一种提高蛋鸡免疫力和产蛋品质的饲料添加剂及制备方法与流程

1.本发明涉及饲料添加剂技术领域，具体的，涉及一种提高蛋鸡免疫力和产蛋品质的饲料添加剂及制备方法。


背景技术：

2.目前，饲料添加剂正在往绿色、高效、安全的方向发展。近年来，采用中草药作为饲料添加剂已经成为行业研究热点，而中草药已被证实其具有改善动物生长性能、提高机体抗氧化能力、增强免疫功能等良好效果。
3.蒲公英同时含有蛋白质、脂肪、碳水化合物等，有丰富的营养价值，是药食兼用的中药材。蒲公英在临床上常用于治疗急性气管炎、尿路感染，具有抗肿瘤、保肝利胆、降血糖、血脂作用。由于含有丰富的矿物质，蒲公英也作为保健品应用，用于预防缺铁引起的贫血症；同时蒲公英能美白肌肤，能对抗自由基对人体的伤害，增强免疫力，起到延缓衰老的作用。
4.发明专利肉鸡饲料(申请号201410827326.1)中中药添加剂有蒲公英、松针粉、陈皮、党参等多种中药组分，虽然添加有蒲公英，但是直接混合的方式无法将蒲公英的有效成分的作用发挥到极致，使用该饲料喂养蛋鸡，对蛋鸡的免疫性和产蛋品质提升不显著。


技术实现要素：

5.本发明提出一种提高蛋鸡免疫力和产蛋品质的饲料添加剂及制备方法，解决了相关技术中的饲料添加剂蛋鸡的免疫性、抗氧化能力和产蛋品质提升不显著的问题。
6.本发明的技术方案如下：
7.一种提高蛋鸡免疫力和产蛋品质的饲料添加剂，包括酵母细胞壁提取物、蒲公英，两者质量比为1:(5～10)。
8.作为进一步的技术方案，所述酵母细胞壁提取物由以下步骤制备：在酵母细胞壁中加入碳酸氢钙溶液，超声破壁，然后加入碱性蛋白酶，升温至50～55℃，保温后离心，沉淀物水洗，无水乙醇洗涤，无水乙醚脱水，真空干燥至恒重即得酵母细胞壁提取物。
9.作为进一步的技术方案，所述碳酸氢钙溶液的质量浓度为5％～10％，酵母细胞壁与所述碳酸氢钙溶液的比例为(4～5):100g/ml。
10.作为进一步的技术方案，所述超声破壁的具体条件为50～100khz，超声5～10分钟。
11.作为进一步的技术方案，所述碱性蛋白酶的加入量为酵母细胞壁重量的1％～3％。
12.作为进一步的技术方案，所述保温时间为9～12h。
13.本发明还提出一种所述的饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
14.s1、将蒲公英、花生粕去杂，干燥至恒重，混合、粉碎、过筛至50～60目，得到粉末；
15.s2、向s1所得粉末中加入乙醇溶液，加热回流提取2～4h，过滤后收集滤渣、滤液；
16.s3、将滤渣与酵母细胞壁提取物混合后，加入乙醇溶液加热至回流，多次提取至滤液无色为止；
17.s4、合并滤液浓缩至无醇味即得浸膏；
18.s5、将浸膏经柱层析法进行分离纯化后干燥得到饲料添加剂。
19.作为进一步的技术方案，所述花生粕为蒲公英的质量的8％～10％。
20.作为进一步的技术方案，所述步骤s2、s3中，乙醇溶液的体积浓度为60％～70％。
21.作为进一步的技术方案，所述步骤s2、s3中，乙醇溶液加入量为：料液比为1:20。
22.作为进一步的技术方案，所述步骤s5中，柱层析具体为：先经水洗后以乙酸乙酯为洗脱液继续进行洗脱，收集洗脱液。
23.本发明的有益效果为：
24.1、本发明的饲料添加剂能够显著提高蛋鸡的产蛋能力，提高免疫力，本发明的饲料添加剂显著提高蛋鸡血清t-aoc、t-aoc、cat，显著降低了mda水平，提高了血清蛋白的免疫功能，本发明的实施例得到的饲料添加剂，能够改善蛋鸡的产蛋能力，提高产蛋率。
