用于动物消化健康的组合物和方法与流程

用于动物消化健康的组合物和方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年6月3日提交的美国临时申请序列号63/034030和于2020年5月29日提交的美国临时申请序列号63/032033的权益和优先权，所述申请的公开内容全文以引用方式并入本文。


背景技术：

3.肠道在动物健康和全面健康中起关键作用。为了帮助满足这种作用，肠道含有在正常条件下包括健康胃肠道微生物区系的各种微生物。微生物区系对动物具有许多益处，例如，产生给布满胃肠道内腔的细胞提供燃料的脂肪酸、合成维生素和合成有助于食物分解和消化的酶。此外，微生物区系有助于宿主的免疫系统免受疾病。例如，已知微生物区系抑制胃肠道内潜在病原体的附着和定植，并刺激细胞因子和免疫球蛋白的产生。
4.不幸的是，破坏微生物区系的正常平衡可能导致胃肠道的机会性感染，并且可以促进另外的并发症，诸如腹泻和脱水。正常的微生物区系平衡可以通过多种方式被破坏，例如应力、高龄、旅行、消耗污染食物或水、抗生素疗法等。一种用于预防或治疗这种不期望的破坏的方法涉及预防性向动物施用益生菌以防止破坏或向动物治疗性施用益生菌以恢复正常的微生物区系平衡并且促进从由破坏引起的所得的不期望并发症中恢复。
5.益生菌及其对动物健康的益处是为技术人员所熟知的。益生菌是摄取后在预防和治疗特定医疗状况方面具有有益效应的活微生物。据信，益生菌通过被称为定植抗力的现象发挥生物学效应。益生菌有利于原生厌氧菌区系限制消化道中潜在有害细菌(主要是需氧菌)的浓度的过程。其它作用方式，诸如供应酶或影响酶在胃肠道中的活性，也可导致已被认为是由益生菌引起的一些其它功能。已知益生菌增强肠道功能，刺激免疫系统，减少炎症，并减少胃肠道中有害微生物的群体。
6.虽然益生菌通常可用于促进动物的健康状况，但它们通常难以储存、处理和施用给动物。益生菌在正常环境条件下可能是不稳定的，并且需要特殊处理，例如制冷、冷冻干燥或其它延长益生菌生命的手段。类似地，益生菌通常对食用他们的动物来说不好吃。通常，可以使用其它化合物或组合物来消除或增强适口性。此外，使用成分与益生菌组合来补充免疫系统，特别是在胃肠道中，以获得来自益生菌施用的最大益处可能是有益的。另外，实现治疗量可能具有挑战性。因此，需要可以克服这些挑战的含有益生菌的新型组合物。


技术实现要素：

7.本公开整体涉及宠物食物组合物；改善动物的微生物组的方法；以及用于改善或治疗动物的胃肠道问题的方法。另外的实施方案包括治疗或预防腹泻、提高或改善粪便质量，并且提高或改善消化健康。
8.在一个实施方案中，宠物食物组合物可以包含益生菌和车前子，所述益生菌包含肠球菌的任何合适的菌株或亚种中的至少一种，车前子的量为约20重量％至约80重量％。
9.在另一个实施方案中，改善动物内的微生物组的方法可以包括向动物施用包含益
生菌和车前子的组合物，其中该益生菌包含肠球菌的任何合适的菌株或亚种中的至少一者。
10.其它实施方案包括通过施用本文所述的组合物来治疗或预防腹泻、提高或改善粪便质量，并且提高或改善消化健康。
11.另外特征和优点在本文中有所描述，并且在阅读下述具体实施方式之后将是显而易见的。
具体实施方式
12.定义
13.如在本公开和所附权利要求中所用，单数形式
″
一个
″
、
″
一种
″
和
″
所述(该)
″
包括复数指代物，除非上下文另外明确规定。因此，例如，提及
″
一种组合物
″
或
″
所述组合物
″
包括两种或更多种组合物。在
″
x和/或y
″
的上下文中使用的术语
″
和/或
″
应解释为
″
x
″
或
″y″
或
″
x和y
″
。当在本文中使用时，术语
″
示例
″
和
″
诸如
″
(特别是当后跟项目列表时)仅是示例性和说明性的，不具有排他性或全面性。
14.术语
″
动物
″
