鳕鱼蛋白肽粉及其制备方法

1.本技术属于食品加工技术领域，尤其涉及一种鳕鱼蛋白肽粉及其制备方法。


背景技术：

2.鳕鱼，又名大头青、大头腥、阔口鱼等，是全世界年捕捞量最大的鱼类之一，具有重要的食用价值和经济价值。鳕鱼营养价值丰富，富含多种必需氨基酸，钾、硒等微量元素和多不饱和脂肪酸等营养素，是人们摄取优质蛋白质的重要来源。鳕鱼蛋白含有除色氨酸外的所以必须氨基酸和所有非必须氨基酸，并且各项氨基酸的含量都很丰富，是一种优质的蛋白资源。同时，鳕鱼还含有大量的牛磺酸，含量高达28.50g/kg蛋白。鳕鱼蛋白具有较高的抗氧化、抗高血压和抗炎症等功能，其蛋白源多肽的功能性尤为重要
3.多肽是α-氨基酸以肽键连接在一起的化合物，是蛋白质水解的中间产物。功能活性多肽是指在3～20个氨基酸大小、分子量小于6000da，且具有一定生理功能的蛋白质片断或水解产物。海洋源蛋白肽具有重要的生活活性，是活性多肽的重要代表。伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展，人们发现存在于生物体的肽有数万种，几乎所有的细胞也都受肽的调节，它涉及激素、神经、细胞生长和生殖等各个领域。而海洋源生活活性蛋白肽由于其特殊的活性、较高的营养价值，备受关注。鳕鱼作为一种重要的海洋生物，其在海洋产业中中占据着重要地位，具有重要的经济和营养价值，研究其蛋白多肽具有重要的现实意义。
4.然而，现有的工艺不能完全提前鱼类中的功能性多肽，生产成本高、费时，并且产生的残留化合物很难清除，提取出的多肽含量较低，无法满足产业化生产的需求。
5.本发明旨在提供一种快捷、高效，能完全提取鳕鱼蛋白质中的功能性多肽的方法，提供一种无化学残留，具有较高抗氧化性，并且速溶于水的鳕鱼蛋白肽粉。以有效解决现有技术生产成本和肽含量较低的问题，为相关产业的工业化生产提供一种可行方法。


技术实现要素：

6.本技术的目的在于提供一种鳕鱼蛋白肽粉及其制备方法，旨在解决现有技术中生产得到的鳕鱼蛋白肽粉的肽含量较低、抗氧化性差的问题。
7.为实现上述申请目的，本技术采用的技术方案如下：
8.第一方面，本技术提供一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法，包括如下步骤：
9.提供鳕鱼样品并进行预处理，得到预处理样品；
10.将预处理样品进行干燥处理、粉碎处理，得到粗制样品；
11.将粗制样品进行蛋白提取，收集上清液，得到蛋白提取液样品；
12.将蛋白提取液样品进行酶解处理，得到酶解样品；
13.将酶解样品进行后处理，得到鳕鱼蛋白肽粉。
14.在一些实施例中，进行后处理的步骤中，包括：将酶解样品依次进行静压处理、干燥处理。
15.在一些实施例中，干燥处理采用真空冷冻干燥处理，且，干燥处理的时间为36～48小时。
16.在一些实施例中，粉碎处理采用超声粉碎处理，且，超声粉碎处理的条件为：功率为10～30w，频率为50～100khz，时间为60～120min。
17.在一些实施例中，将粗制样品进行蛋白提取的步骤中，采用蛋白提取缓冲液进行蛋白提取，且，蛋白提取缓冲液为0.1～0.15mol/l、ph为6.0～6.2的磷酸钠缓冲液和1～1.5mmol/l乙二胺四乙酸的混合物。
18.在一些实施例中，将粗制样品进行蛋白提取的步骤中，包括：提供蛋白提取缓冲液和粗制样品进行浸泡48～72小时，于转速为12000-15000rpm、温度为4～5℃的条件下进行匀浆处理30～60秒；再利用冰浴摇床进行提取处理3～6小时；于转速为12000-15000rpm、温度为4～5℃的条件下离心处理45～60分钟，收集上清液，得到蛋白提取液样品。
19.在一些实施例中，酶解处理的步骤中，包括：提供酶比活为5000～5500u/g的胰蛋白酶进行酶解处理得水解液，再进行灭酶处理，得到酶解样品。
20.在一些实施例中，静压处理的步骤中，静压处理的压力为300-600mpa，处理时间为10-20分钟。
21.在一些实施例中，预处理的步骤中，包括：将鳕鱼样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品。
22.第二方面，本技术提供一种鳕鱼蛋白肽粉，鳕鱼蛋白肽粉由鳕鱼蛋白肽粉的制备方法制备得到，其中，鳕鱼蛋白肽粉的活性肽含量为87.89～90.36mg/100g。
23.本技术第一方面提供的鳕鱼蛋白肽粉的制备方法，其中包括了：原料预处理、干燥、粉碎、提取蛋白、酶解、后处理的一系列加工工艺，其中，工艺中先进行蛋白提取再进行酶解，能够酶解处理后的产物为纯度较高的多肽片段，不会含有其他的例如脂肪、维生素等其他组分，并且在酶解后再进行后处理，使得到的大分子含量的多肽片段可裂解为小分子量的片段，使最终得到的肽粉小分子的肽段含量较高，更有利于速溶于水并快速吸收，并且通过该制备方法得到的鳕鱼蛋白肽粉活性肽含量较高，能够保证鳕鱼蛋白肽粉抗氧化性较高，产品质量较佳；该制备方法工艺高效无毒、环境友好，有利于降低能耗，适合广泛应用。
24.本技术第二方面提供的鳕鱼蛋白肽粉，鳕鱼蛋白肽粉由鳕鱼蛋白肽粉的制备方法制备得到，其中，鳕鱼蛋白肽粉的活性肽含量高，为87.89～90.36mg/100g，且分子量小于0.5kda占比达到80％以上，更有利于吸收。所制备的蛋白肽，具有很高的抗氧化活性，并且速溶于水，能很好的吸收，并保证肽的功能活性。
