一种用蜗牛壳制备生物活性物质的方法及其应用与流程

本发明涉及生物，具体涉及一种由蜗牛壳制备生物活性物质及其制备方法和应用。

背景技术：

1、蜗牛属腹足纲陆生软体动物，具有很高的食用和药用价值。中国普遍养殖的品种有白玉蜗牛，其黏液中主要含有胶原蛋白、尿囊素、硫酸软骨素、维生素、天然抗菌肽等活性成分。其中尿囊素可以使皮肤再生；蛋白质和维生素可以增加皮肤的营养，使肌肤更加细腻和光滑。

2、目前对蜗牛产品的应用开发多数集中在食品和化妆品领域，对于蜗牛活性物质的提取主要是集中在对蜗牛活性肽的提取上，例如，《热带病与寄生虫学》2005年第3卷第3期公开发表的“江西巴蜗牛活性成分提取方法的比较研究”报道了天螺多糖提取方法。《中国生化药物杂志》1993年第2期公开发表的“蜗牛酶的研制及应用”报道了从蜗牛消化腺提取蜗牛酶的方法。专利cn201210292779.x公开了一种蜗牛粘液的提取方法提取蜗牛分泌物。专利cn202211184756.7中公开了一种蜗牛活性肽的提取方法，通过将蜗牛壳去除，将所得到的蜗牛肉进行酶解、脱脂，最终浓缩干燥得到活性肽产品。

3、专利cn202211165416.x中公开了一种采用蜗牛壳制作可溶性生物活性钙的方法，其通过将蜗牛壳杂质去除，经粉碎后获得蜗牛壳粉，之后与水混合得到乳液，并将乳液与乳酸混合，经加热、浓缩、过滤得到乳酸钙晶体，再除臭灭菌获得乳酸钙晶体成品

4、以上方法有效利用了蜗牛肉、粘液以及蜗牛壳，但在实际生产过程中，由于蜗牛壳的回收过程难以避免的存在壳肉未分离的情况，如果仅按照壳回收的方式处理，会造成蜗牛壳残留肉的浪费；如果将蜗牛连壳带肉一起混合作为食材，则在实际食用过程中还是会遗留部分可以食用的肉质。因此，如何充分、高效利用蜗牛壳及其残余肉质，并加工出更有价值的产品成为需要解决的问题。

技术实现思路

1、本发明提出一种由蜗牛壳制备活性物质的方法和应用。具体而言，为了实现本发明的目的，本发明拟采用如下的技术方案。

2、在一个方面，本发明提供了一种用蜗牛壳制备活性物质的方法，包括以下步骤：

3、(1)将蜗牛壳内物去除，将包括蜗牛壳在内的剩余物破碎，破碎物过50-100目筛，收集过筛后的剩余物，并测定过筛后剩余物的含水量，控制含水量在10-30％之间；

4、(2)配制好10-12％柠檬酸溶液，缓慢加入至步骤(1)得到的蜗牛壳剩余物中，最终控制柠檬酸溶液与蜗牛壳剩余物的重量比例在2:3-5范围内，之后持续混合10-30min得到初级混合物；

5、(3)将初级混合物用复合菌液发酵，所述复合菌液包括乳杆菌和鼠李糖乳杆菌，两者菌数比为2:0.1-0.5，温度为22-27℃条件下，150-200转/min摇床培养发酵，每隔20min，静置10min，持续24-48h，得到次级混合物1；

6、(4)在次级混合物1中加入微量元素和红参提取物，混匀后之后再次进行发酵，发酵菌液为复合菌液，包括乳杆菌和鼠李糖乳杆菌，两者菌数比为2:0.1-0.5，22-27℃条件下，150-200转/min摇床培养发酵，每隔20min，静置10min，持续24-48h，得到次级混合物2；

7、(5)将次级混合物2进行灭菌处理，之后冷冻干燥处理，得到蜗牛活性物质终产物。

8、在一个实施方案中，所述的步骤(1)将蜗牛壳内物处理得到包括蜗牛壳的剩余物后，即进行破碎，破碎物过60目筛，之后收集滤过后的剩余物，未能够过筛的剩余物再次进行破碎，直至90％以上的剩余物均已过筛，之后测定含水量，控制含水量在10-30％之间。

9、在一个实施方案中，所述的步骤(1)如下：将蜗牛壳内物处理得到包括蜗牛壳的剩余物后，即进行破碎，破碎物过60目筛，之后收集滤过后的剩余物，未能够过筛的剩余物再次进行破碎，直至95％的剩余物均已过筛，之后测定含水量，控制含水量在20％。

10、在一个实施方案中，所述步骤(1)中，蜗牛壳内物去除为简单去肉处理，无需进行多次彻底去除。

11、在一个实施方案中，所述步骤(1)中，蜗牛壳内物去除后，在剩余物中加入5％(w/w)的蜗牛肉。

12、在一个实施方案中，所述步骤(1)中，所述蜗牛壳内物去除采用机械去除。

13、在一个实施方案中，所述步骤(1)中，所述蜗牛壳内物去除采用高温蒸煮后离心去壳。

14、在一个实施方案中，所述步骤(2)配制好10-12％柠檬酸溶液，缓慢加入至步骤(1)得到的蜗牛壳剩余物中，最终控制柠檬酸溶液与蜗牛壳剩余物的重量比例在2:3-5范围内，之后持续混合10-30min得到初级混合物。