是指可自本发明的组合物获益的任何动物，包括人类、鸟类动物、牛科动物、犬科动物、马科动物、猫科动物、山羊类动物、狼类动物、鼠科动物、绵羊类动物或猪类动物。在一个方面，动物可以是哺乳动物。在另一个方面，动物可为伴侣动物。
15.术语
″
伴侣动物
″
是指驯养动物，诸如猫、狗、兔、豚鼠、雪貂、仓鼠、小鼠、沙鼠、马、牛、山羊、绵羊、驴、猪等。在一个方面，伴侣动物可以是犬科动物。在另一个方面，伴侣动物可以是猫科动物。
16.如本文所用，
″
约
″
应理解为是指某一数值范围内的数字，例如所提及数字的-10％至+10％的范围、在所提及数字的-5％至+5％的范围内，或在一个方面在所提及数字的-1％至+1％的范围内，在一个特定方面在所提及数字的-0.1％至+0.1％的范围内。此外，本文中的所有数值范围都应理解为包含该范围内的所有整数或分数。另外，这些数值范围应理解为对涉及该范围内任何数字或数字子集的权利要求提供支持。例如，1至10的公开应理解为支持1至8、3至7、1至9、3.6至4.6、3.5至9.9等的范围。
17.本文中表示的所有百分数均以占食物组合物总重量的重量百分数计，除非另有表示。提及ph时，其值对应于利用标准设备在25℃处测量的ph。
″
量
″
可以是每份组合物或每个独立单位组合物中所提及组分的总量，以及/或者可以是按干重计的所提及组分的重量百分比。此外，
″
量
″
包括零；例如，化合物量的表述不一定意味着该化合物存在，除非后跟不含零的范围。
18.术语
″
宠物食物
″
、
″
宠物食物产品
″
和
″
宠物食物组合物
″
是指旨在供犬科动物或猫科动物摄食并且向动物提供至少一种营养物质的产品或组合物。此外，就这一点而言，这些术语是指产品或组合物呈即可食用的形式并且不仅是制成可食用产品或组合物的中间物，尽管在一些实施方案中可添加其它食物组合物，诸如膳食补充剂。术语
″
宠物食物
″
是指旨在供犬科动物或猫科动物食用的任何食物组合物。
19.术语
″
有效量
″
是指本发明化合物的量，该量能够(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发病。在一个实施方案中，本发明益
生菌和车前子可以有效量存在以用于改善微生物组、改善或治疗胃肠道问题、治疗或预防腹泻、提高或改善粪便质量和/或提高或改善消化健康。
20.除非另外说明，否则本文表示的剂量以毫克/千克体重/天(mg/kg/天)为单位。
21.术语
″
长期施用
″
意指反复施用或食用超过一个月的时期。可将长于两个月、三个月、四个月的时期用于某些实施方案。此外，可使用包括长于5个月、6个月、7个月、8个月、9个月或10个月的延长时期。也可使用超过11个月或1年的时期。在本发明中包括超过1年、2年、3年或更多年的长期使用。对于某些年老的犬科动物，这些犬科动物将在其余生中定期地持续食用。这也可称为
″
延长
″
时期的食用。
22.术语
″
定期地
″
或
″
定期施用
″
意指至少每月一次定量给料组合物或食用组合物，并且在一个方面意指至少每周一次定量给料。在某些实施方案中可执行更频繁的定量给料或食用，诸如每周两次或三次。然而，在其他实施方案中，可以使用包括每日至少一次食用的方案。无论是否在本文中明确例示，能够将所测量化合物诸如益生菌的期望活性水平维持在可接受范围内的频率可用于本文。本领域技术人员将认识到，喂食量将随所食用或施用的组合物以及食用食物的动物而变，并且一些食物组合物可能需要更频繁或较不频繁地施用以维持所测量化合物(例如益生菌)的期望活性水平。
23.相对术语
″
改善
″
、
″
增加
″
、
″
增强
″
、
″
减少
″
等是指本文公开的组合物(包含益生菌和车前子的组合物)相对于具有较少量或不合此类组成元素但其它方面相同的组合物的效果。
24.″
共混
″
组合物仅具有至少两种组分，这两种组分具有至少一个相对于彼此不同的特性。在一个方面，含水量和水活度在本公开的上下文中可以不同。就这一点而言，将组合物描述为
″
共混的
″
