程中可经过igt阶段。而糖尿病与脂质代谢紊乱具有一定的相关性，促进脂质代谢恢复正常水平，从而对脂质代谢异常引起的糖尿病产生积极作用，或对糖尿病引起的并发症产生预防及积极改善作用。因此，改善糖耐量和甘油三脂水平对于缓解糖尿病非常重要。为此，本发明提出了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物及制备方法。
技术实现要素：
因此，本发明要解决的技术问题在于提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物及制备方法。
为此，本发明提供了如下的技术方案：
本发明提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，包括：乳双歧杆菌(bifidobacteriumlactis)mn-gup、嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)ncfm、鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)hn001、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)ba02和罗伊氏乳杆菌(lactobacillusruteri)sd5865。
进一步的，所述的益生菌组合物，包括：按重量份计：
乳双歧杆菌mn-gup菌粉，1-50份；
嗜酸乳杆菌ncfm菌粉，1-50份；
鼠李糖乳杆菌hn001菌粉，0.1-20份；
青春双歧杆菌ba02菌粉，1-50份；和
罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉，0.1-30份。
进一步的，所述的益生菌组合物中，还包括食品原料，和/或食品或医学上可接受的辅料或添加剂。
进一步的，所述食品原料选自水苏糖、菊粉、低聚果糖、南瓜粉、绿茶粉和抗性糊精中的至少一种，用以增强所述益生菌的增殖及功效作用效果。
进一步的，所述辅料或添加剂包括二氧化硅，用于改善配方的流动性。
进一步的，所述的益生菌组合物中，还包括如下重量份的组分：
水苏糖，0-100份；
菊粉，0-80份；
低聚果糖，0-80份；
南瓜粉，0-50份；
绿茶粉，0-50份；
抗性糊精，0-100份；和
二氧化硅，0-10份。
进一步的，所述的益生菌组合物中，包括如下重量份的组分：
乳双歧杆菌mn-gup菌粉，1-5份；
嗜酸乳杆菌ncfm菌粉，1-5份；
鼠李糖乳杆菌hn001菌粉，0.5-2份；
青春双歧杆菌ba02菌粉，1-5份；
罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉，1-3份；
水苏糖，30-60份；
菊粉，30-60份；
低聚果糖，10-30份；
南瓜粉，0-20份；
绿茶粉，0-20份；
抗性糊精，30-80份；
二氧化硅，0.2-1份。
本发明提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物的制备方法，包括将选定的各组分按照选定的重量份数称取，然后混合均匀。
进一步的，在所述的制备方法中，将选定的食品原料和/或辅料或添加剂按照选定的重量份数称取，混合均匀；
按照选定的重量份数称取各菌粉并混合均匀，得到菌粉混合物；
将上述的食品原料和/或辅料或添加剂的混合物和菌粉混合物混合均匀。
进一步的，在所述的制备方法中，包括：称取的南瓜粉和/或绿茶粉与称取的菊粉混合，并混合均匀记为a料；
称取水苏糖和部分抗性糊精混合，混合均匀后计为b料；
分别称取低聚果糖和二氧化硅，备用；
剩余部分抗性糊精与称取的乳双歧杆菌mn-gup、嗜酸乳杆菌ncfm、鼠李糖乳杆菌hn001、青春双歧杆菌ba02和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉进行混合，混合均匀的预混料记为c料；
将a料、b料、c料、低聚果糖和二氧化硅混合均匀。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，包括：乳双歧杆菌(bifidobacteriumlactis)mn-gup、嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)ncfm、鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)hn001、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)ba02和罗伊氏乳杆菌(lactobacillusruteri)sd5865；申请人在人体临床研究中发现，与正常人群相比，成年糖尿病人群肠道内双歧杆菌较少，尤其是青春双歧杆菌体现明显，在一项服用干酪乳杆菌的辅助降血糖研究中发现，在血糖改善的同时，罗伊氏乳杆菌增加明显，双歧杆菌也有小幅增加，说明罗伊氏乳杆菌和双歧杆菌与血糖具有相关性，而糖尿病发病原因之一为发炎分子进入细胞后，并引起连串的反应阻断胰岛素在细胞内的讯息传递，造成胰岛素无法正常作用，身体产生胰岛素阻抗，为此本发明通过选择乳双歧杆菌mn-gup、嗜酸乳杆菌ncfm、鼠李糖乳杆菌hn001、青春双歧杆菌ba02和罗伊氏乳杆菌sd5865相互协同以减少体内有害菌和内毒素，恢复肠道壁的屏障作用，改善机体能量代谢、减轻低水平慢性炎症和氧化应激反应，进而改善血糖状况，同时还可以通过影响脂质代谢，促进脂质代谢恢复正常水平，从而对脂质代谢异常引起的糖尿病产生积极作用，或对糖尿病引起的并发症产生预防及积极改善作用，进而缓解糖尿病。