15、在一个实施方案中，所述步骤(2)中，配制好10％的柠檬酸溶液，缓慢加入至步骤(1)得到的蜗牛壳剩余物中，最终控制柠檬酸溶液与蜗牛壳剩余物的重量比例为2:5，之后持续混合10-30min得到初级混合物。

16、在一个实施方案中，所述步骤(2)中，配制好11％柠檬酸溶液，缓慢加入至步骤(1)得到的蜗牛壳剩余物中，最终控制柠檬酸溶液与蜗牛壳剩余物的重量比例在2:4范围内，之后持续混合10-30min得到初级混合物。

17、在一个实施方案中，所述步骤(2)中，配制好12％柠檬酸溶液，缓慢加入至步骤(1)得到的蜗牛壳剩余物中，最终控制柠檬酸溶液与蜗牛壳剩余物的重量比例在2:5范围内，之后持续混合10-30min得到初级混合物。

18、在一个实施方案中，所述步骤(2)中，初级混合物的混合时间为10min。

19、在一个实施方案中，所述步骤(2)中，初级混合物的混合时间为15min。

20、在一个实施方案中，所述步骤(2)中，初级混合物的混合时间为20min。

21、在一个实施方案中，所述步骤(2)中，初级混合物的混合时间为30min。

22、在一个实施方案中，所述步骤(3)中的将初级混合物用复合菌液发酵，所述复合菌液包括乳杆菌和鼠李糖乳杆菌，两者菌数比为2:0.4，温度为25℃条件下，150转/min摇床培养发酵，每隔20min，静置10min，持续24h，得到次级混合物1。

23、在一个实施方案中，所述复合菌液包括德氏乳杆菌保加利亚亚种(cgmcc，1.2161)和鼠李糖乳杆菌(cgmcc，1.483)。

24、在一个实施方案中，所述步骤(4)在次级混合物1中加入微量元素、山楂提取物和红参提取物，混匀后之后再次进行发酵，发酵菌液为复合菌液，包括乳杆菌和鼠李糖乳杆菌，两者菌数比为2:0.1-0.5，22-27℃条件下，150-200转/min摇床培养发酵，每隔20min，静置10min，持续24-48h，得到次级混合物2。

25、在一个实施方案中，所述复合菌液与步骤(3)复合菌液相同。

26、在一个实施方案中，所述山楂提取物的制备方式如下：山楂清洗后干燥处理，之后进行粉碎，过50-100目，再过滤，将滤液进行浓缩干燥，得到山楂提取物。

27、在一个实施方案中，所述微量元素包括：铁30-50mg/kg、铜20-60mg/kg、锌50-80mg/kg、锰0.4-1.2mg/kg；所述红参提取物100-500mg/kg；所述山楂提取物为50-120mg/kg。

28、在一个实施方案中，所述红参提取物制备方式如下：

29、取清洗干净的红参，去除芦头，之后先用90-100℃蒸煮20-50min，取滤液，将滤液干燥，得红参提取物。

30、所述步骤(5)中灭菌温度为120-130℃，灭菌时间为40min以上。

31、在一个方面，本发明提供了如前方法所制备的蜗牛活性物质。

32、在一个方面，本发明提供了一种保健组合物，其包含如前所述的蜗牛活性物质。

33、在一个方面，本发明提供了一种添加剂，其包含如前所述的蜗牛活性物质。

34、技术效果

35、本发明具有如下有益效果：

36、(1)发明人意外地发现，在处理蜗牛壳时，并不需要将蜗牛壳彻底清理干净，而是保留一部分蜗牛肉的情况下，能够获得效果更优的提取物，这样的操作不仅高效，而且可以节省时间和人工，通过实验发现，在保留蜗牛肉，甚至是添加部分蜗牛肉的情况下，得钙率反而显著提高。

37、(2)本发明通过添加柠檬酸，并摸索出合适的复合菌组合，在选用特定的菌株时，其带来的短肽和氨基酸明显高于其他实验组，如果选用其他复合菌，则虽然得钙率可能有所增加，但作为中药应用成分、免疫成分的多肽和氨基酸远低于正常组。尤其是发酵方式，采用间断性的发酵，能够带来更好的技术效果，这说明复合菌的选择和发酵方式之间有明显的协同作用。

38、(4)本发明选用了红参和山楂提取物作为重要成分加入到次级混合物1，能够带来更好的防腹泻效果，但在更换两者任意组分时，发现其作用都会明显下降，说明这两者之间存在明显的关联性，这说明本发明所获得的活性物质能够用于改善肠胃功能，具有极好的生理活性，有广阔的应用前景。