并不意味着共混的组合物已经受有时称为
″
共混
″
的处理(即，混合各组分，使它们彼此无法区分)，并且在一个方面，将一种组分与其它组分混合以形成共混的组合物时(例如，将干燥组分与湿润的或半湿组分混合时)，避免此类处理。此外，就这一点而言，在共混组合物中，相对于彼此具有至少一种不同特性的至少两种组分可各自保持自己独特的特性和外观。
25.″
湿润食物
″
是指含水量为约50％至约90％，并且在一个方面为约70％至约90％的宠物食品。
″
干燥食物
″
是指含水量小于约20％，并且在一个方面为小于约15％，并且在一个具体方面为小于约10％的宠物食品。
″
半湿食物
″
意指水分含量为约20％至约50％，并且在一个方面为约25％至约35％的宠物食物。
26.″
粗磨食物
″
在本文中与
″
块
″
同义使用，并且这两个术语均指干燥或半湿宠物食物的块料，其可具有粒料形状或任何其它形状，并且可通过将食物组合物切成独立块料而制成。粗磨食物的非限制性示例包括：颗粒；球丸；宠物食物块料、脱水肉、仿肉产品、蔬菜、及它们的组合；以及宠物小吃，诸如肉干或蔬菜干、生皮以及饼干。
″
仿肉制品
″
是外观、质地和物理结构类似于天然肉片的肉乳糜产品。
27.当提及食物组合物时，术语
″
完善且均衡
″
是指基于动物营养领域中公认的权威机构的推荐，含有适量和适当比例的所有已知必需营养物质，并且因此能够用作单独的膳食摄入来源以维持生命或促进生产，而不需添加补充营养来源的食物组合物。营养均衡的宠物食物和动物食物组合物在本领域内是广泛所知和广泛使用的，例如，根据美国饲料管制协会(aafco)于2019年1月1日建立的标准配制的完善且均衡的食物组合物。
28.术语
″
膳食补充剂
″
是指旨在除正常饮食之外待摄取的产品。膳食补充剂可以是任何形式，例如固态、液态、凝胶、片剂、胶囊、粉末等。在一个方面，可以方便的剂型提供膳食补充剂。在一些实施方案中，可以零售散包装(诸如散装粉末、液体、凝胶或油)的形式提供膳食补充剂。在其他实施方案中，可批量提供补充剂以包括在其他食物类中，诸如小吃、犒赏物、补充剂棒、饮料等。
29.本文所公开的组合物可不合本文未具体公开的任何要素。因此，使用术语
″
包括/包含
″
的实施方案的公开内容包括
″
基本上由所指明的组分组成
″
的实施方案和
″
由所指明的组分组成
″
的实施方案的公开内容。类似地，本文所公开的方法可不含本文未具体公开的任何步骤。因此，使用术语
″
包括/包含
″
的实施方案的公开内容包括
″
基本上由所指明的步骤组成
″
的实施方案和
″
由所指明的步骤组成
″
的实施方案的公开内容。本文所公开的任何实施方案可与本文所公开的任何其他实施方案组合，除非另有明确和直接的说明。
30.本发明关于实施方案、方面、实施例等的讨论是独立的，因为它们可适用于所有方法和组合物。例如，用于食物组合物的益生菌也可用于改善动物微生物组的方法中，且反之亦然。
31.实施方案
32.本发明人已经发现，包含肠球菌益生菌且随车前子施用的食物组合物可以在动物中提供消化健康益处，包括改进的微生物组。确定改进的微生物组的一种方法包括测量动物的微生物组中的乳杆菌(lactobacillus)、双歧杆菌(bifidobacteria)、和产气荚膜梭菌(clostridia perfringens)。施用本发明公开的组合物的动物可以具有与未施用本发明公开的组合物的相当动物相比增加的乳杆菌和双歧杆菌以及减少的产气荚膜梭菌。
33.因此，在一个实施方案中，用于动物的食物组合物可以包含益生菌和车前子，该益生菌包含肠球菌的任何合适的菌株或亚种中的至少一者，车前子的量为约20重量％至约80重量％。
34.另外，一种改善动物内的微生物组的方法可以包括向所述动物施用包含益生菌和车前子的组合物，其中所述益生菌包含肠球菌的任何合适的菌株或亚种中的至少一者。
35.通常，益生菌可以以有效量存在于组合物中，使得动物获得消化健康益处。在一个实施方案中，每克组合物可含有约105个菌落形成单位(cfu)至约10