25.2、本发明中，采用碳酸氢钙溶液相比于其他碱性溶液对酵母细胞壁的通透性较好，与超声处理协同作用，与合适的超声条件相配合，快速完成细胞壁破壁，进而提取多糖，是通过对蛋鸡血清抗氧化能力和免疫功能的影响中反应出来的。
26.3、在对蒲公英进行提取时，花生粕具有多孔结构，能够促进黄酮类物质的释放，提高提取效果。另外在提取过程中添加的花生粕，还可以作为营养物质供蛋鸡食用，提供营养，提高产蛋能力。
27.4、本发明在研发过程中，意外的发现，将酵母细胞壁经过提取后，再次与提取一次的蒲公英进行二次提取，制备得到的饲料添加剂反而能起到更好的效果。这可能是由于两者的提取物互相促进，相互协同，能够促进有效物质的进一步释放，将酵母细胞壁提取物添加到蒲公英的提取过程中，提高了两者的提取效果。
具体实施方式
28.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。
29.实施例1
30.制备饲料添加剂：
31.s1、将蒲公英、花生粕去杂，干燥至恒重，混合、粉碎、过筛至50～60目，得到粉末，其中花生粕为蒲公英的质量9％；
32.s2、向s1所得粉末中加入乙醇溶液，加热回流提取3h，过滤后收集滤渣、滤液；
33.s3、将滤渣与酵母细胞壁提取物混合后，加入乙醇溶液加热至回流3h，多次提取至滤液无色为止，其中酵母细胞壁提取物与蒲公英原料的质量比为1:7.5；
34.s4、合并滤液浓缩至无醇味即得浸膏；
35.s5、将浸膏先经水洗后以乙酸乙酯为洗脱液继续进行洗脱，收集洗脱液，经干燥即得饲料添加剂。
36.所述步骤s2、s3中，乙醇溶液的体积浓度为60％。
37.所述步骤s2、s3中，乙醇溶液加入量为：料液比为1:20。
38.其中酵母细胞壁提取物由以下步骤制备：在酵母细胞壁中加入质量浓度为10％碳酸氢钙溶液，酵母细胞壁与所述碳酸氢钙溶液的比例为5:100g/ml，超声破壁，100khz超声5分钟，然后加入碱性蛋白酶、甘露聚糖酶，碱性蛋白酶的加入量为酵母细胞壁重量的2
‰
，甘露聚糖酶的加入量为酵母细胞壁重量的1
‰
，升温至55℃，保温10h后离心，沉淀物洗涤干燥得酵母葡聚糖，上清液浓缩干燥得酵母甘露聚糖，将酵母葡聚糖和酵母甘露聚糖混合得到酵母细胞壁提取物。
39.实施例2
40.制备饲料添加剂：
41.s1、将蒲公英、花生粕去杂，干燥至恒重，混合、粉碎、过筛至50～60目，得到粉末，其中花生粕为蒲公英的质量10％；
42.s2、向s1所得粉末中加入乙醇溶液，加热回流提取4h，过滤后收集滤渣、滤液；
43.s3、将滤渣与酵母细胞壁提取物混合后，加入乙醇溶液加热至回流4h，多次提取至滤液无色为止，其中酵母细胞壁提取物与蒲公英原料的质量比为1:5；
44.s4、合并滤液浓缩至无醇味即得浸膏；
45.s5、将浸膏先经水洗后以乙酸乙酯为洗脱液继续进行洗脱，收集洗脱液，经干燥即得饲料添加剂。
46.所述步骤s2、s3中，乙醇溶液的体积浓度为70％。
47.所述步骤s2、s3中，乙醇溶液加入量为：料液比为1:20。
48.其中酵母细胞壁提取物由以下步骤制备：在酵母细胞壁中加入质量浓度为10％碳酸氢钙溶液，酵母细胞壁与所述碳酸氢钙溶液的比例为4:100g/ml，超声破壁，50khz超声10分钟，然后加入碱性蛋白酶、甘露聚糖酶，碱性蛋白酶的加入量为酵母细胞壁重量的3
‰
，甘露聚糖酶加入量为酵母细胞壁重量的2
‰
，升温至55℃，保温9h后离心，沉淀物洗涤干燥得酵母葡聚糖，上清液浓缩干燥得酵母甘露聚糖，将酵母葡聚糖和酵母甘露聚糖混合得到酵母细胞壁提取物。