2.本发明提供的一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，包括：按重量份计：乳双歧杆菌mn-gup菌粉，1-50份；嗜酸乳杆菌ncfm菌粉，1-50份；鼠李糖乳杆菌hn001菌粉，0.1-20份；青春双歧杆菌ba02菌粉，1-50份；和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉，0.1-30份；在上述比例下，乳双歧杆菌mn-gup、嗜酸乳杆菌ncfm、鼠李糖乳杆菌hn001、青春双歧杆菌ba02和罗伊氏乳杆菌sd5865相互协同作用强，改善糖耐量和甘油三脂水平的作用更显著。
3.本发明提供的一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，还包括食品原料，所述食品原料选自水苏糖、菊粉、低聚果糖、南瓜粉、绿茶粉和抗性糊精中的至少一种，选择上述食品原料一方面可以促进乳双歧杆菌mn-gup、嗜酸乳杆菌ncfm、鼠李糖乳杆菌hn001、青春双歧杆菌ba02和罗伊氏乳杆菌sd5865的增殖，另一方面能够对血糖和胰岛素反应具有一定的辅助作用。
4.本发明提供的一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，包括如下重量份的组分：乳双歧杆菌mn-gup菌粉，1-5份；嗜酸乳杆菌ncfm菌粉，1-5份；鼠李糖乳杆菌hn001菌粉，0.5-2份；青春双歧杆菌ba02菌粉，1-5份；罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉，1-3份；水苏糖，30-60份；菊粉，30-60份；低聚果糖，10-30份；南瓜粉，0-20份；绿茶粉，0-20份；抗性糊精，30-80份；和二氧化硅，0.2-1份；上述组合物比例恰当，可直接依托5种益生菌在肠道的作用，减轻体内炎症，改善胰岛素敏感性，改善糖耐量，达到辅助降血糖的功效。
5.一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物的制备方法，由于南瓜粉或绿茶粉的含水率较高，因此选择配方占比较高且含水率较低的菊粉与南瓜粉和/或绿茶粉混合，并混合均匀记为a料；另一个含水率较高的水苏糖与部分抗性糊精混合，混合均匀后计为b料；其余含水率较低的低聚果糖和二氧化硅分别称取，备用；由于菌粉重量很轻，需要称取剩余部分抗性糊精与乳双歧杆菌mn-gup、嗜酸乳杆菌ncfm、鼠李糖乳杆菌hn001、青春双歧杆菌ba02和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉进行混合，提高配方的混合均匀性，混合均匀的预混料记为c料；将a料、b料、c料、低聚果糖和二氧化硅混合均匀。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
下述实施例中的乳双歧杆菌mn-gup菌粉按照常规方法制备，方法可以如下：
取乳双歧杆菌mn-gup的种子冻存管，37℃下，在mrs+0.05％l-半胱氨酸盐酸盐的培养基中活化、连续活化三代，取发酵剂接种到盛有mrs+0.05％l-半胱氨酸盐酸盐的培养基的发酵罐中发酵，发酵结束后，经过碟式离心机离心、收集菌体后，菌体与添加含有海藻糖的保护剂混合，进行乳化，然后在冻干机中冻干，粉碎，最终获得菌粉，菌粉中活菌数为≥5000亿cfu/克。
嗜酸乳杆菌ncfm菌粉、鼠李糖乳杆菌hn001菌粉、青春双歧杆菌ba02菌粉和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉、食品原料和辅料或添加剂均为市售产品。
本发明中的动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)mn-gup已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国北京，其保藏编号为cgmccno.15578，保藏日期是2018年4月10日。在本发明中，将动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)mn-gup，简称为乳双歧杆菌mn-gup。
嗜酸乳杆菌ncfm菌粉(活菌数≥2000亿cfu/克)、乳双歧杆菌b420菌粉(活菌数≥4000亿cfu/克)、鼠李糖乳杆菌hn001菌粉(活菌数≥4500亿cfu/克)、青春双歧杆菌ba02菌粉(活菌数≥1000亿cfu/克)和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉(活菌数≥3500亿cfu/克)均购自美国杜邦丹尼斯克、新西兰恒天然、意大利probiotical和瑞典probi公司。
实施例1