10
个cfu的量的所述益生菌。在其它实施方案中，每克组合物可含有约107个cfu至约10
10
个cfu或甚至约107个cfu至约109个cfu。
36.如本文所讨论的，健康益处可以包括增强消化健康、治疗腹泻、提高粪便质量、多样化微生物组、增加有益细菌，例如增加乳杆菌和双歧杆菌，减少有害细菌，例如减少产气荚膜梭菌或它们的组合。在一个方面，健康益处可以包括腹泻的完全消退。
37.一般来讲，益生菌可以每天约十亿至约两百亿cfu的量施用于动物，以用于维持健康的肠道微生物区系，优选每天约0.1亿至约100亿活细菌。
38.通常，车前子可以以有效量存在于组合物中，使得动物获得消化健康益处。在一个实施方案中，车前子以约20重量％至约80重量％的量存在于组合物中。在其它实施方案中，车前子可以约30重量％至约70重量％，或甚至约40重量％至约60重量％的量存在。
39.通常，本发明组合物可以向动物施用足够的时间以实现动物的微生物组的变化。在一个实施方案中，可规律地向动物施用该组合物。在另一个实施方案中，可长期施用该组
合物。本发明组合物通常是食物组合物，但也可以以补充剂、犒赏食物、小药囊等形式的膳食方案的一部分施用。在一个实施方案中，该组合物为宠物食物组合物。在另一个实施方案中，该组合物是膳食补充剂。在还有另一个实施方案中，该组合物是小药囊。
40.通常，益生菌可以是肠球菌(enterococcus)的任何合适的菌株或亚种。在一个实施方案中，益生菌可以包括粪肠球菌(enterococcus faecium)((cerbios-pharma sa)，也可作为益生菌进料添加剂lbc me10(cerbios-pharma sa)获得)。如本文所讨论，益生菌可以足够的量添加到组合物中以实现健康益处。在一个实施方案中，益生菌可以是微囊包封的。因此，益生菌可以在生物相容性微胶囊内微囊包封以增强或维持益生菌的存活率，特别是在储存期间。微胶囊充当屏障以保护益生菌免受有害环境条件(如温度波动、氧气、水分和光)的影响。微胶囊包含生物相容性壳或涂层包围的活性剂，例如益生菌核。用于制备生物相容性微胶囊的合适材料和用于封装的方法是本领域已知的，参见例如，授予yan的美国专利第6,974,592号、授予curtis等人的美国专利第6,969,530号、授予shefer等人的美国专利第6,887,493号、和授予opara的美国专利第6,303,355号、以及授予ubbink等人的美国专利申请序列号10/507,359，以及授予simmons等人的美国专利申请序列号10/656,386，每个的内容以引用方式并入本文。微胶囊可以经制备用于在施用给动物后受控释放益生菌。在优选实施方案中，本发明的微胶囊的直径范围为约0.1mm至约1.0mm。在一个实施方案中，益生菌被涂覆有紫胶的生物聚合物基质微囊包封。
41.另外，本文公开的组合物可以含有其它成分。在一个实施方案中，组合物可含有其它益生元。益生元包括通过提供用于微生物生长的底物来改变胃肠道的微生物区系组成的任何物质。益生元包括但不限于天然和合成的寡糖、可溶性纤维、抗性淀粉和树胶。寡糖可以是直链或支链的。可以针对益生元增强存储容器中或动物胃肠道中的益生菌的生存期的能力来特别选择益生元。还可以针对益生元增强动物中益生菌的功能性或补充益生菌的益处的能力来特别选择益生元。一般来讲，益生元以足以积极刺激肠道中的健康微生物区系并且使这些
″
有益
″
细菌繁殖的量施用。典型的量为每份约1克至约10克，或者推荐的动物每日膳食纤维的约5％至约40％。
42.通常，组合物可以含有实现健康益处所需的任何量的益生菌。对于膳食补充剂的实施方案，此类补充剂可以包含约1％至约90％益生菌、约1％至约70％益生菌或甚至约1％至约50％益生菌。