49.实施例3
50.制备饲料添加剂：
51.s1、将蒲公英、花生粕去杂，干燥至恒重，混合、粉碎、过筛至50～60目，得到粉末，其中花生粕为蒲公英的质量8％；
52.s2、向s1所得粉末中加入乙醇溶液，加热回流提取2h，过滤后收集滤渣、滤液；
53.s3、将滤渣与酵母细胞壁提取物混合后，加入乙醇溶液加热至回流2h，多次提取至滤液无色为止，其中酵母细胞壁提取物与蒲公英原料的质量比为1:10；
54.s4、合并滤液浓缩至无醇味即得浸膏；
55.s5、将浸膏先经水洗后以乙酸乙酯为洗脱液继续进行洗脱，收集洗脱液，经干燥即得饲料添加剂。
56.所述步骤s2、s3中，乙醇溶液的体积浓度为70％。
57.所述步骤s2、s3中，乙醇溶液加入量为：料液比为1:20。
58.其中酵母细胞壁提取物由以下步骤制备：在酵母细胞壁中加入质量浓度为8％碳
酸氢钙溶液，酵母细胞壁与所述碳酸氢钙溶液的比例为4:100g/ml，超声破壁，50khz超声10分钟，然后加入碱性蛋白酶、甘露聚糖酶，碱性蛋白酶的加入量为酵母细胞壁重量的1
‰
，甘露聚糖酶加入量为酵母细胞壁重量的2
‰
，升温至50℃，保温12h后离心，沉淀物洗涤干燥得酵母葡聚糖，上清液浓缩干燥得酵母甘露聚糖，将酵母葡聚糖和酵母甘露聚糖混合得到酵母细胞壁提取物。
59.对比例1
60.与实施例1相比，将其中的碳酸氢钙溶液替换为等量的碳酸氢钠溶液，其他步骤与实施例1相同。
61.对比例2
62.与实施例1相比，超声时间为15分钟，其他步骤与实施例1相同。
63.对比例3
64.与实施例1相比，在制备过程中，不添加花生粕，其他步骤与实施例1相同。
65.对比例4
66.制备蒲公英提取物：
67.s1、将蒲公英、花生粕去杂，干燥至恒重，混合、粉碎、过筛至50～60目，得到粉末，其中花生粕为蒲公英的质量9％；
68.s2、向s1所得粉末中加入乙醇溶液，加热回流提取3h，过滤后收集滤渣、滤液。重复加热回流操作，至滤液呈无色为止，合并滤液浓缩至无醇味即得蒲公英提取物；
69.其中酵母细胞壁提取物由以下步骤制备：在酵母细胞壁中加入质量浓度为10％碳酸氢钙溶液，酵母细胞壁与所述碳酸氢钙溶液的比例为5:100g/ml，超声破壁，100khz超声5分钟，然后加入碱性蛋白酶、甘露聚糖酶，碱性蛋白酶的加入量为酵母细胞壁重量的2
‰
，甘露聚糖酶的加入量为酵母细胞壁重量的1
‰
，升温至55℃，保温10h后离心，沉淀物洗涤干燥得酵母葡聚糖，上清液浓缩干燥得酵母甘露聚糖，将酵母葡聚糖和酵母甘露聚糖混合得到酵母细胞壁提取物；
70.将酵母细胞壁提取物和蒲公英提取物按照1：1的比例混合，经水洗后以乙酸乙酯为洗脱液继续进行洗脱，收集洗脱液，经干燥即得饲料添加剂。
71.实验例
72.实验设置：
73.选用产蛋期(210日龄)400只健康的蛋鸡，采用完全随机设计，随机分为8组，每组5个重复，每个重复10只，分别为空白对照组(喂养基础饲料)、实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4，实施例和对比例分别按照基础饲料+0.1％的饲料添加剂。预试期3d，正式试验期42d。其中，基础饲料组成见表1。
74.表1基础饲料组成(干物质基础)
[0075][0076]
预混料为每千克饲粮提供：va 9 920iu、vb1 4.96mg、vb2 4.46mg、vb5 49.6mg、vb6 4.96mg、vb12 0.02mg、vd3 3 720iu、ve 24.8iu、vk3 2.48mg、生物素0.19mg、叶酸
