一种骨营养粉的制备方法与流程

1.本发明属于骨肉制品制备技术领域，具体涉及一种骨营养粉的制备方法。


背景技术：

2.骨关节相关病症已经成为危害人类健康的三大“杀手”之一，人们关于骨关节养护的意识愈发深入。从传统的骨头汤食补“以形补形”，到日常的保健品补钙，皆表明骨骼与骨关节全面养护的重要性和紧迫性。
3.肉类加工的发展使骨的产量逐年攀升，但是由于加工方式和途径多样化的缺失，造成严重的资源浪费，也污染环境。再者，骨加工产品一般情况下因为加工技术或设备低端，导致骨产品附加值低、品质差，消费人群不接受，最终无法达成产业化。
4.牛骨营养丰富，骨骼中含有的矿物质，其钙、磷、铁、锌等含量高且比例适宜；其中钙磷比接近2:1，与人骨中钙磷比例相同。骨骼中约90％的蛋白质为胶原蛋白、骨胶原及硫酸软骨素，可增强骨关节防护，补充软骨滑液，发挥润滑和支撑功能。有效防止中老年人随着年龄增长引起的生理性的钙缺乏，骨胶原骤减等现象。骨中的磷脂质、磷蛋白、各种维生素和氨基酸等，是人体必需摄入的营养素。因此，牛骨是一种理想天然、高营养的补钙原料。但是由于牛骨原料不能直接食用，被制成成品，但是由于制备方法不当，使其营养价值大大降低，如cn 114009697 a公开了一种用牛骨肽制作肉制品的制备工艺，该专利采用鲜牛骨制备牛骨肽时，去除了拥有营养价值的牛骨髓，明显损失了牛骨营养的完整性。cn 105876660 a公开了一种利用酶法制备牦牛羊骨粉的方法，首先利用脂肪酶除脂，再利用蛋白酶脱除胶原蛋白，过滤后加入其他原料复配。酶解过程严重损失骨胶原蛋白和其他有益成分，由于骨胶原蛋白进一步水解为多肽和短肽，同时骨质无机成分羟基磷灰石hap也分解为可溶于水的钙和磷。后续对骨渣过滤，去除上层水相，导致获得的骨渣营养价值和利用价值较低。cn cn1299614a公开了一种超细鲜骨粉及其生产方法和用法，经过粗碎、二级粉碎、细碎和超细碎四大步骤，并持续处于75～85℃恒温下制备。该方法的高温会引起蛋白质变性，失去核心营养成分；粉碎过程繁杂，工序较多，过度的挤压使骨髓等物质流失，一定程度上会造成资源和能源浪费；最终获得骨粉产品杂质含量高，提取量低，活性弱。如何能获得一种保留牛骨营养价值较完善的方法，是亟需解决的技术问题。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明提供一种骨营养粉的制备方法。
6.为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：
7.一种骨营养粉的制备方法，其包括如下步骤：
8.s1、选取牛棒骨、牛膝盖骨作为牛骨原料，
9.s2、预处理：洗清并去除牛骨中的肌肉和脂肪部分，保留肌腱部分；
10.s3、脱脂处理：将预处理后的牛骨原料加入脱脂液进行脱脂处理；
11.s4、粗粉碎，将脱脂处理后的牛骨在低温进行粉碎，粉碎成≤4mm的粗颗粒；
12.s5、超低温超微粉碎：将粗颗粒进行超低温超微粉碎，粉碎直径≤40μm；
13.s6、酶解浓缩：将超微粉碎后的物料加入复合蛋白酶解液进行酶解，离心，沉淀留存，上清液膜浓缩；
14.将沉淀与膜浓缩液体混合，获得骨泥；
15.s7、冷冻干燥：对上述骨泥进行真空冷冻干燥，粉碎获得骨粉；
16.s8、高温熟化：对上述骨粉瞬时高温熟化，获得牛骨营养粉制品。
17.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s1中，所述牛棒骨与牛膝盖骨按重量比为1:1～3:1进行备料。
18.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s2中，将肌腱部分，间隔1～2cm切割数刀。
19.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s3中，脱脂液中所用的复合脂肪酶包括按重量比计的碱性脂肪酶40～60％和低温脂肪酶40～60％，脱脂液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的5～10％。