43.在一个实施方案中，组合物可以包含以下中的至少一者：动物消化物、干啤酒酵母、维生素c；维生素e、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和亚硒酸钠。在一些实施方案中，组合物可以包含以下中的至少两者、至少三者、至少四者、至少五者、或甚至至少六者：动物消化物、干啤酒酵母、维生素c；维生素e、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和亚硒酸钠。在另一个实施方案中，组合物可包含以下中的每一者：动物消化物、干啤酒酵母、维生素c；维生素e、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和亚硒酸钠。
44.如本文所讨论，本发明组合物可以包含动物消化物。本发明中有用的动物消化物可以是技术人员已知的任何动物消化物，包括液体动物消化物和干动物消化物。此类消化物包括由清洁和未分解的动物组织的化学和/或酶水解产生的任何材料。另外，干啤酒酵母可用于本发明，其是技术人员已知的任何干啤酒酵母，例如，干的非活性试剂，其是啤酒酿
造行业的副产物。已经发现动物消化物和干啤酒酵母增强组合物的适口性，该组合物包括膳食补充剂和食物组合物。当存在于此类组合物中时，动物消化物占组合物的约1重量％至约90重量％，并且干啤酒酵母占组合物的约1重量％至约30重量％。
45.维生素c、维生素e、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和亚硒酸钠是技术人员已知的化合物。已经发现这些化合物增强了免疫力并增强了益生菌在本发明的膳食补充剂中的作用。也已经发现所有这些化合物，动物消化物和干啤酒酵母组合以与不处于组合物中时的益生菌相比延长益生菌的寿命。当存在于食物组合物或补充剂中时，组合物包含约0.1％至约10％的维生素c、约0.1％至约10％的维生素e、约0.01％至约3％的β胡萝卜素、约0.1％至约5％的蛋白锌、约0.01％至约3％的蛋白锰、约0.01％至约3％的硫酸亚铁、约0.01％至约1％的蛋白铜、约0.01％至约1％的碘酸钙和约0.001％至约0.1％的亚硒酸钠。在另外的实施方案中，食物组合物或膳食补充剂进一步包含约0.1％至约2％的牛磺酸。
46.关于补充剂，膳食补充剂可以制备为多种制剂，如粉末、颗粒剂、丸剂或任何其它适当的递送形式。在一些实施方案中，膳食补充剂制剂可以是含有在生物聚合物基质内微囊包封的益生菌的粉末。粉末膳食补充剂可以被喷洒或以其它方式施加到食物或其它组合物，特别是宠物食物，例如狗食物或猫食物上并与其混合。粉末膳食补充剂可以专门配制用于特定动物诸如伴侣动物的食用。在一个实施方案中，粉末膳食补充剂包含高浓度的益生菌，使得可以少量向动物施用补充剂，或在替代方案中，可以在施用给动物之前经稀释。熟练的从业者可以设计其它施用途径，诸如提供单独的膳食补充剂或在宠物治疗中、宠物治疗上或随宠物治疗馈入。
47.膳食补充剂可以配制用于在室温下长时间储存，或者另选地，可以制冷、冷冻干燥或冷冻。在一个实施方案中，膳食补充剂可以在室温下储存，并且当储存在室温下时，膳食补充剂中的益生菌保持基本上存活至少22天。预测性建模显示，尽管周期性短期的储存温度飙升可能超过室温至多60℃，但是这类益生菌仍保持基本上存活。
48.本发明的组合物可以包含另外的物质，诸如矿物质、维生素、盐、蛋白质、氨基酸、纤维、调味品、着色剂和防腐剂。矿物质的非限制性示例包括钙、磷、钾、钠、铁、氯、硼、铜、锌、镁、锰、碘、硒等以及它们的各种盐。维生素的非限制性示例包括维生素a、各种维生素b例如烟酸、泛酸、叶酸、生物素、维生素d和维生素k。组合物还可以包含类胡萝卜素，诸如α-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、玉米黄质和β-隐黄质。还可以包括另外的成分，例如菊粉、氨基酸等。在一个具体实施方案中，氨基酸可以是牛磺酸。