具体实施方式
25.为了使本技术要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本技术，并不用于限定本技术。
26.本技术中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，a和/或b，可以表示：单独存在a，同时存在a和b，单独存在b的情况。其中a，b可以是单数或者复数。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
27.本技术中，“至少一个”是指一个或者多个，“多个”是指两个或两个以上。“以下至
少一项(个)”或其类似表达，是指的这些项中的任意组合，包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。例如，“a,b,或c中的至少一项(个)”，或，“a,b,和c中的至少一项(个)”，均可以表示：a,b,c,a-b(即a和b),a-c,b-c,或a-b-c，其中a,b,c分别可以是单个，也可以是多个。
28.应理解，在本技术的各种实施例中，上述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后，部分或全部步骤可以并行执行或先后执行，各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定，而不应对本技术实施例的实施过程构成任何限定。
29.在本技术实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本技术。在本技术实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。
30.本技术实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本技术实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本技术实施例说明书公开的范围之内。具体地，本技术实施例说明书中的质量可以是μg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。
31.术语“第一“、“第二”仅用于描述目的，用来将目的如物质彼此区分开，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。例如，在不脱离本技术实施例范围的情况下，第一xx也可以被称为第二xx，类似地，第二xx也可以被称为第一xx。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。
32.本技术实施例第一方面提供一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法，包括如下步骤：
33.s01.提供鳕鱼样品并进行预处理，得到预处理样品；
34.s02.将预处理样品进行干燥处理、粉碎处理，得到粗制样品；
35.s03.将粗制样品进行蛋白提取，收集上清液，得到蛋白提取液样品；
36.s04.将蛋白提取液样品进行酶解处理，得到酶解样品；
37.s05.将酶解样品进行后处理，得到鳕鱼蛋白肽粉。
38.本技术实施例第一方面提供的鳕鱼蛋白肽粉的制备方法，其中包括了：原料预处理、干燥、粉碎、提取蛋白、酶解、后处理的一系列加工工艺，其中，工艺中先进行蛋白提取再进行酶解，能够酶解处理后的产物为纯度较高的多肽片段，不会含有其他的例如脂肪、维生素等其他组分，并且在酶解后再进行后处理，使得到的大分子含量的多肽片段可裂解为小分子量的片段，使最终得到的肽粉小分子的肽段含量较高，更有利于速溶于水并快速吸收，并且通过该制备方法得到的鳕鱼蛋白肽粉活性肽含量较高，能够保证鳕鱼蛋白肽粉抗氧化性较高，产品质量较佳；该制备方法工艺高效无毒、环境友好，有利于降低能耗，适合广泛应用。
39.步骤s01中，提供鳕鱼样品并进行预处理，得到预处理样品。对鳕鱼先进行预处理，有利于确保制备得到的产品干净卫生。
40.在一些实施例中，预处理的步骤中，包括：将鳕鱼样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品。
41.步骤s02中，将预处理样品进行干燥处理、粉碎处理，得到粗制样品。对得到的预处理样品先进行干燥处理，目的是为了便于粉碎制备。
42.在一些实施例中，干燥处理采用真空冷冻干燥处理，且，干燥处理的时间为36～48小时。真空冷冻干燥技术能够将含有水份的鱼肉在较低的温度(-10℃～-50℃)下冻结成固
态，然后在真空(1.3～13帕)下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使物料脱水；更能确保营养物质不被破坏。
43.在一些具体实施例中，采用真空冷冻干燥处理的时间包括但不限于36小时、37小时、38小时、39小时、40小时、41小时、42小时、43小时、44小时、45小时、46小时、47小时、48小时。
44.进一步，真空冷冻干燥得到的产品，再进行粉碎处理，使得到的粗制样品颗粒细腻，有利于进行蛋白提取，确保蛋白提取率较高。