1.24mg、d-泛酸13.6mg、烟酸12.4mg、抗氧化剂124mg、cu 12.4mg、fe 99.2mg、mn 99.2mg、zn 93mg、i 0.50mg、se 0.37mg。
[0077]
饲养管理：
[0078]
试验鸡饲养方式为四层全阶梯式笼养，每日8:00和16:00各饲喂1次，日喂料5kg，试验鸡均自由采食、自由饮水，鸡舍定期消毒，通风、采光等条件完全一致，日均光照16h，并且按正常免疫程序进行常规免疫，其他操作严格按照蛋鸡饲养管理办法进行。
[0079]
测试指标：
[0080]
试验期，统计各试验组每天的产蛋数、产蛋重，并计算产蛋率、日产蛋重、平均蛋重，每周统计1次各试验组的日采食量、料蛋比，最终求平均值。
[0081]
试验结束，各试验组随机取血样5个。翼下静脉采血6ml于非抗凝管中，冷冻离心机中3000r/min离心10min，分离得血清，-20℃保存，用于测定t-aoc、sod、mda、cat和iga、igm、igg。
[0082]
试验数据采用spss 23.0进行one-way anova单因素方差分析，组间数据采用lsd法进行多重比较，结果采用“平均值
±
标准差”表示，p《0.05表示差异显著。
[0083]
实验结果
[0084]
表2不同实验组对蛋鸡生产性能的影响
[0085]
组别日产蛋量/[g/(只
·
d)]平均蛋重/[g/(枚)]产蛋率/％料蛋比空白对照组51.69
±
1.66a58.08
±
1.39a90.10
±
1.48a2.07
±
0.04a实施例154.01
±
1.14b59.17
±
0.79b91.47
±
1.58b1.92
±
0.10b实施例254.53
±
1.07b59.10
±
1.18b91.34
±
1.46b1.96
±
0.06b实施例354.88
±
1.66b59.04
±
1.31b91.65
±
1.01b1.95
±
0.09b对比例152.61
±
1.91a58.37
±
1.24a90.23
±
1.87a2.09
±
0.07a对比例252.78
±
1.58a58.41
±
1.34a90.13
±
1.34a2.05
±
0.05a对比例352.13
±
1.37a58.25
±
1.78a90.17
±
1.38a2.08
±
0.08a对比例453.09
±
2.02a58.56
±
0.94a90.15
±
1.19a2.01
±
0.07a[0086]
同列数据肩标无字母或字母相同表示差异不显著(p》0.05)，不同小写字母表示差异显著(p《0.05)；下表同。
[0087]
表3不同实验组对蛋鸡血清抗氧化能力的影响
[0088][0089][0090]
表4不同实验组对蛋鸡血清免疫功能的影响/(mg/l)
[0091]
组别igaigmigg空白对照组21.84
±
2.77a2.31
±
0.19a47.36
±
4.19a实施例145.98
±
5.31b6.95
±
0.41b73.59
±
2.36b对比例135.84
±
4.82c5.13
±
0.22c65.14
±
1.51c对比例237.02
±
5.19c5.57
±
0.36c66.26
±
2.64c对比例336.63
±
6.70d5.36
±
0.22d59.70
±
3.58d对比例438.87
±
10.01c5.95
±