49.在各种实施方案中，本发明的组合物还可包含约15％至约60％的粗蛋白。在一个施方案中，组合物包含约40％至约55％的粗蛋白。粗蛋白材料可包含植物蛋白，诸如大豆、玉米、稻米、棉籽和花生，或者动物蛋白，诸如酪蛋白、白蛋白和肉蛋白。可用于本文的肉蛋白的非限制性示例包括猪肉、羊羔肉、马肉、禽肉、鱼肉以及它们的混合物。
50.组合物还可包含约5％至约40％的脂肪。在一个实施方案中，组合物可包含约15％至约22％的脂肪。组合物还可包含碳水化合物源。组合物可包含约15％至约60％的碳水化合物。此类碳水化合物的非限制性示例包括谷粒或谷物，诸如稻、玉米、高粱、苜蓿、大麦、大豆、卡诺拉、燕麦、小麦以及它们的混合物。组合物还可任选地包含其他材料，诸如干乳清和其他乳制品副产物。
51.组合物还可以进一步包含至少一种纤维源。组合物可包含约0.5％至约5％的纤维。可利用多种可溶的或不溶的纤维，这将是本领域普通技术人员已知的。纤维源可以是甜菜浆(来源于甜菜)、阿拉伯树胶、塔尔哈型树胶、车前子、米糠、角豆胶、柑橘渣、果胶、低聚果糖、甘露低聚果糖、大豆纤维、羽扇豆纤维、阿拉伯半乳聚糖、低聚半乳糖、阿拉伯糖基木聚糖或者它们的混合物。纤维源可以是可发酵纤维，如上文列出的那些中的许多。可发酵纤维先前曾被描述为有益于伴侣动物的免疫系统。可发酵纤维或本领域技术人员已知的其它组合物，其提供的益生元组合物可以增强肠道内益生菌的生长，也可以掺入到组合物中，以帮助增强本发明提供的对免疫系统胃肠道系统和动物一般健康的益处。
52.在组合物是补充剂的一些实施方案中，为了增强所述补充剂可以储存的时间长度，所述膳食补充剂的总含水量可以介于所述补充剂的约2重量％与约10重量％之间。在一个实施方案中，总含水量可小于5重量％的补充剂。类似地，膳食补充剂可以具有0.20至0.6范围内的水活度。在一个方面，水活度可以小于0.55。
53.组合物可以专门针对诸如狗或猫等特定动物进行配制。类似地，组合物可以专门针对年轻、成年或老年动物进行配制。一般来说，专用的制剂包括这样的成分，该成分满足特定动物和特定动物在发育或年龄的不同阶段的能量和营养要求或与疾病状态相关的具体营养要求。
54.在一个实施方案中，组合物可以配制用于狗。此配方可以包含以下成分中的至少一种：约1％至约90％的动物消化物、约1％至约30％的干啤酒酵母、约0.1％至约10％的维生素c、约0.1％至约10％的维生素e、约0.01％至约3％的β胡萝卜素、约0.1％至约5％的蛋白锌、约0.01％至约3％的蛋白锰、约0.01％至约3％的硫酸亚铁、约0.01％至约1％的蛋白铜、约0.01％至约1％的碘酸钙和约0.001％至约0.1％的亚硒酸钠。在另一实施方案中，组合物还包含约0.1％至约2％的牛磺酸和约1％至约50％的益生菌。组合物还可包含约0.01％至约2％的氯化钠。
55.在另一个实施方案中，组合物可以配制用于猫。此配方可以包含以下中的至少一者：约0％至约80％的动物消化物、约0％至约30％的干啤酒酵母、约0％至约10％的维生素c、约0％至约10％的维生素e、约0％至约3％的β胡萝卜素、约0％至约5％的蛋白锌、约0％至约2％的牛磺酸、约0％至约3％的蛋白锰、约0％至约3％的硫酸亚铁、约0％至约1％的蛋白铜、约0％至约0.1％的碘酸钙、约0％至约0.01％的亚硒酸钠和约1％至约50％的益生菌。组合物还可包含约0.01％至约2％的氯化钠。
56.技术人员可以确定要添加到给定制剂中的适当量的益生菌。可以考虑的此类因素包括不同动物的特定类型的组合物的平均消耗，旨在摄入膳食补充剂的动物是否具有任何特定的健康、全面健康或营养要求，或是否患有特定疾病或病症、动物的年龄、性别、大小或品种，以及制备组合物所处的制造条件。可基于动物的能量和营养需求计算要添加到组合物中的益生菌的浓度。
57.组合物中的益生菌，特别是微囊包封的益生菌，当组合物在高达50℃的温度下储存11天的时间段时，在高达60℃的温度下储存2天时，或在高达65℃的温度下储存20小时时保持基本上存活。