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表1：
表1、益生菌组合物配方
实施例2
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表2：
表2、益生菌组合物配方
实施例3
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表3：
表3、益生菌组合物配方
实施例4
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表4：
表4、益生菌组合物配方
实施例5
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表5：
表5、益生菌组合物配方
实施例6
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表6：
表6、益生菌组合物配方
实施例7
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表7：
表7、益生菌组合物配方
实施例8
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表8：
表8、益生菌组合物配方
实施例9
本实施例提供了一种改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表9：
表9、益生菌组合物配方
实施例10
本实施例提供了实施例1的改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)按照配方量称取菊粉、南瓜粉和绿茶粉，并混合均匀记为a料；
(2)按照配方量分别称取水苏糖和部分抗性糊精混合，混合均匀后计为b料；
(3)分别称取低聚果糖和二氧化硅，备用；
(4)称取剩余部分抗性糊精与配方量的乳双歧杆菌mn-gup菌粉、嗜酸乳杆菌ncfm菌粉、鼠李糖乳杆菌hn001菌粉、青春双歧杆菌ba02菌粉和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉并混合均匀记为c料；
(4)将a料、b料、c料、低聚果糖和二氧化硅混合均匀。
实施例11
实施例4-9的改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物的制备方法与实施例10相同。
实施例12
本实施例提供了实施例2的改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物的制备方法，包括如下步骤：按照配方量称取乳双歧杆菌mn-gup菌粉、嗜酸乳杆菌ncfm菌粉、鼠李糖乳杆菌hn001菌粉、青春双歧杆菌ba02菌粉和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉和抗性糊精并混合均匀。
实施例13
本实施例提供了实施例3的改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物的制备方法，包括如下步骤：按照配方量称取乳双歧杆菌mn-gup菌粉、嗜酸乳杆菌ncfm菌粉、鼠李糖乳杆菌hn001菌粉、青春双歧杆菌ba02菌粉和罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉和抗性糊精并混合均匀。
对比例
对比例1的改善糖耐量和甘油三脂水平的益生菌组合物，配方如下表10：
表10、益生菌组合物配方
表11、益生菌组合物配方
上述对比例1-6的具有改善糖耐量及甘油三脂的益生菌组合物的制备方法，均包括如下步骤：
(1)按照配方量称取菊粉、绿茶粉和/或南瓜粉，并混合均匀记为a料；
(2)称取水苏糖和部分抗性糊精混合，混合均匀后计为b料；
(3)分别称取低聚果糖和二氧化硅，备用；
(4)称取剩余部分抗性糊精与配方量的乳双歧杆菌mn-gup菌粉、嗜酸乳杆菌ncfm菌粉、鼠李糖乳杆菌hn001菌粉、乳双歧杆菌b420菌粉、青春双歧杆菌ba02菌粉和/或罗伊氏乳杆菌sd5865菌粉并混合均匀记为c料；
(4)将a料、b料、c料、低聚果糖和二氧化硅混合均匀。
实验例1
一、试验设计：
检测依据：国食药监保化【2012】附件3辅助降血糖功能评价方法；
试验动物：spf级sd大鼠，160±20g，雄性，动物购入后适应环境5天，进行正常动物降糖实验。
高热能饲料：猪油10％、蔗糖15％、蛋黄粉15％、酪蛋白5％、胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％、碳酸氢钙0.6％、石粉0.4％、鼠维持料52.6％。
受试品：为实施例1、实施例2、对比例1-6制备的益生菌组合物，其配方如下表12，各益生菌组的服用剂量为10ml/kg·bw(0.67g溶于10ml去离子水中)。
表12受试品配方
实验分组：
正常动物降糖实验：设1个对照组，实验组给予实施例1的益生菌组合物，对照组给予去离子水，各组均按10ml/kg·bw给予灌胃，连续灌胃30d。
高血糖模型降糖实验：设置实验组分别给予受试品，1个空白对照组和1个模型对照组，模型对照组给予去离子水，实验组和模型对照组均按10ml/kg·bw给予灌胃，连续灌胃33d。