20.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s3中，牛骨原料与脱脂液按料液比为1:10～1:15进行混料；脱脂处理时，用碱调整混合料的ph值至7.5～8.5，维持温度30～40℃，脱脂处理1～2.5h。
21.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s3中，脱脂处理后将牛骨用40～45℃热水清洗后备用。采用热水清洗能更好地将牛骨和脂肪分离。
22.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s4中，低温是指在≤-10℃的温度，粉碎成≤4mm的粗颗粒；在步骤s5中，超低温超微粉碎是指用液氮进行，超低温为-196℃，粉碎直径≤40μm。
23.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s6中，所述复合蛋白酶解液的组成按重量份计，包括木瓜蛋白酶20～30份、中性蛋白酶15～25份、风味蛋白酶10～20份、碱性蛋白酶20-30份和胰蛋白酶10-20份，复合蛋白酶解液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的5～10％。
24.优选地，在步骤s6中，酶解条件为按料液比为1:5～1:10进行，用氢氧化钠溶液调节ph为6.0～8.0，酶解的温度35～45℃，酶解反应3～5h。
25.离心的速率为10000～15000rpm，离心持续5～15min；沉淀留存；上清液膜浓缩(超滤膜20nm，膜内滞留》1kd的生物分子)。
26.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s7中，冷冻干燥时将冷阱中的温度降到-60℃时，真空度维持在20～30pa，开始抽真空进行升华干燥，在干燥仓升温至35～45℃、真空度达到1～10pa后结束。
27.如上所述的制备方法，优选地，在步骤s8中，高温熟化的条件为将所得牛骨粉在90～110℃加热10～20min，即得熟牛骨营养粉。
28.由上述制备方法获得的牛骨营养粉中，牛骨胶原蛋白肽的分子量分布如下：分子量＜1kd，占0～5％；分子量为1-5kd占20～30％；分子量为5-10kd，占60～70％；分子量为＞10kd，占1～10％。
29.胶原蛋白肽较适合人体吸收的分子量约为1-10kd，分子量过大不利于吸收，本发明的方法通过大量实验，最后优化后的方法制备牛骨营养粉适于人体吸收。
30.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
31.(1)本发明选取的原料为牛棒骨与牛膝盖骨(牛窝骨)，实际应用可调整比例(1:1
～3:1)。牛棒骨是牛小腿的骨头，骨髓尤其丰富，天然来源的蛋白质、脂肪、维生素和钙，促进骨钙吸收，骨骼生长发育。牛窝骨是牛后腿的膝盖部位，软筋较多，富含骨胶原蛋白，钙和蛋白质，营养价值高。甄选不同部位，采用不同的配比制备的牛骨营养粉，适用人群和核心功效具差异性。针对儿童与青少年，促其长高、茁壮成长、增强体质，选用牛棒骨：牛膝盖骨比例为2:1～3:1；针对中老年人骨关节养护与骨骼强化，选用牛棒骨：牛膝盖骨比例为1:1。
32.(2)本发明提供的骨营养粉的制备方法优选脱脂工艺。由于牛骨中的脂肪含量较高，易产生油脂氧化而影响整体风味，对后续酶解及整个制备流程有明显影响。本发明采用复合脂肪酶对预处理后的牛骨进行短暂脱脂，遵循所选牛骨中脂肪溶解的特性，严格把控脱脂温度与时间，有效提高脱脂效率，并且仅针对非活性物质的脂肪发挥作用，对活性物质的影响较小，有利于牛骨所含有益成分如活性物质牛骨胶原蛋白、钙等全保留。
33.(3)本发明提供的骨营养粉的制备方法，采用液氮超低温超微粉碎，真正实现超低温和高热交换率的快速冷冻，降低制备产品的脱水及干耗损失，进一步保持所含营养物质、风味和色泽。同时降低牛骨各成分之间的结合力，有利于提高酶解效率和浓缩混合程度，增强产品的营养功效。
34.(4)本发明提供的骨营养粉的制备方法，首先采用酶解后骨渣和滤出液双保留的方法，先选取复合蛋白酶对超微牛骨粉进行骨胶原蛋白大分子的水解，离心后骨渣留存备用，上清液经过膜浓缩，获得的多肽和短肽分子量相对集中(分布于5～10kd)，此时牛骨肽分子大小更适合人体吸收，活性提高。而骨渣并未丢弃，与浓缩液重新混合成骨泥，精准又完整的牛骨营养成分全保留，最大程度上减少损耗，增加骨质的可回收利用。