58.另外，组合物还可包含止泻剂。
59.如本文所讨论，在各种实施方案中，本发明组合物可以是宠物食物组合物。在各种
实施方案中，宠物食物组合物可为湿润的食物、半湿食物或干食物。在一个实施方案中，宠物食物组合物为共混组合物的一种或多种组分。在一些实施方案中，宠物食物组合物为粗磨食物，并且在一些实施方案中，宠物食物组合物为仿肉产品。
60.本文所公开的宠物食物组合物可为经配制供犬科动物或猫科动物食用的任何食物。在一个实施方案中，宠物食物组合物可以是完全且平衡的宠物食物；即，提供由美国饲料管制官方协会(aafco)所定义的针对犬科动物或猫科动物的完全营养。
61.宠物食物组合物可包括肉类，诸如乳化肉。合适的肉类的示例包括家禽肉、牛肉、猪肉、羊肉和鱼肉，特别是适用于宠物的那些类型肉类。肉可以包括动物的任何另外部分，包括内脏。肉中的一些或全部可作为一种或多种肉粉提供，即已经干燥并研磨以形成基本上尺寸均匀的颗粒并且如aafco所定义的肉。另外或替代地，可使用植物性蛋白质，诸如豌豆蛋白质、玉米蛋白质(如，玉米粉或玉米谷蛋白)、小麦蛋白质(如，小麦粉或小麦谷蛋白)、大豆蛋白质(如，大豆粉、大豆浓缩物，或大豆分离物)、稻米蛋白质(如，稻米粉或稻米谷蛋白)等。
62.本文所公开的宠物食物组合物可包含植物油、风味剂、着色剂和水。合适的植物油包括大豆油、玉米油、棉籽油、葵花油、芥花油、花生油、红花油等等。合适的风味剂的示例包括酵母、牛脂、加工的动物粮(例如，家禽肉、牛肉、羊羔肉和猪肉)、风味提取物或共混物(例如，烤牛肉)、动物消化物等。合适的着色剂包括fd&c色素，诸如蓝色1号、蓝色2号、绿色3号、红色3号、红色40号、黄色5号、黄色6号等等；天然色素，诸如焦糖色素、胭脂树红、叶绿酸、胭脂虫红、甜菜苷、姜黄、藏红花、辣椒色素、番茄红素、接骨木汁、班兰精、蝶豆花色素等；二氧化钛；以及技术人员已知的任何合适的食物着色剂。
63.本文所公开的宠物食物组合物可任选地包括另外成分，诸如另外或替代面粉的其它谷物和/或其它淀粉、氨基酸、纤维、糖、动物油、香味物质、另外或替代植物油的其它油、湿润剂、防腐剂、多元醇、盐、口腔护理成分、抗氧化剂、维生素、矿物质、益生菌微生物、生物活性分子或它们的组合。
64.合适的淀粉包括谷物，诸如玉米、大米、小麦、大麦、燕麦、大豆等等，以及这些谷物的混合物，并且可以至少部分地包含在任何面粉中。合适的湿润剂包括盐、糖、丙二醇，以及多元醇(诸如甘油和山梨糖醇)等。合适的口腔护理成分包括含有叶绿素的苜蓿营养浓缩物、碳酸氢钠、磷酸盐(例如，磷酸三钙、酸性焦磷酸盐、焦磷酸四钠、偏磷酸盐和正磷酸盐)、薄荷、丁香、欧芹、姜等等。合适的抗氧化剂的示例包括丁基化羟基苯甲醚(
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)、丁基化羟基甲苯(
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)和维生素e(生育酚)等等。
65.可使用的维生素的非限制性示例包括维生素a、复合维生素b(诸如b-1、b-2、b-6和b-12)、维生素c、维生素d、维生素e和维生素k、烟酸和酸性维生素，诸如叶酸和生物素。合适的矿物质的非限制性示例包括钙、铁、锌、镁、碘、铜、磷、锰、钾、铬、钼、硒、镍、锡、硅、钒、硼等等。
66.合适的防腐剂的非限制性示例包括山梨酸钾、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯钠、丙酸钙、丙酸、及它们的组合。
67.本文所公开的宠物食物组合物中的每种另外成分的特定量将取决于多种因素，诸如第一可食用物质和任何第二可食用物质中包含的成分；动物的物种；动物的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；动物的进食率；向动物施用食物产品的目的；等等。
68.实施例