45.在一些实施例中，粉碎处理采用超声粉碎处理，且，超声粉碎处理的条件为：功率为10～30w，频率为50～100khz，时间为60～120min。
46.步骤s03中，将粗制样品进行蛋白提取，收集上清液，得到蛋白提取液样品。
47.在一些实施例中，将粗制样品进行蛋白提取的步骤中，采用蛋白提取缓冲液进行蛋白提取，且，蛋白提取缓冲液为0.1～0.15mol/l、ph为6.0～6.2的磷酸钠缓冲液和1～1.5mmol/l乙二胺四乙酸的混合物。
48.在一些具体实施例中，蛋白提取缓冲液为0.1mol/l、ph为6.0的磷酸钠缓冲液和1mmol/l乙二胺四乙酸的混合物。
49.在一些实施例中，将粗制样品进行蛋白提取的步骤中，包括：提供蛋白提取缓冲液和粗制样品进行浸泡48～72小时，于转速为12000-15000rpm、温度为4～5℃的条件下进行匀浆处理30～60秒；再利用冰浴摇床进行提取处理3～6小时；于转速为12000-15000rpm、温度为4～5℃的条件下离心处理45～60分钟，收集上清液，得到蛋白提取液样品。
50.步骤s04中，将蛋白提取液样品进行酶解处理，得到酶解样品。先提取蛋白，将蛋白提取液样品进行酶解处理，能够保证酶解后的纯度，如果直接酶解的话，得到含有许多杂质(脂肪、维生素等物质)。
51.在一些实施例中，酶解处理的步骤中，包括：提供酶比活为5000～5500u/g的胰蛋白酶进行酶解处理得水解液，再进行灭酶处理，得到酶解样品。
52.在一些具体实施例中，酶解处理的步骤中，包括：提供酶比活为5000u/g的胰蛋白酶进行酶解处理得水解液，再进行灭酶处理，得到酶解样品。
53.步骤s05中，将酶解样品进行后处理，得到鳕鱼蛋白肽粉。
54.在一些实施例中，进行后处理的步骤中，包括：将酶解样品依次进行静压处理、干燥处理。
55.在一些实施例中，静压处理的步骤中，静压处理的压力为300-600mpa，处理时间为10-20分钟。本技术提供的静压处理属于高静压处理，可以进一步使大的肽片段裂解为小分子量的片段，小分子量的肽更易于人吸收，使得到的鳕鱼蛋白肽粉中小分子量的肽含量更高。
56.在一些实施例中，干燥处理采用真空冷冻干燥处理，且，干燥处理的时间为36～48小时。
57.本技术实施例第二方面提供一种鳕鱼蛋白肽粉，鳕鱼蛋白肽粉由鳕鱼蛋白肽粉的制备方法制备得到，其中，鳕鱼蛋白肽粉的活性肽含量为87.89～90.36mg/100g。
58.本技术实施例第二方面提供的鳕鱼蛋白肽粉，鳕鱼蛋白肽粉由鳕鱼蛋白肽粉的制备方法制备得到，其中，鳕鱼蛋白肽粉的活性肽含量高，为87.89～90.36mg/100g，且分子量
小于0.5kda占比达到80％以上，更有利于吸收。所制备的蛋白肽，具有很高的抗氧化活性，并且速溶于水，能很好的吸收，并保证肽的功能活性。
59.下面结合具体实施例进行说明。
60.实施例1
61.一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法
62.包括如下步骤：
63.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
64.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为48h得到冻干样品；
65.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为10w，频率为50khz，时间为120min，得到粉碎样品；
66.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡48h，然后15000rpm 4℃匀浆60s，冰浴摇床提取6h,15000rpm 4℃离心45min；上清液即为蛋白提取液样品；
67.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
68.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为300mpa，处理时间为20分钟，得到高静压样品；
69.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为36h，得到冻干样品，即为鳕鱼蛋白肽粉。
70.实施例2
71.一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法
72.包括如下步骤：
73.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
74.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为36h得到冻干样品；
75.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为30w，频率为50khz，时间为80min，得到粉碎样品；
76.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡72h，然后12000rpm 4℃匀浆60s，冰浴摇床提取3h,12000rpm 4℃离心45min；上清液即为蛋白提取液样品；