35.(5)本发明提供的骨营养粉的制备方法，操作简易，利于推广，加之所得制品附加值颇高，可单独使用骨营养粉或后续加工为骨营养物等成品，营养价值良好，具有广阔的开发及应用前景。
附图说明
36.图1为本发明制备方法的流程图示意图。
具体实施方式
37.以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的前提下，对本发明所作的修饰或者替换，均属于本发明的范畴。
38.若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，实施例中的酶可采用市购产品。下面是实施例中未特别说明的，所用的％均为重量百分比，料液比均指按重量计的比例。
39.实施例1
40.一种骨营养粉的制备方法，其流程如图1所示，包括以下步骤：
41.s1：选取新鲜的牛棒骨、牛膝盖骨(牛窝骨)作为牛骨原料，其中，牛棒骨与牛膝盖骨的重量比为2:1；
42.s2：预处理：洗清并去除上述牛骨中的肌肉和脂肪部分，保留肌腱部分，在肌腱部分，间隔2cm切割数刀，以增加接触面积；
43.s3：脱脂处理：脱脂液中所用的复合脂肪酶包括按重量比计的活性为20万u/g的碱
性脂肪酶40％、活性为20万u/g的低温脂肪酶60％，脱脂液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的10％。
44.将清洗处理的牛骨和脱脂液按料液比1:15投入脱脂罐中，用6mol/l的氢氧化钠溶液调整ph至8.5，维持温度35℃，脱脂处理1.5h；脱脂后的牛骨用42℃热水清洗后备用。
45.s4：低温粗粉碎：控制温度≤-10℃，置于低温粉碎机内，粉碎成≤4mm的粗颗粒。
46.s5：超低温超微粉碎：液氮-196℃超微粉碎，粉碎直径≤40μm。
47.s6：酶解浓缩：
48.所述复合蛋白酶解液的组成组分重量份计为活性为10万u/g的木瓜蛋白酶20份、活性为5万u/g的中性蛋白酶25份、活性为2万u/g的风味蛋白酶10份、活性为20万u/g的碱性蛋白酶25份、活性为4万u/g的胰蛋白酶20份；复合蛋白酶解液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的5％。
49.酶解条件：将超微粉碎后的物料与酶解液按料液比1:10进行配料，用6mol/l氢氧化钠溶液调整ph至6.0，置于40℃下酶解反应4h。
50.放入管式离心机，离心10000rpm持续15min，沉淀留存；上清液进行膜浓缩(超滤膜20nm，膜内滞留》1kd的生物分子)获得膜浓缩液体。
51.将获得的沉淀与膜浓缩液体进行混合，获得骨泥，其中骨泥的含水量70％；
52.s7：冷冻干燥：上述骨泥放入真空冷冻干燥器，将冷阱中的温度降到-60℃时，真空度维持在20pa，开始抽真空进行升华干燥，在干燥仓升温至35℃、真空度达到10pa后粉碎，混合获得骨粉。
53.s8：高温熟化：将上述骨粉在90℃加热20min，即得熟牛骨营养粉制品。
54.由上述制备方法获得的骨营养粉中采用凝胶渗透色谱分析法(gpc)测定牛骨胶原蛋白肽，测得的分子量分布如表1所示：
55.表1
[0056][0057]
实施例2
[0058]
一种骨营养粉的制备方法，其流程如图1所示，包括以下步骤：
[0059]
s1：选取新鲜的牛棒骨、牛膝盖骨(牛窝骨)作为牛骨原料，其中，牛棒骨与牛膝盖骨的重量比为3:1；
[0060]
s2：预处理：洗清并去除上述牛骨中的肌肉和脂肪部分，保留肌腱部分，在肌腱部分，间隔1cm切割数刀，以增加接触面积；
[0061]
s3：脱脂处理：脱脂液中所用的复合脂肪酶包括按重量比计的，活性为20万u/g的碱性脂肪酶50％、活性为20万u/g的低温脂肪酶50％，脱脂液中复合脂肪酶的重量比占其水
溶液的7.5％。
[0062]
将清洗处理的牛骨和脱脂液按料液比1:10投入脱脂罐中，用6mol/l氢氧化钠溶液调整ph至7.5，维持温度40℃，脱脂处理1h；脱脂后的牛骨用40℃热水清洗后备用。