0.74c68.26
±
3.17d[0092]
根据产蛋能力的评价发现实施例1-3中各组差异不显著，且产蛋能力相差不大，但是与对比例与实施例之间产蛋能力相差较大，以产蛋率为例，实施例1与各对比例之间差异显著，且实施例1高出对比例1 1.4％，高于对比例2 1.5％，高于对比例3 1.4％，高于对比例4 1.4、5。因此在评判血清水平的差异时，仅对实施例1和对比例进行了检测。实施例1组对蛋鸡血清t-aoc、sod、cat的提高都显著高于对比例，mda显著低于对比例，iga、igm、igg显著高于对比例。本发明的实施例得到的饲料添加剂，能够改善蛋鸡的产蛋能力，提高产蛋率。
[0093]
对比例1中，制备饲料添加剂时，将碳酸氢钙溶液替换为等量的碳酸氢钠溶液时，最后对蛋鸡血清t-aoc、sod、cat的提高相比于碳酸氢钙溶液处理的有所降低，其中血清抗氧化指数与实施例1相比，t-aoc降低了7.1％，sod降低了20.4％，cat降低了14.6％，mda高于实施例66.3％，对蛋鸡血清免疫功能指数的提高也有所降低，与实施例1相比，iga降低了22.2％，igm降低了26.2％，igg降低了11.5％，发明人认为，这可能是由于碳酸氢钙溶液相比于其他碱性溶液对酵母细胞壁的通透性较好，与超声处理协同作用，快速完成细胞壁破壁，进而提取多糖。
[0094]
而对比例2中，延长超声时间，并不能对酵母细胞壁的提取效果进一步的提升，这同样也是通过对蛋鸡血清抗氧化能力和免疫功能的影响中反应出来的，因为对比例2中延长了超声时间，反而导致蛋鸡血清抗氧化能力和免疫能力下降，其中血清抗氧化指数与实施例1相比，t-aoc降低了7.5％，sod降低了17.1％，cat降低了15.2％，mda高于实施例1 43.7％，免疫功能与实施例1相比，iga降低了19.5％，igm降低了19.9％，igg降低了10.0％，这也说明当采用碳酸氢钙作为溶碱时，需要严格控制超声时间。
[0095]
对比例3中，在提取蒲公英时，没有添加花生粕，对于蛋鸡血清抗氧化能力和免疫功能的改善与实施例1相比较差，其中血清抗氧化指数与实施例1相比，t-aoc降低了8.6％，sod降低了23.3％，cat降低了18.1％，mda高于实施例1 53.4％，免疫功能与实施例1相比，iga降低了20.3％，igm降低了22.9％，igg降低了18.9％，发明人认为这是由于对蒲公英进行提取时，花生粕具有多孔结构，能够促进黄酮类物质的释放，提高提取效果，能够起到提高抗氧化能力和免疫能力的作用。另外在提取过程中添加的花生粕，还可以作为营养物质供蛋鸡食用，提供营养，提高免疫能力进一步提高产蛋能力。
[0096]
对比例4中，将酵母细胞壁和蒲公英分别提取后再添加，与空白对照组相比，可以显著提高蛋鸡血清抗氧化能力和改善免疫能力，但是与实施例相比，提高效果不明显。其中血清抗氧化指数与实施例1相比，t-aoc降低了4.3％，sod降低了13.0％，cat降低了11.9％，mda高于实施例1 15.7％，免疫功能与实施例1相比，iga降低了15.5％，igm降低了14.4％，igg降低了7.2％，本发明在研发过程中，意外的发现，将酵母细胞壁经过提取后，再次与提
取一次的蒲公英进行二次提取，制备得到的饲料添加剂反而能起到更好的效果。这可能是由于两者的提取物互相促进，相互协同，能够促进有效物质的进一步释放。
[0097]
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。