77.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
78.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为600mpa，处理时间为10分钟，得到高静压样品；
79.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为48h，得到冻干样品，即为鳕鱼蛋白肽粉。
80.实施例3
81.一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法
82.包括如下步骤：
83.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
84.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为36-48h得到冻干样品；
85.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为10-30w，频率为50-100khz，时间为60-120min，得到粉碎样品；
86.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡48-72h，然后12000-15000rpm 4℃匀浆30-60s，冰浴摇床提取3-6h,12000-15000rpm 4℃离心45-60min；上清液即为蛋白提取液样品；
87.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
88.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为300-600mpa，处理时间为10-20分钟，得到高静压样品；
89.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为36-72h，得到冻干样品，即为鳕鱼蛋白肽粉。
90.实施例4
91.一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法
92.包括如下步骤：
93.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
94.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为40h得到冻干样品；
95.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为20w，频率为80khz，时间为100min，得到粉碎样品；
96.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡60h，然后12000rpm 4℃匀浆40s，冰浴摇床提取4h,12000rpm 4℃离心50min；上清液即为蛋白提取液样品；
97.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
98.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为500mpa，处理时间为15分钟，得到高静压样品；
99.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为70h，得到
冻干样品，即为鳕鱼蛋白肽粉。
100.实施例5
101.一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法
102.包括如下步骤：
103.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
104.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为48h得到冻干样品；
105.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为30w，频率为50khz，时间为90min，得到粉碎样品；
106.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡60h，然后13000rpm 4℃匀浆60s，冰浴摇床提取5h,13000rpm 4℃离心50min；上清液即为蛋白提取液样品；
107.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
108.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为550mpa，处理时间为15分钟，得到高静压样品；
109.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为65h，得到冻干样品，即为鳕鱼蛋白肽粉。
110.实施例6
111.一种鳕鱼蛋白肽粉的制备方法
112.包括如下步骤：
113.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