[0063]
s4：低温粗粉碎：控制温度≤-10℃，置于低温粉碎机内，粉碎成≤4mm的粗颗粒。
[0064]
s5：超低温超微粉碎：液氮-196℃超微粉碎，粉碎直径≤40μm。
[0065]
s6：酶解浓缩：
[0066]
所述复合蛋白酶解液的组成组分重量份计为活性为10万u/g的木瓜蛋白酶25份、活性为5万u/g的中性蛋白酶20份、活性为2万u/g的风味蛋白酶15份、活性为20万u/g的碱性蛋白酶30份、活性为4万u/g的胰蛋白酶10份；复合蛋白酶解液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的10％。
[0067]
酶解条件：将超微粉碎后的物料与酶解液按料液比1:5进行配料，用6mol/l氢氧化钠溶液调整ph至7.0，置于45℃下酶解反应3.5h。
[0068]
放入管式离心机，15000rpm离心10min，沉淀留存；上清液膜浓缩(超滤膜20nm，膜内滞留》1kd的生物分子)
[0069]
将获得的沉淀与膜浓缩液体进行混合，获得骨泥(其含水率为75％)；
[0070]
s7：冷冻干燥：上述骨泥放入真空冷冻干燥器，将冷阱中的温度降到-60℃时，真空度维持在30pa，开始抽真空进行升华干燥，在干燥仓升温至40℃、真空度达到8pa后粉碎，混合获得骨粉。
[0071]
s8：高温熟化：上述骨粉在100℃加热15min，即得熟牛骨营养粉制品。
[0072]
由上述制备方法获得的骨营养粉，采用凝胶渗透色谱分析法(gpc)测得牛骨胶原蛋白肽的分子量分布如表2所示：
[0073]
表2
[0074][0075]
实施例3
[0076]
一种骨营养粉的制备方法，其流程如图1所示，包括以下步骤：
[0077]
s1：选取新鲜的牛棒骨、牛膝盖骨(牛窝骨)作为牛骨原料，其中，牛棒骨与牛膝盖骨的重量比为1:1；
[0078]
s2：预处理：洗清并去除上述牛骨中的肌肉和脂肪部分，保留肌腱部分，在肌腱部分，间隔1.5cm切割数刀，以增加接触面积；
[0079]
s3：脱脂处理：脱脂液中所用的复合脂肪酶包括按重量比计的活性为20万u/g的碱性脂肪酶为60％、活性为20万u/g的低温脂肪酶40％，脱脂液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的5％。
[0080]
将清洗处理的牛骨和脱脂液按料液比1:10投入脱脂罐中，用6mol/l氢氧化钠溶液调整ph至8.0，维持温度30℃，脱脂处理2h；脱脂后的牛骨用45℃热水清洗后备用。
[0081]
s4：低温粗粉碎：控制温度≤-10℃，置于低温粉碎机内，粉碎成≤4mm的粗颗粒。
[0082]
s5：超低温超微粉碎：液氮-196℃超微粉碎，粉碎直径≤40μm。
[0083]
s6：酶解浓缩：
[0084]
所述复合蛋白酶解液的组成组分重量份计为活性为10万u/g的木瓜蛋白酶25份、活性为5万u/g的中性蛋白酶15份、活性为2万u/g的风味蛋白酶15份、活性为20万u/g的碱性蛋白酶30份、活性为4万u/g的胰蛋白酶15份；复合蛋白酶解液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的7.5％。
[0085]
酶解条件：将超微粉碎后的物料与酶解液按料液比1:10进行配料，用5mol/l氢氧化钠溶液调整ph至7.5，置于35℃下酶解反应4h。
[0086]
放入管式离心机，12000rpm离心8min，沉淀留存；上清液膜浓缩(超滤膜20nm，膜内滞留》1kd的生物分子)获得膜浓缩液体。
[0087]
将获得的沉淀与膜浓缩液体进行混合，获得骨泥(含水率为80％)；
[0088]
s7：冷冻干燥：上述骨泥放入真空冷冻干燥器，将冷阱中的温度降到-60℃时，真空度维持在25pa，开始抽真空进行升华干燥，在干燥仓升温至45℃、真空度达到5pa后粉碎，混合获得骨粉。
[0089]
s8：高温熟化：上述骨粉在110℃加热10min，即得熟牛骨营养粉制品。
[0090]
由上述制备方法获得的牛骨营养粉，由凝胶渗透色谱分析法(gpc)测得牛骨胶原蛋白肽的分子量分布如表3所示：
[0091]
表3
[0092][0093]