二、实验方法：
(1)正常动物降糖实验：连续30天，测空腹血糖值(禁食同实验前)，比较两组动物血糖值。
血糖指标：空腹血糖受试样品剂量组与对照组比较无统计学意义，判定对正常动物血糖无影响。
(2)高血糖模型降糖实验(四氧嘧啶诱导胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型)
造模方法：
大鼠给予普通维持料适应饲养5d，禁食3-4h，取尾血，测定给葡萄糖前(即0h)血糖值，给2.5g/kg·bw葡萄糖后0.5、2h血糖值，作为该批次动物基础值。以0h、0.5h血糖水平分组，即空白对照组、模型对照组和实验组，每组15只。空白对照组不做处理，实验组给予受试样品，模型对照组给予同体积去离子水，连续33d。各组给予维持料饲养，1周后模型对照组和实验组更换高热能饲料，喂饲3周后，模型对照组、实验组禁食24h(不禁水)，给予四氧嘧啶103-105mg/kg·bw腹腔注射，注射量1ml/100g体重。注射后继续给予高热能饲料喂饲3-5d。试验结束，各组动物禁食3-4h，检测空腹血糖、糖耐量、胆固醇、甘油三脂水平。评价指标：空腹血糖和糖耐量二项指标中一项指标阳性，且血脂(总胆固醇、甘油三酯)无明显升高，对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品辅助降血糖功能动物实验结果阳性。进而评价所述组合物干预后的功效。
1)糖耐量
各组动物禁食3－4小时，测定空腹血糖即给葡萄糖前(0小时)血糖值，实验组给予不同受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，空白对照组不做处理，15－20分钟后各组经口给予葡萄糖2.5g/kg·bw，测定给葡萄糖后各组0.5、2小时的血糖值，若模型对照组0.5小时血糖值≥10mmol/l，或模型对照组0.5小时、2小时任一时间点血糖升高，与空白对照组比较，差异有显著性，判定模型糖代谢紊乱成立，在此基础上，观察模型对照组与实验组空腹血糖、给葡萄糖后(0.5、2小时)血糖变化及血糖曲线下面积。
2)胆固醇、甘油三脂
各组动物禁食3－4小时，检测血清胆固醇、甘油三脂，若模型对照组血清胆固醇(cho)或甘油三酯(tg)明显升高，与空白对照组比较，差异有显著性，判定模型脂代谢紊乱成立，在此基础上，观察模型对照组与实验组血脂变化。
三、实验结果
(1)正常动物降糖实验如下表13
表13益生菌配方对正常大鼠空腹血糖的影响(x±sd)
由表13可见，经口给予大鼠益生菌配方实施例1组30d，经统计学分析，实施例1组空腹血糖值与空白对照组比较，差异无统计学意义(p>0.05)。
(2)高血糖模型降糖实验结果
糖耐量
1)、实验前后空腹血糖检测结果，如下表14所示，经灌胃给予大鼠不同的益生菌组合物33d。经统计学分析，与空白对照组相比较，模型对照组实验后空腹血糖值升高，差异具有统计学意义(p<0.01)。
表14对高血糖模型大鼠空腹血糖的影响(x±sd)
*与模型对照组比较，p<0.05，**与模型对照组比较，p<0.01。
2)由表15-17可见，经灌胃给予大鼠不同的益生菌组合物33d，经统计学分析，与空白对照组比较，模型对照组实验后0.5h、2h血糖升高，差异均具有统计学意义(p<0.01)，可判定模型糖代谢紊乱成立。实施例1组、实施例2组实验后0.5h和2h血糖低于模型对照组差异具有统计学意义(p<0.05或p<0.01)，只有对比例1和对比例6组实验后0.5h血糖低于模型对照组具有差异具有统计学意义(p<0.05)，其他对比例组无差异具有统计学意义；只有对比例6组实验后2h血糖低于模型对照组差异具有统计学意义(p<0.05)，其他对比例组无差异具有统计学意义；以及血糖曲线下面积，实施例1组、实施例2组、对比例6组与模型对照组相比具有差异具有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。综上，判断实施例1-2组和对比例6组具有显著改善高血糖模型大鼠糖耐量的作用，并且实施例1-2组优于对比例6组，实施例1组优于实施例2组。
表15对高血糖模型大鼠给葡萄糖后0.5h血糖的影响(x±sd)
*与模型对照组比较，p<0.05，**与模型对照组比较，p<0.01。
表16对高血糖模型大鼠给葡萄糖后2h血糖的影响(x±sd)
*与模型对照组比较，p<0.05，**与模型对照组比较，p<0.01。
表17对高血糖模型大鼠血糖曲线下面积的影响(x±sd)
*与模型对照组比较，p<0.05，**与模型对照组比较，p<0.01。
2)甘油三脂(tg)
表18益生菌配方对高血糖模型大鼠血清cho、tg的影响(x±sd)
*与模型对照组比较，p<0.05，**与模型对照组比较，p<0.01。
由表18可见，经口给予大鼠不同的益生菌组合物33d，经统计学分析，与空白对照组比较，模型对照组血清cho(总胆固醇)和tg(甘油三脂)水平均明显升高，差异均具有统计学意义(p<0.05)，可判定模型脂代谢紊乱成立。与模型对照组比较，实施例1、2组和对比例6组的血清tg降低，差异具有统计学意义(p<0.05)，说明本发明的益生菌组合物具有改善甘油三脂水平的作用。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。