114.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为45h得到冻干样品；
115.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为30w，频率为50khz，时间为100min，得到粉碎样品；
116.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡65h，然后12000rpm 4℃匀浆40s，冰浴摇床提取5h,12000rpm4℃离心60min；上清液即为蛋白提取液样品；
117.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
118.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为500mpa，处理时间为20分钟，得到高静压样品；
119.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为72h，得到冻干样品，即为鳕鱼蛋白肽粉。
120.对比例1
121.鳕鱼加工方法
122.包括如下步骤：
123.提供鳕鱼样品；
124.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
125.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为30h得到冻干样品；
126.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为10w，频率为50khz，时间为60min，得到粉碎样品；
127.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡72h，然后15000rpm 4℃匀浆60s，冰浴摇床提取6h,12000rpm4℃离心45min；上清液即为蛋白提取液样品；
128.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
129.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为300mpa，处理时间为20分钟，得到高静压样品；
130.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为72h，得到样品。
131.对比例2
132.鳕鱼加工方法
133.包括如下步骤：
134.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
135.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为36h得到冻干样品；
136.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为10w，频率为50khz，时间为50min，得到粉碎样品；
137.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡48h，然后12000rpm 4℃匀浆30s，冰浴摇床提取3h,12000rpm4℃离心45min；上清液即为蛋白提取液样品；
138.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
139.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为300mpa，处理时间为10分钟，得到高静压样品；
140.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为36h，得到样品。
141.对比例3
142.鳕鱼加工方法
143.包括如下步骤：
144.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
145.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为48h得到冻干样品；
146.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为10w，频率为50khz，时间为60min，得到粉碎样品；
147.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡48h，然后15000rpm 4℃匀浆60s，冰浴摇床提取6h,15000rpm4℃离心60min；上清液即为蛋白提取液样品；
148.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
149.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为200mpa，处理时间为20分钟，得到高静压样品；
150.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为72h，得到样品。
151.对比例4
152.鳕鱼加工方法
153.包括如下步骤：