将实施例2所得的骨营养粉进行成分检测，检测采用常规方法，检测成分见表4。
[0094]
表4骨营养粉检测成分
[0095]
[0096][0097]
注释1：蛋白质主要为牛骨胶原蛋白，其与骨钙、骨磷的比例约为3:2:1，符合人体生理需求。
[0098]
注释2：羟脯氨酸hyp是人体胶原蛋白的主要成分，为非必须氨基酸，是多种胶原的降解产物。
[0099]
注释3：微量元素丰富，牛骨中的骨钙与骨磷比例接近生理所需的2:1。
[0100]
注释4：脂肪来源牛骨髓部分，以不饱和脂肪酸为主，含必需脂肪酸。
[0101]
注释5：天然来源的硫酸软骨素含量极高，同时含有氨基葡萄糖和透明质酸。
[0102]
动物实验
[0103]
将上述实施例2制备的骨营养粉进行实验验证，考察其效果。
[0104]
实验动物与分组：切除卵巢的雌性大鼠为去势大鼠，按体重随机分为4组(假手术组j、模型组m、骨营养粉组d、阳性对照组y)，每组10只。
[0105]
其中，假手术组j是指对雌性大鼠进行虚拟手术但不切除卵巢；模型组m指对雌性大鼠进行模拟手术且实质性切除卵巢；空白组即为假手术组；假手术组与模型组，同样是存在外科损伤，但区别在于一个模拟开刀的动作后缝合，一个实质性切除卵巢后缝合。通过两组对照为排除外科损伤的影响因素。仙灵骨葆片用于治疗骨质疏松和骨质疏松症，骨折，骨关节炎，骨无菌性坏死等。j和m组自由取食，d和y组自由取食+特定性外源补充(d骨营养雪花片、y仙灵骨葆片)。
[0106]
喂食方案：实验组去势大鼠按设定剂量(骨营养粉270mg/kg体重，仙灵骨葆片162mg/kg，以灌胃给药方式进行，人与大鼠喂药剂量换算比为1:6.3，按照成年人70kg，应摄入骨营养粉3g/d，仙灵骨葆片1.8g/d；由此推算出大鼠喂药量。每天1次，其他组、其余时间自由取食和饮用纯净水，连续喂养1个月，测量相关指标。结果见表5-8。
[0107]
阳性对照组：仙灵骨葆片，国药集团同济堂(贵州)制药有限公司，批准文号：国药准字z20025357。
[0108]
表5各处理组对骨质疏松大鼠血清alp、hyp的影响
[0109][0110]
与假手术组比较，
△
表示p《0.05显著，
△△
表示p《0.01极显著；与模型组比较，*表示p《0.05的显著性，**表示p《0.01的显著性。
[0111]
表6各处理组对骨质疏松大鼠血清钙(ca)、磷(p)的影响
[0112][0113]
与假手术组比较，
△
表示p《0.05显著，
△△
p《0.01；与模型组比较，*表示p《0.05的显著性，**表示p《0.01的显著性。
[0114]
表7各处理组对骨质疏松大鼠血清骨密度(bmd)的影响
[0115][0116]
与假手术组比较，
△
p《0.05，
△△
p《0.01；与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0117]
表8各处理组对骨质疏松大鼠股骨长度和质量的影响
[0118][0119]
与假手术组比较，
△
p《0.05，
△△
p《0.01；与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0120]
经以上动物实验得出的数据分析可知，骨营养粉组同模型组相比较，骨质疏松大
鼠的血清碱性磷酸酶(alp)和羟脯氨酸(hyp)含量降低，血清ca、p水平升高，骨密度bmd明显升高，股骨长度、质量都有增加，表明喂食骨营养粉有效降低去势大鼠(近年来多利用去势大鼠来构建骨质疏松的动物模型，用于研究骨质疏松疾病的机制。)的骨代谢速率，明显提高其骨密度。骨营养粉组与模型组两组实验同时进行，正好说明了补充骨营养有利于骨密度的提高。
[0121]
对比例1
[0122]
一种骨营养粉的制备方法，其流程如图1所示，包括以下步骤：
[0123]
s1：选取新鲜的牛棒骨、牛膝盖骨(牛窝骨)作为牛骨原料，其中，牛棒骨与牛膝盖骨的重量比为1:1；
[0124]
s2：预处理：洗清并去除上述牛骨中的肌肉和脂肪部分，保留肌腱部分，在肌腱部分，间隔1.5cm切割数刀，并用45℃热水清洗后备用。
[0125]
s3：低温粗粉碎：控制温度≤-10℃，置于低温粉碎机内，粉碎成≤4mm的粗颗粒。