69.以下非限制性实施例是本公开的实施方案的说明。
70.实施例1-体外研究
71.为了模拟大肠的效应，在犬科动物和猫科动物批量体外发酵模型中评估车前子和车前子/体外分析：用从多个狗或猫获得的粪便接种物将底物发酵0和12小时。收集来自狗和猫供体的新鲜排空的粪便，并在-80℃下立即冷冻，并用于以一式三份接种所有底物x时间组合。用每个接种物源和时间点发酵不含底物的三份试管，以考虑不由底物本身产生的适当校正(例如，空白)。将添加以维持微生物存活率的半限定培养基的等分试样无菌转移到含有300mg底物的50ml管中。通过用配备有1道气体释放阀的橡胶塞密封试管来维持厌氧条件。合并粪便样品，然后通过将其在co2束流下在ninja混合器中共混15秒在厌氧稀释溶液中1∶10(重量/体积)稀释。将共混的稀释的粪便过滤通过4层粗棉布，并在co2下密封于125ml血清瓶中。将等分试样的粪便接种物厌氧注射入培养基+底物管中并温育12小时，之后取出每个子样品用于分析。通过空白和0小时试管校正通过qpcr得到的ph、短链脂肪酸和靶向的微生物群(双歧杆菌属(bifidobacterium spp.)、乳杆菌属(lactobacillus spp.)、产气荚膜梭菌)测量值。经由16s illumina测序的微生物组分析不经空白校正，而是与0小时时间点相比。
72.获得结果。与单独的车前子和空白相比，利用车前子/组合，ph降低，这指示微生物发酵、scfa和乳酸盐产生，以及适于有益的结肠细菌的更合适的环境。与空白相比，车前子和车前子/两者的乳杆菌属(lactobacillus spp.)增加。与空白和单独的车前子相比，利用车前子/共混物，双歧杆菌属(bifidobacteria spp.)增加。增加乳杆菌和双歧杆菌属(bifidobacterium spp.)指示良好的消化健康。与空白相比，单独的车前子增加产气荚膜梭菌，而车前子/的组合没有增加。产气荚膜梭菌是致病细菌，并且增加指示消化健康不良的可能。基于16s illumina测序方法，车前子/sf68的发酵导致细菌图案中的清晰分离。lefse分析显示猫中粪杆菌和乳杆菌与车前子/sf68共混物更相关，而狗中乳杆菌、双歧杆菌和粪杆菌与车前子/共混物更相关。这些细菌是良好消化健康的指标。总体而言，这些体外结果表明，车前子/共混物刺激特定细菌的生长以支持消化健康。
73.实施例2-体内狗研究
74.进行来自阿拉斯加费尔班克斯地区各种雪橇犬舍(包括位于阿拉斯加萨尔查的雀巢普瑞纳犬舍设施)的阿拉斯加哈士奇的实地研究以测试功效。在本研究中，对具有经鉴定的急性腹泻的狗补充5个治疗中的1个治疗持续7天，在此期间，使用1-3的数值范围记录所有者的粪便得分。所述治疗和组分示于表1中：
75.表1
[0076][0077]
到第7天，所有治疗提供比对照更好的粪便得分。另外，研究治疗对腹泻的完全消退。出乎意料的是，治疗#4提供完全消退的最高发生率。值得注意的是，治疗#2提供比对照更高的完全消退发生率，而治疗#3(+蛋粉)甚至更高，并且治疗#5(+车前子+蛋粉)仍甚至更高(比#2或#3)。然而，令人惊讶地，通过治疗#4(+车前子)实现完全消退的最高发生率。这是出乎意料的，因为当与配对时，蛋粉显示出增加的效果，并且加入车前子显示出甚至更好的结果。因此，预期蛋粉的去除会降低完全消退的发生率。此类发现不是预期的，也不预测。结果示于表2中。
[0078]
表2
[0079][0080]
因此，在一个实施方案中，本发明组合物可以基本上由益生菌和车前子组成，其中益生菌包含肠球菌的任何合适的菌株或亚种中的至少一者。在一个方面，组合物可以由车前子和益生菌组成。在另一方面，组合物可以排除蛋粉。
[0081]
应当理解，对本文所述的目前优选的实施方案作出的各种变化和修改对于本领域的技术人员将为显而易见的。可在不脱离本发明主题的实质和范围且不减弱其预期优点的前提下作出这些变化和修改。因此，此类变化和修改旨在由所附权利要求书涵盖。