154.预处理：提供鳕鱼类样品；将鳕鱼类样品清洗干净，去除内脏，去除鱼鳃，将鱼(含鱼骨、鱼皮、鱼头等)切成1cm*1cm*1cm规格，得到预处理样品；
155.真空冷冻干燥：将预处理样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为36h得到冻干样品；
156.超声粉碎：将冻干样品进行超声粉碎，功率为30w，频率为100khz，时间为120min，得到粉碎样品；
157.蛋白提取：粉碎样品加入蛋白提取buffer处理；buffer为0.1mol/l磷酸钠(nah2po4-na2hpo4，ph＝6.0)，1mmol/l乙二胺四乙酸(edta)，buffer浸泡72h，然后12000rpm 4℃匀浆30s，冰浴摇床提取3h,12000rpm4℃离心45min；上清液即为蛋白提取液样品；
158.酶解：向蛋白提取液样品中以酶比活为5000u/g加入胰蛋白酶进行水解，得水解液，经灭酶，得到酶解样品；
159.高静压处理：将酶解样品真空包装后，置于高静压处理，处理压力为600mpa，处理时间为8分钟，得到高静压样品；
160.二次真空冷冻干燥：将高静压样品置于真空冷冻干燥机中冻干，时间为72h，得到样品。
161.性质测定
162.(1)将实施例1～6和对比例1～4得到的加工后的粉末产品，采用总还原力和dpph自由基清除能力来评估抗氧化活性。
163.总还原力的实验具体如下：1mg的蛋白提取液与2.5ml磷酸盐缓冲液(200mm pbs，ph 6.6)混合均匀，再加入2.5ml的1％铁氰化钾k3[fe(cn)6]，然后50℃孵育20min，再加入2.5ml 10％的三氯乙酸，在1000g条件下离心10min，取2ml上清液，加入2ml水和0.5ml 0.1％氯化铁，混合均匀后，测试混合物在700nm的吸光值。
[0164]
相同提及的dpph溶液与蛋白提取液混合均匀，旋涡，在25℃条件下孵育30min。选择1ml水与1ml的dpph的混合液进行同样的混合与操纵，作为空白对照。测试混合物在517nm条件下的吸光值。
[0165]
dpph自由基清除能力的计算公式如下：
[0166]
dpph-rsa(％)＝(a
c-as)/as×
100％
[0167]
式中：
[0168]
dpph-rsa：dpph自由基清除能力(％)；
[0169]
ac：样品的吸光度；
[0170]
as：对照的吸光值。
[0171]
(2)提供实施例1～6和对比例1～4得到加工后的粉末产品，采用液相色谱-质谱联用仪，分析样品的肽指纹图谱。
[0172]
(3)提供实施例1～6和对比例1～4得到加工后的粉末产品，采用溶解度是否大于10g/100g(10g样品可以溶于100g水内)，分析样品的溶解性。
[0173]
结果分析
[0174]
(1)将实施例1～6和对比例1～4得到的加工后的粉末产品，采用总还原力和dpph自由基清除能力来评估抗氧化活性。实施例1～6和对比例1～4得到的加工后的粉末产品的总还原力实验结果表明，实施例1～6样品的总还原力(od
700
)为0.17-0.20，对比例1～4的为0.08-0.10，说明实施例1～6具有较高的总还原力。实施例1～6和对比例1～4得到的加工后的粉末产品的dpph自由基清除能力实验结果表明，实施例1～6样品的dpph自由基清除能力(％)为75-81，对比例1～4的为59-63，说明实施例1～6具有较高的dpph自由基清除能力。可以看出，采用实施例1～6提供的处理方法，可以生产出具有较高抗氧化性的功能性肽。
[0175]
表1
[0176][0177][0178]
(2)提供实施例1～6和对比例1～4得到加工后的粉末产品，采用采用液相色谱-质谱联用仪，分析样品的肽指纹图谱。实施例1～6得到加工后的粉末产品肽含量为87.89-90.36mg/100g，其中分子量小于500da占比达到80％以上；对比例1～4的为48.86-68.34mg/100g，其中分子量小于500da占比在67％以下。可以看出，采用实施例1～6提供的处理方法，可以生产出具有分子量较小的功能性肽。
[0179]
表2
[0180][0181]
(3)提供实施例1～6和对比例1～4得到加工后的粉末产品，采用溶解度是否大于10g/100g(10g样品可以溶于100g水内)，分析样品的溶解性。实施例1～6和对比例1～4得到的加工后的粉末产品的溶解度均大于10g/100g，说明均属于高溶解性粉末。
[0182]
综上，本技术实施例提供的鳕鱼蛋白肽粉的制备方法，其中包括了：原料预处理、干燥、粉碎、提取蛋白、酶解、后处理的一系列加工工艺，其中，工艺中先进行蛋白提取再进行酶解，能够酶解处理后的产物为纯度较高的多肽片段，不会含有其他的例如脂肪、维生素等其他组分，并且在酶解后再进行后处理，使得到的大分子含量的多肽片段可裂解为小分子量的片段，使最终得到的肽粉小分子的肽段含量较高，更有利于速溶于水并快速吸收，并且通过该制备方法得到的鳕鱼蛋白肽粉活性肽含量较高，能够保证鳕鱼蛋白肽粉抗氧化性较高，产品质量较佳；该制备方法工艺高效无毒、环境友好，有利于降低能耗，适合广泛应用。
[0183]
以上所述仅为本技术的较佳实施例而已，并不用以限制本技术，凡在本技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。