[0126]
s4：超低温超微粉碎：液氮-196℃超微粉碎，粉碎直径≤40μm。
[0127]
s5：酶解浓缩：
[0128]
所述复合蛋白酶解液的组成组分按重量份计为活性10万u/g木瓜蛋白酶20份、活性5万u/g中性蛋白酶15份、活性2万u/g风味蛋白酶15份，复合蛋白酶解液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的10％。
[0129]
酶解条件：将超微粉碎后的物料与酶解液按料液比1:5进行配料，用6mol/l氢氧化钠溶液调整ph至7.5，置于35℃下酶解反应3h。
[0130]
放入管式离心机，离心≥10000rpm，持续10min，沉淀留存；上清液膜浓缩(超滤膜20nm，膜内滞留》1kd的生物分子)。
[0131]
将获得的沉淀与膜浓缩液体进行混合，获得骨泥；
[0132]
s6：冷冻干燥：上述骨泥放入真空冷冻干燥器，将冷阱中的温度降到-60℃时，真空度维持在25pa，开始抽真空进行升华干燥，在干燥仓升温至40℃、真空度达到10pa后粉碎，混合获得骨粉。
[0133]
s7：高温熟化：上述骨粉在100℃加热10min，即得熟牛骨营养粉制品。由上述制备方法获得的牛骨营养粉中牛骨胶原蛋白肽，由凝胶渗透色谱分析法(gpc)测得的分子量分布如表9所示：
[0134]
表9
[0135][0136]
对比例1因缺少脱脂步骤，复合蛋白酶解液未加碱性蛋白酶和胰蛋白酶，明显酶解所得的牛骨胶原蛋白肽的分子量较大，5-10kd的占比较多，而过大的分子量不利于人体吸
收。
[0137]
对比例2
[0138]
一种牛骨营养粉的制备方法，其流程如图1所示，包括以下步骤：
[0139]
s1：选取新鲜的牛棒骨、牛膝盖骨(牛窝骨)作为牛骨原料，其中，牛棒骨与牛膝盖骨的重量比为1:1；
[0140]
s2：预处理：洗清并去除上述牛骨中的肌肉和脂肪部分，保留肌腱部分，在肌腱部分，间隔1.5cm切割数刀，并用45℃热水清洗后备用。
[0141]
s3：脱脂处理：脱脂液中所用的复合脂肪酶包括按重量比计的活性为20万u/g的碱性脂肪酶40％、活性为20万u/g的低温脂肪酶60％，脱脂液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的5％。
[0142]
将清洗处理的牛骨和脱脂液按料液比1:15投入脱脂罐中，用6mol/l的氢氧化钠溶液调整ph至8.5，维持温度35℃，脱脂处理1.5h；脱脂后的牛骨用42℃热水清洗后备用。
[0143]
s4：低温粗粉碎：控制温度≤-10℃，置于低温粉碎机内，粉碎成≤4mm的粗颗粒。
[0144]
s5：酶解浓缩：
[0145]
所述复合蛋白酶解液的组成组分按重量份计为活性10万u/g木瓜蛋白酶15份、活性5万u/g中性蛋白酶15份、活性2万u/g风味蛋白酶20份，复合蛋白酶解液中复合脂肪酶的重量比占其水溶液的10％。
[0146]
酶解条件：将超微粉碎后的物料与酶解液按料液比1:5进行配料，用6mol/l氢氧化钠溶液调整ph至7.5，置于40℃下酶解反应4h。
[0147]
放入管式离心机，离心≥10000rpm，持续15min，沉淀留存；上清液膜浓缩(超滤膜20nm，膜内滞留》1kd的生物分子)。
[0148]
将获得的沉淀与膜浓缩液体进行混合，获得骨泥；
[0149]
s6：冷冻干燥：上述骨泥放入真空冷冻干燥器，将冷阱中的温度降到-60℃时，真空度维持在20pa，开始抽真空进行升华干燥，在干燥仓升温至35℃、真空度达到10pa后粉碎，混合获得骨粉。
[0150]
s7：高温熟化：上述骨粉在90℃加热20min，即得熟牛骨营养粉制品。由上述制备方法获得的牛骨营养粉中牛骨胶原蛋白肽，由凝胶渗透色谱分析法(gpc)测得的分子量分布如表10所示：
[0151]
表10
[0152][0153]
对比例2因缺少超低温超微粉碎这一关键步骤，明显酶解所得的牛骨胶原蛋白肽的分子量大部分超过10kd，原料牛骨既未能粉碎至合适的颗粒直径，不利于人体的营养吸
收，更容易造成资源浪费。
[0154]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。